参附注射液、高乌甲素注射液诱导白血病细胞株HL-60分化、凋亡的研究

【目的】观察参附注射液及高乌甲素注射液诱导白血病细胞株HL-60分化、凋亡的作用,初步验证温阳法治疗肿瘤的理论。【方法】采用人类急性白血病细胞株HL-60为模型,设参附注射液组(终浓度分别为12.5、25、50、100μL/mL),高乌甲素组(终浓度分别为25、50、100μL/mL),亚砷酸钠对照组(终浓度分别为0.25、2、15μmol/L)及阴性对照组;检测细胞增殖、细胞形态、硝基四氮唑蓝(NBT)还原能力、细胞周期分布、凋亡率等指标。【结果】参附注射液作用后HL-60细胞增殖受抑制,高乌甲素注射液对HL-60的生长无抑制作用;经药物处理60 h后HL-60细胞均出现程度不同以凋亡为主的形态改变;低浓度参附注射液(12.5μL/mL)、高乌甲素注射液(50μL/mL)作用60 h后HL-60细胞NBT还原能力增强,而其他浓度组NBT还原能力反未增强;药物处理60 h后,100μL/mL高乌甲素液及25.50μL/mL参附液流式细胞仪检测直方图上呈现亚二倍体凋亡峰,凋亡率呈不同程度增高。【结论】参附注射液、高乌甲素注射液对人类急性白血病细胞株HL-60具有不同程度的诱导分化和凋亡的双重作用,为温阳法治疗肿瘤提供了一定的理论依据。

人骨髓基质干细胞克隆的培养及其向神经元样细胞的定向诱导分化

目的探讨人骨髓基质干细胞克隆的体外长期培养方法及其生物学特性。方法贴壁生长的基质干细胞以套环法消化分离,扩增培养,待细胞融合,传代培养。检测细胞的生长曲线、表面标记、克隆形成能力和向神经元定向诱导分化的潜能。结果克隆培养的骨髓基质干细胞能传代20代以上,表达CD13、CD29、CD59,不表达CD11、CD14、CD31、CD34、CD45、CD80、CD86、CD117、HLA-DR;传代17代时能诱导分化为神经元样细胞。结论该培养条件能有效扩增骨髓基质干细胞,并保持分化潜能;克隆来源的骨髓基质细胞有相同的生物学特性。

人骨髓基质干细胞克隆对脐血造血干细胞体外扩增作用的研究

探讨人骨髓基质干细胞的克隆化培养及其对体外造血干细胞扩增的影响。方法 :取正常肋骨分离骨髓 ,制备单个核细胞贴壁培养 ,约 5d后取集落样生长的梭形细胞扩增培养、传代。将分选的脐血造血干 /祖细胞接种到克隆培养的人骨髓基质干细胞及其他培养条件液上 ,比较不同培养条件及不同代次骨髓基质干细胞对造血干 /祖细胞扩增能力及集落形成能力的影响。结果 :人骨髓基质干细胞能扩增达 2 0代以上 ,经流式细胞仪检测证实为基质干细胞 ,单纯细胞因子组和细胞因子加基质干细胞组能有效扩增造血细胞 ,而后者有维持长期造血的作用。结论 :该克隆培养方法能有效扩增骨髓基质干细胞 ,培养的细胞有体外支持长期造血的作用。

Tju103和CTLA4-Ig诱导MHC半相合小鼠骨髓移植耐受比较

目的:观察Tju103和CTLA4-Ig各自对MHC半相合小鼠骨髓移植免疫耐受的诱导。方法:半相合供鼠T细胞与受鼠抗原、Tju103(或CTLA4-Ig)共育后与骨髓细胞混合移植,观测移植后受情况。结果:A.单纯照射组:全部小鼠于照射后11d内死于造血衰竭;B.白血病CTX治疗组:全部小鼠于接种白血病细胞后16～23d死于白血病;C.单纯移植组:全部小鼠于移植后21d内死于移植物抗宿主病(GVHD);D.CsA预防组:5只小鼠于移植后8～22d死亡,1只死于白血病,各有2只死于GVHD和感染,5只活过30d;E.Tju103处理组:4只小鼠于移植后9～26d死亡,2只死于GVHD,各有1只死于白血病和感染,6只活过30d;F.CTLA4-Ig处理组:2只小鼠于移植后17～26d死亡GVHD,8只活过30d。结论:Tju103和CT-LA4-Ig均明显延长生存期,降低GVHD发生和严重程度,CTLA4-Ig保留有抗感染和移植抗白血病(GVL)作用,而Tju103没有。

有机碲化合物(AS_(101))抑制白血病细胞增殖的效应

1985年Albeck首选报道了碲的有机化合物具有明显的抗肿瘤作用。1990年我们合成了碲的有机化合物AS_(101),并观察了其抗白血病细胞增殖的效应,旨在探索AS_(101)作为白血病预防及辅助治疗的可能性。

抗CD3/CD45双特异抗体激活的效应细胞对白血病细胞的杀伤效应

目的探讨双特异性抗体用于白血病自体干细胞移植体外净化的可能性。方法以抗ＣＤ３／ＣＤ４５双特异性抗体激活外周血单个核细胞，以ＨＬ６０为靶，用ＬＤＨ方法测定杀伤效应。结果靶效比例不同时，抗ＣＤ３／ＣＤ４５激活的效应细胞对ＨＬ６０细胞都表现出杀伤效应。结论抗ＣＤ３／ＣＤ４５可能用于骨髓／造血干细胞移植的体外净化。

化疗联合单倍体淋巴细胞输注治疗难治性白血病

背景与目的:常规化疗治疗难治性白血病的缓解率低于50%,增加化疗强度常因严重并发症导致患者死亡,我们既往的研究表明单倍体淋巴细胞在体外具有较强杀伤白血病细胞效应。本研究旨在观察常规化疗联合经7.5Gyγ射线照射的单倍体淋巴细胞输注治疗难治性白血病的效果和不良反应。方法:16例难治性白血病患者在化疗后,当白细胞降至最低时平均输注1×108/kg(0.8～1.2×108/kg)经7.5Gyγ射线照射的单倍体淋巴细胞,观察难治性白血病的缓解率和单倍体淋巴细胞输注的不良反应。结果:13例难治性急性非淋巴细胞白血病经该治疗后,11例达完全缓解,2例达部分缓解。3例难治性急性淋巴细胞白血病患者,2例完全缓解,1例无效。全组16例患者的总缓解率为81.2%。单倍体淋巴细胞输注后患者感觉良好,无一例长时间骨髓抑制,无输注相关的移植物抗宿主病。结论:化疗联合单倍体淋巴细胞输注可以提高难治性白血病的缓解率,减少化疗引起的并发症。

造血系统恶性肿瘤自体外周血干细胞动员采集和冻存研究

目的：探讨造血系统恶性肿瘤自体外周血造血干细胞移植（APBSCT）后造血系统重建与采集和冻存自体的外周血干细胞（APBSC）数量及质量的关系。方法：用大剂量化疗加粒细胞集落刺激因子（G-CSF）方法对拟行APBSCT的18例造血系统恶性肿瘤进行动员，CEr3000PLUS血细胞分离机采集APBSC，经程序降温仪处理保存于一196℃液氮中，37～40℃水浴解冻后迅速回输，检测冻存前及解冻后APBSC的锥虫蓝染色拒染率、单个核细胞（MNC）计数、粒-单集落形成单位（CFUGM）集落数及CD34^＋细胞百分率。结果：APBSC的采集时间为化疗后12．6（9～19）d，采集次数2．4（1～3）次，MNC采集率为（138．6±52．32）％。解冻后MNC、CD34^＋及CFU-GM的回收率分别为（91．96±1．37）％，（85．94±0．64）％，（87．69±4．53）％。冻存前及解冻后APBSC的锥虫蓝染色拒染率分别为（96．26±1．33）％，（92．75±2．04）%，二者差别无统计学意义（P〉0．05）。骨髓瘤患者CFU-GM集落数、MNC采集率及CD34^＋细胞百分率较低；化疗疗程〉10次的5例患者MNC采集率较低及CFU-GM生长不良，其中3例出现APBSCT后造血重建延迟。结论：rhG-CSF与大剂量化疗联合的动员方案可缩短采集时间，提高MNC采集率；APBSC的质量和数量有显著的个体差异，与疾病的类型和化疗方案有密切关系，移植前化疗次数增多可影响APBSC的数量和质量，导致APBSCT后造血重建延迟。

自体外周血干细胞移植联合单倍体淋巴细胞输注治疗恶性血液病

为观察自体外周血干细胞移植联合单倍体淋巴细胞输注治疗恶性血液病的疗效和不良反应 ,对完全缓解或部分缓解的恶性血液病患者用中剂量阿糖胞苷 (1.g/m2 × 5天 )或环磷酰胺 (6 0mg/kg× 2天 )联合G CSF方案动员干细胞 ,并经程序降温仪冷冻 ,- 196℃保存。用Bu/Cy或TBI/Cy方案对患者预处理后 ,回输未净化的自体干细胞。当患者白细胞恢复至 1.0× 10 9/L时 ,输注经 7.5Gy照射的单倍体淋巴细胞 (平均 5 .0× 10 7/kg) ,观察患者造血恢复、疾病转归和长期生存率。结果表明 ,12例接受该方案治疗的患者中 ,5例急性非淋巴细胞白血病患者呈持续缓解状态 ,其中 2例无病生存超过 5 0个月 ;3例IV期恶性淋巴瘤患者中 1例长期缓解 ,2例分别于治疗后 4和 6个月复发而死亡 ;1例淋巴瘤 白血病患者持续缓解 18个月 ,2例慢性粒细胞白血病患者也呈持续缓解状态 ,1例多发性骨髓瘤患者持续缓解 36个月后复发 ,但经反应停治疗目前仍处完全缓解状态。平均随访 2 5个月 ,10例无病生存 ,2年无病生存率 83%。单倍体淋巴细胞输注后在部分患者中除血小板恢复延迟外 ,未见严重不良反应。STR PCR示单倍体淋巴细胞输注后 72小时供者淋巴细胞在受者体内消失。结论 :自体干细胞移植联合单倍体淋巴细胞输注可减少急性白血病的复发 。

ADVIA 2120血细胞分析仪白细胞分类与手工分类的比较

为了解ADVIA2120血细胞分析仪白细胞分类计数的分析性能，我们对本院体检中心体检者及血液科住院患者的全血标本进行了血细胞分析仪分类与人工显微镜下分类的比较并对结果进行统计学分析。现报告如下。

影响恶性肿瘤患者造血系统自体外周血造血干细胞数量和质量的因素分析(英文)

背景:造血系统恶性肿瘤的造血重建除与疾病本身、预处理方案、移植后支持治疗手段等相关外,自体外周血造血干细胞的动员、采集和冻存是影响其移植后造血系统顺利重建的关键因素。目的:观察造血系统恶性肿瘤患者自体外周血造血干细胞经动员、采集和冻存后,重新回输至造血系统的重建情况,并分析影响外周血造血干细胞数量和质量的因素。设计:以造血系统恶性肿瘤为对象的病例分析。单位:解放军广州军区广州总医院血液科,南方医科大学珠江医院血液科。对象:选取2000-02/2004-12解放军广州军区广州总医院血液科收治的18例造血系统恶性肿瘤住院患者,年龄16～56岁,其中急性髓性白血病2例,急性淋巴细胞白血病1例,淋巴瘤白血病2例,慢性粒细胞白血病2例,多发性骨髓瘤4例,非霍奇金淋巴瘤7例。粒细胞集落刺激因子(Granocyte,中外制药产品,批号N3G31)。方法:①全部病例均采用对肿瘤有效的联合化疗方案+粒细胞集落刺激因子进行动员。联合化疗方案:白血病患者第1～3天每隔12h给予阿糖胞苷2g/m2,第1～5天给予足叶乙甙200mg/m2或氟达拉宾50mg/m2。多发性骨髓瘤患者给予阿糖胞苷方案同上,第1～2天给予环磷酰胺1g/m2。淋巴瘤患者第1～2天给予环磷酰胺2g/m2。各类型患者化疗后白细胞降至1.0×109L-1以下时开始进行粒细胞集落刺激因子动员,5μg/(kg.d)皮下注射至采集结束。②当白细胞恢复至(4.0～10.0)×109L-1时开始采集外周血造血干细胞,单个核细胞计数≥4.0×108/kg或CD34+细胞≥2.0×106/kg时结束采集,经程序降温仪处理置入-196℃液氮中保存,37～40℃水浴解冻。③患者病灶部位行局部照射预处理,200cGy/次,5次/周,连续4周,总剂量40Gy。结束后48h回输外周血造血干细胞(55.3±28.7)mL,回输日距采集日平均为(56.5±22.3)d。全部患者于干细胞移植后第1天起皮下注射粒细胞集落刺激因子300μg/d,至中性粒细胞≥0.5×109L-1时停止。检测冻存前及解冻后自体外周血造血干细胞的锥虫蓝拒染率、单个核细胞计数、粒-单系祖细胞集落数及CD34+细胞百分率。主要观察指标:①自体外周血造血干细胞的采集情况。②冻存后自体外周血造血干细胞存活率及相关指标检测。③自体外周血造血干细胞移植后造血系统重建情况。结果:18例造血系统恶性肿瘤患者全部进入结果分析。①18例患者自体外周血造血干细胞平均采集时间为化疗后12.6d,采集次数为1.9次,采集第1天白细胞总数为(8.93±1.27)×109L-1,单个核细胞采集率为(138.33±28.61)%。②冻存后18例自体外周血造血干细胞标本锥虫蓝拒染率与冻存前基本相似[(96.26±1.33)%,(92.75±2.04)%,P>0.05]。解冻后单个核细胞、CD34+、粒-单系祖细胞回收率分别为(91.96±1.37)%,(85.94±0.64)%,(87.69±4.53)%。骨髓瘤患者的单个核细胞采集率、CD34+细胞百分率及粒-单系祖细胞集落数均明显低于白血病和淋巴瘤患者(t=2.524～3.268,P<0.05)。③移植后15d,15例患者中性粒细胞恢复至≥0.5×109L-1;移植后20d,血小板恢复至≥20×109L-1。化疗疗程>10次的5例患者粒-单系祖细胞生长不良,为(18.67～26.82)×105/kg,其中3例出现自体外周血造血干细胞移植后造血重建延迟。结论:①重组粒细胞集落刺激因子与大剂量化疗联合的动员方案可缩短外周血造血干细胞采集时间,提高单个核细胞采集率。②移植前化疗次数增多可影响自体外周血造血干细胞的数量和质量,导致造血重建延迟。

甲基强的松龙冲击治疗系统性红斑狼疮12例疗效分析

系统性红斑狼疮(SLE)为多脏器损害的自身免疫性疾病，多采用以王肾上腺皮质激素为主的免疫抑制剂治疗，包括强的松、环磷酰胺、甲基强的松龙及环孢索A等。近年来我们采用大剂量甲基强的松龙冲击治疗SLE取得了较好疗效，现将结果报告如下。

MHA方案治疗复发与难治性急性髓系白血病疗效观察

耐药是白血病治疗过程中的一个首要问题，包括原发耐药和继发耐药，也是导致白血病难治的根本因素。目前尚无可靠的办法解决耐药问题，多采用更换化疗药物或化疗方案治疗难治性白血病。我们将米托蒽醌（Ｍ）与三尖杉酯碱（Ｈ）、阿糖胞苷（Ａ）联合，组成ＭＨＡ方案治疗复...

骨髓细胞形态学在典型和不典型慢性粒细胞白血病鉴别中的作用

目的 探讨骨髓细胞形态学在典型慢性粒细胞白血病 (CML)和不典型慢性粒细胞白血病 (aCML)鉴别中的作用。方法 回顾性观察了 5 2例CML和 2 3例aCML患者的骨髓涂片 ,分别计数各类细胞占有核细胞的百分率 ,并分别观察红系、粒系和巨核系病态造血情况。结果 CML幼红细胞数显著小于aCML(P <0 0 1) ,CML幼粒细胞数显著高于aCML(P <0 0 1) ,CML嗜碱性粒细胞、嗜酸性粒细胞、单核细胞数显著高于aCML(P <0 0 5 )。原始细胞数两者无差异 (P >0 0 5 )。两者红系、粒系和巨核系均存在不同程度的病态造血。结论 骨髓细胞形态中幼粒细胞、嗜碱性粒细胞、嗜酸性粒细胞及单核细胞计数在鉴别CML和aCML中有一定的参考价值。

小剂量肝素为主治疗DIC的体会

播散性血管内凝血(DIC)是发生于多种疾病中的一种严重的出血综合征,病情凶猛,死亡率高。现报道我们采用小剂量肝素为主治疗DIC的体会。1 临床资料1.1 病例及原发疾病:男性9例,女性14例,年龄最小为出生后1天,最大57岁。原发病包括恶性肿瘤3例,急性白血病4例,胎盘早剥2例,羊水栓塞4例(其中产前1例,阴道分娩后1例。

静脉滴注丙种球蛋白治疗原发性血小板减少性紫癜9例报告

原发性血小板减少性紫癜(ITP)是与免疫机制有关的自身免疫性疾病。急性者血小板数多在20×10~9/L以下,易发生严重的出血,颅内出血的发生率为0.5～10％。我们用静注丙种球蛋白对9例急性患者进行治疗,现报告如下。

人自然杀伤细胞抑制性受体P58.1基因的克隆与鉴定

目的 克隆及鉴定P58.1基因。方法 采用RT-PCR技术,从正常人外周血单个核细胞中扩增P58.1基因全长cDNA,经酶切后构建重组克隆载体,测序鉴定。结果 RT-PCR获得预期的扩增产物P58.1全长cDNA,成功构建pSPORT1-P58.1重组克隆载体,酶切、酶谱分析与预期结果相符。DNA测序结果与GenBank登记的人P58.1cDNA全长碱基序列一致。结论 pSPORT1-58.1重组克隆载体构建成功;P58.1基因序列与文献报道一致,为下一步构建表达载体和基因转染等工作打下良好的基础。

HELLP综合征的血液学特点(附病例报告1例)

1 病例报告 患者,30岁,孕2产1,因停经8个月,头晕眼花及右上腹隐痛1天、全身抽搐2次于96年5月5日入院。病人抽搐时四肢强直、牙关紧闭、口吐白沫、意识丧失,呼吸暂停,持续约1分钟后自行缓解。入院查体:T37.0℃,P108次/分,BP27/21kPa,神志清楚,面色苍白,皮肤无出血点或瘀斑,巩膜无黄染,口腔粘膜少许血迹,心肺无异常,腹部隆起,右上腹轻压痛,肝脾肋下未及,肝区轻叩痛,宫底脐上3指,胎位LOA,胎心音不清,无宫缩,双下肢轻度浮肿。化验检查:WBC11.5×10~9/L,NO.85,Hb106g/L,