聚合酶链式反应(PCR)在医药方面的应用

聚合酶链式反应PCR是近年来发展的一种新技术,具有快速、灵敏、简便、特异等优点。PCR包括三个循环过程:(1)靶EDNA的变性;(2)靶DNA-引物的复性;(3)引物延伸。本文对PCR在医药方面的应用进行了综述。

聚合酶链式反应(PCR)在医药方面的应用

聚合酶链式反应(PCR)是近年来发展的一种新技术,具有快速、灵敏、简便和特异的优点。PCR 包括3个循环过程:(1)靶 DNA 的变性;(2)靶 DNA—引物的复性;(3)引物的延伸。本文简述 PCR 的作用原理、制备方法、用于 PCR 的 DNA 聚合酶,以及近年来 PCR 在医药方面的应用。

用木瓜蛋白酶在两相系统中合成二肽甜味剂Aspartame

研究了多种因素对木瓜蛋白酶在水－有机溶剂两相反应体系中合成二肽甜味剂Ａｓｐａｒｔａｍｅ能力的影响，结果表明，在本实验条件下，水与乙酸乙酯的比例为６：１００～７：１００之间为宜；反应最适ｐＨ为５．２；最适温度３７℃；反应时间为９ｈ；酶用量为１００～１２０ｍｇ／ｍｍｏｌ底物；Ｌ－ＰｈｅＯＭｅ与ＣＢＺ－Ｌ－Ａｓｐ的摩尔比为１：１。

不同来源木瓜蛋白酶合成Aspartame前体能力的研究

研究了Ｓｉｇｍａ公司、Ｍｅｒｃｋ公司和广州远天酶制剂厂生产的木瓜蛋白酶和从木瓜青果中提取的木瓜蛋白酶在水－乙酸乙酯两相反应系统中合成二肽甜味剂Ａｓｐｅｒｔａｍｅ前体（Ｐ－ＡＰＭ）的能力，并以ＨＰＬＣ（流动相为乙腈－水＝４５：５５，检测波长２６０ｎｍ，流速１ｍｌ／ｍｉｎ）和ＴＬＣ（硅胶ＧＦ＿（２５４）板，展开剂为正丁醇－醋酸－水＝３：１：１，显色剂为１％茚三酮丙酮液）对Ｐ－ＡＰＭ进行检测，实验结果表明，Ｐ－ＡＰＭ与以嗜热蛋白酶催化合成的Ａｓｐａｒｔａｍｅ中间产物极为相似。不同来源的木瓜蛋白酶由于其酶活力不同，对Ｐ－ＡＰＭ的合成和水解能力也有差异，选择国产的木瓜蛋白酶合成Ａｓｐａｒｔａｍｅ，为酶法合成二肽甜味剂提供了可探讨的途径。

薄层层析和反相高效液相色谱检测木瓜蛋白酶催化合成的Aspartame及其中间产物

本文报道以ＴＬＣ和ＨＰＬＣ法检测以木瓜蛋白酶在水－乙酸乙酯两相反应体系中合成的Ａｓｐａｒｔａｍｅ及其中间产物（Ⅰ）（Ⅱ）。ＴＬＣ条件为：展开剂（正丁醇：冰醋酸：水＝３：１：１），展开时间（４～５ｈ），检测（荧光检测２５３．７ｎｍ，１％茚三酮丙酮溶液显色）。ＨＰＬＣ条件为：流动相（乙腈：水＝４５：５５），流速１ｍｌ／ｍｉｎ，检测（紫外检测２６０ｎｍ），进佯量２０ｕｌ，灵敏度６，纸速１～４ｍｍ／ｍｉｎ，分析周期１０ｍｉｎ。该方法简便、准确、灵敏度高。用该方法也证实以木瓜蛋白酶催化合成的Ａｓｐａｒｔａｍｅ及其中间产物（Ⅱ）与以嗜热蛋白酶（Ｔｈｅｒｍｏｌｙｓｉｎ）催化合成的Ａｓｐａｒｔａｍｅ及其中间产物（Ｃｂｚ－Ａｓｐ－ＰｈｅＯＭｅ）完全一致。

固定化嗜热菌蛋白酶合成前体α-ZAPM的研究

以固定化嗜热菌蛋白酶催化合成天苯二肽前体α- ZAPM,再脱去保护基后得到天苯二肽。固定化优化条件为 :海藻酸钠起始浓度 4 % ,戊二醛 0 .5% ,交联时间 10 min,凝胶球直径 2 .0至 2 .5mm。固定化酶最适反应 p H为 7.0 ,最适反应温度为 30℃。固定化酶对 p H和温度的稳定性明显提高 。