F107(F18_(ab))菌毛单抗的制备、鉴定与初步应用

将大肠杆菌 10 7/ 86和水肿病菌株在TSB中培养 ,鉴定其表达F10 7菌毛 ,前者作为免疫原免疫BABL/C小鼠 ,后者作为检测抗原包装酶标板。细胞融合后经ELISA和玻板凝集检测 ,得到一株阳性杂交瘤细胞株 ,命名为F7_1。该细胞株制备的腹水ELISA效价为 :2 16,试管凝集价为 :1∶5 12 0 ,在免疫印迹中可与提取的F10 7菌毛特异性条带发生反应。利用此单抗检测表明 ,91%的水肿病菌株表达F10

致仔猪水肿病大肠杆菌快速检测方法的建立

将水肿病菌株S在TSB培养基中连续传代两次 ,离心后用生理盐水洗涤 ,制成1×108的细菌悬液。菌液倍比稀释 ,分别与适当浓度的F107菌毛单抗作玻板凝集、间接ELISA、斑点 -ELISA试验 ,结果表明 ,当单抗100×稀释时 ,三种方法的细菌最小检出量分别为2.5×107、6×105、1×103,斑点 -ELISA最敏感。从患水肿病的仔猪小肠黏膜上刮取黏液 ,溶于PBS中 ,将此溶液一部分稀释后在麦康凯平板上菌落计数 ,另一部分作为抗原做斑点 -ELISA。结果显示致病菌在小肠黏膜上大量存在 ,斑点 -ELISA能敏感、快速的检测出来。这一检测方法的建立 ,为其它大肠杆菌病的诊断提供了较好的借鉴。

类志贺毒素II型变异体B亚单位单抗的制备和初步应用

将表达类志贺毒素II型变异体B亚单位融合蛋白的菌株ppSLT-IIeB在含氨苄青霉素的2×YTA培养基中培养,至对数生长期时加入IPTG诱导,诱导的重组菌超声波裂解后,经聚丙烯酰胺凝胶电泳证明其已表达融合蛋白。用谷胱苷肽活化的Sepharose4B亲和层析柱纯化融合蛋白,测定纯化蛋白的浓度,免疫BALB/C小鼠,细胞融合后经ELISA检测,得到一株阳性杂交瘤细胞,命名为7C3-1,制备的单抗腹水ELISA效价为210,Westernblet结果表明此单抗仅与融合蛋白反应,而与载体蛋白不反应。利用此单抗检测18株水肿病菌株,发现有13株产类志贺毒素II型变异体。

SLT-IIeA基因在原核系统中的克隆与表达及其鉴定

PCR扩增并克隆在 p UC1 8质粒中的类志贺样毒素 II型变异体 ( SL T-IIe) A亚单位基因片段切出 ,按预定阅读框架插入到原核性表达载体 p GEX-6p-1的谷胱甘肽 S-转移酶( GST)基因的下游 ,获得重组质粒 pp GEX-A。重组质粒导入大肠杆菌 BL2 1 ,用 IPTG进行诱导表达 ,通过对重组大肠杆菌的菌体裂解物的SDS-PAGE电泳分析及 Western-blot鉴定 ,表明重组菌能大量表达融合蛋白形式的 SL T-IIe A,即 SL T-IIe A蛋白与谷胱甘肽转移酶相连组成的蛋白质。本实验的研究结果 ,为进一步研究 SL T-IIe的生物学特性及研制仔猪水肿病亚单位苗提供了有效的生物材料。

致仔猪水肿病大肠埃希氏菌F_(107)菌毛抗原的提取及鉴定

将致仔猪水肿病大肠埃希氏菌 10 7/ 86菌株在TSB、TSA培养基上传代 ,使之表达F10 7菌毛 ,大量收集菌毛化的细菌 ,利用热洗脱法提取菌毛抗原。粗提菌毛抗原经聚丙烯酰胺凝胶电泳可见一条约 15ku的条带 ,以染色凝胶为对照 ,将未染色凝胶上的菌毛抗原条带切下 ,进行提纯。经免疫印迹反应 ,证实其条带为F10

F107(F18ab)菌毛的提取、提纯及鉴定

将致仔猪水肿病菌株107/86在TSB、TSA培养基上传代,使之表达F107菌毛,大量收集菌毛化的细菌,利用热洗脱法提取菌毛。粗提菌毛经15%的聚丙烯酰胺凝胶电泳可见一条约15ku的条带,以染色的凝胶为对照,将未染色凝胶上的菌毛条带切下,捣碎,加生理盐水,37℃,2h后离心,吸出上清再次电泳,可见提纯的菌毛条带。用针对F107菌毛的单抗做免疫印迹反应,证实此条带为F107菌毛蛋白。

志贺样毒素II型变异体A亚单位单抗的制备

将表达志贺样毒素II型变异体A亚单位重组蛋白的菌株ppSLT -IIeA在含氨苄青霉素的 2×YTA培养基中培养 ,至对数生长期时加入IPTG诱导 ,诱导的重组菌超声波裂解后 ,经聚丙烯酰胺凝胶电泳证明其已表达重组蛋白。用谷胱苷肽活化的Sepharose 4B亲和层析柱纯化重组蛋白 ,测定纯化蛋白的浓度 ,免疫BALB/c小鼠 ,细胞融合后经ELISA检测 ,得到一株阳性杂交瘤细胞 ,命名为A2 _D3 ,制备的单抗腹水ELISA效价为 2 4log2 ,免疫印迹结果表明此单抗仅与重组蛋白反应 ,而与载体蛋白不反应。利用此单抗检测 13株水肿病菌株 。

信息技术与小学语文融合教学

信息技术的发展与互联网的普及,给教学注入了无穷的生机。把各种信息技术手段与信息资源完美地融合到小学语文学科教学中,充分利用多媒体技术、电子白板、微课、云教学平台、网络教学资源等进行教学,能有效激发学生潜在的学习动机和求知欲望,让他们积极主动地获取知识,从而增强课堂效益。

新时期高职教师队伍建设面临的困惑及对策

高职教师是集理论与实践于一身的教师群体，高职教师具有特殊性。他们素质的高低、职业发展的状况如何，直接影响高职教育的质量。但是，我国目前高职教师队伍建设现状面临的困惑，通过分析教师队伍建设现状及成因，提出了相应对策，实践证明，结构优化、专业水平和教学能力高的教师队伍，是高职教育持续发展的不竭动力。是探索和形成高职教育类型特征的根本保证。