抗人肿瘤相关核仁抗原单克隆抗体的建立

本研究以A549细胞系和人肺腺癌组织细胞核仁为抗原,建立了7株McAbs,并用ELISA技术对其反应性进行了初步分析。结果表明:各株McAb均能与人癌细胞核仁起反应,但各自的抗原却不尽相同。MA1、MA2、MA3和MA6株的抗原可能是HMNA类物质;MA4、MAS和ML1株的抗原可能是属于核仁的正常成份,但优势表达于癌细胞中。本组抗体的建立,对于研究肿瘤细胞核仁的分子组成和生物学功能,并进而利用HMNA为临床肿瘤病理服务可能有重要意义。

一种分子量为24kd的HMNA之鉴定及其部分特性

为探讨抗HMNA McAb MA2相应抗原的一些特性,本研究应用免疫印迹、ELISA、血清饥饿试验和IF染色等技术进行了分析。结果表明:相应抗原的分子量为24Kd(名之为P24),其抗原性不受DNase和RNaseⅠ消化的影响,而胰蛋白酶消化能明显降低其反应,表明其抗原决定簇是蛋白质;P24除不能在A549细胞膜表面蛋白检出外,胞浆和核浆中有少量存在,其主要是表达于核仁中;Hela细胞血清饥饿96小时后,P24在核仁中消失,回饲血清1小时又复出现。P24在分子大小、表达时相和分布上有别于其他已鉴定的HMNA和核仁蛋白,是一种新的HMNA。

人恶性肿瘤相关核仁抗原P_(24)在肿瘤病理诊断中的意义探讨

为初步探讨HMNA P_(24)在肿瘤病理学中的意义,本研究用抗P_(24) McAb MA_2以间接免疫荧光和ABC法对552例人体组织标本进行染色观察。结果表明,P_(24)可在97％的各种人恶性肿瘤细胞核仁中检出,而在98.6％的良性肿瘤组织核仁阴性;不典型增生组织有50％核仁染色阳性;正常人体组织和非肿瘤性病变组织细胞核仁全部阴性。说明P_(24)有较高的恶性肿瘤特异性,是区别良恶性肿瘤的较为有效的肿瘤标志物。

肿瘤细胞核仁抗原的细胞生物学功能

核仁是调节细胞增殖与生长的重要结构,在肿瘤的发生发展过程中也有重要作用。核仁蛋白成份分析显示,正常核仁的一些蛋白质在癌细胞中不复存在,而癌细胞核仁却出现了一些正常细胞所没有的蛋白质。因为这些蛋白质具有较强的免疫原性,故称肿瘤细胞核仁抗原(Tumor Nucleolar Antigens,简称TNA),其中只见于人恶性肿瘤细胞者又称为人恶性肿瘤相关核仁抗原(Human Malignancy-associated Nucleolar Antigens,简称HMNA)。

细胞繁殖及分化过程中核仁HMNA P24含量的变化

为探讨人恶性肿瘤相关核仁抗原P24的细胞生物学功能,本研究将Hela细胞进行同步化培养和分化的诱导,以免疫荧光显微分光光度技术测定在细胞周期和细胞分化过程中核仁P24含量的动态变化。结果表明:在G1早期到S早期,核仁P24含量大致恒定;S中期明显降低,随后迅速回升,至G2期达高峰。在用正丁酸钠诱导Hela细胞发生细胞分化过程中,核仁P24含量不断降低,72小时后接近消失。提示P24的表达与细胞的负分化平行,其在核仁中出现,尤其是在GO到G1期,对于癌细胞的快速增殖可能是必需的或重要的。