松树皮原花素的抗辐射作用

目的和方法 :采用分光光度法及电泳法 ,以紫外线 (ultraviolet,UV)照射所致的红细胞 (RBC)溶血试验、肝匀浆脂质过氧化产物丙二醛 (MDA)水平、受照质粒DNA损伤程度为指标测定松树皮原花素的抗辐射作用。结果 :松树皮原花素能显著抑制受照人RBC溶血作用 ,明显抑制受照小鼠肝匀浆组织脂质过氧化反应 ,并能明显减轻受照质粒PUC18DNA单链的断裂程度。结论 :松树皮原花素能明显减轻辐射引起的自由基损伤 。

异丙嗪对下丘脑细胞内游离钙浓度的影响

目的：观察异丙嗪（ｐｒｏｍｅｔｈａｚｉｎｅ，ＰＭＺ）对下丘脑细胞内游离钙浓度（［Ｃａ２＋］ｉ）的影响。方法：以酶法制备家兔下丘脑细胞悬液，运用钙指示剂Ｆｕｒａ－２／ＡＭ作为细胞内游离钙的荧光探针测定下丘脑细胞［Ｃａ２＋］ｉ。结果：１）ＰＭＺ（０４６ｍｍｏｌ／Ｌ）使下丘脑［Ｃａ２＋］ｉ显著升高，且在一定的剂量范围内呈量效关系。２）事先向细胞悬液中加入钙通道阻滞剂维拉帕米可明显抑制ＰＭＺ诱导的［Ｃａ２＋］ｉ升高，但不能完全阻断ＰＭＺ的这种作用。结论：上述结果提示ＰＭＺ可引起下丘脑［Ｃａ２＋］ｉ升高，钙通道开放导致细胞外钙内流是ＰＭＺ引起下丘脑［Ｃａ２＋］ｉ升高的机制之一。

聚乙烯亚胺介导的生存素反义核酸提高肝癌细胞对化疗药物的敏感性

目的:探讨聚乙烯亚胺(polyethyleneimine,PEI)介导的生存素(survivin)反义核酸(antisense-oligonu-cleotides,ASODN)联合5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)、三氧化二砷(arsenic trioxide)或羟基喜树碱(hydroxy-camptothecine,HCPT)对人肝癌SMMC-7721细胞增殖的抑制作用。方法:单独应用不同浓度的5-FU,As2O3,HCPT,或这些药物分别与survivin ASODN或PEI-ASODN联合应用,作用于SMMC-7721细胞,采用WST-8法检测SMMC-7721细胞的增殖抑制率,并计算药物作用的IC50。以金正均的概率和法进行协同作用分析。结果:不同浓度的5-FU,As2O3或HCPT联合PEI-ASODN(ASODN终浓度为0.125μmol/L)均明显降低这些化疗药物的IC50,提高SMMC-7721细胞对5-FU,As2O3或HCPT的敏感性,增敏倍数分别为36.1、4.16、18.8。金正均Q值法分析表明,5-FU,As2O3或HCPT与PEI-ASODN联合使用,均表现出协同作用。结论:PEI介导的低浓度的生存素反义核酸可提高人肝癌细胞SMMC-7721对5-FU,As2O3和HCPT的敏感性,PEI介导的生存素反义核酸与5-FU联合的作用效果最佳。

蛋白激酶Cα反义核酸诱导肺癌A549细胞凋亡

目的探讨聚乙烯亚胺(PEI)介导的人蛋白激酶Cα(PKCα)基因反义寡核苷酸(ASODN)对人肺癌A549细胞凋亡的影响。方法以PEI介导PKCαASODN转染A549细胞,设空白对照组、PEI组、PEI-ASODN组(PKCαASODN终浓度分别为1.25、1.50μmol/L),通过Hoechst33258染色和电镜检测,观察细胞凋亡的形态学改变;设空白对照组、PEI组、PEI-随机寡核苷酸(RODN)组(RODN终浓度1.50μmol/L)、PEI-ASODN组(PKCαASODN终浓度分别为1.00,1.25,1.50μmol/L),采用PI单染和AnnexinⅤ/PI双染流式细胞术,检测细胞亚二倍体峰和早期凋亡率。结果Hochest33258染色和电镜检测均可见PKCαASODN转染组细胞有核固缩、边集和裂解等凋亡形态学变化。流式细胞术示:PKCαASODN转染组细胞出现了明显的亚二倍体峰和早期凋亡细胞群,与空白对照组、PEI或PEI介导的RODN转染组相比,差异有统计学意义(P<0.05),并呈浓度依赖性效应。结论PEI介导的PKCα反义核酸能诱导A549细胞凋亡。

成岩作用对四川盆地广安构造须家河组储层物性的影响

通过对广安构造须家河组碎屑岩储层的常规薄片及铸体薄片镜下鉴定,结合区域地质、钻井、测井、物性分析等资料,从储层的原始组份及粒度、成岩作用及其顺序等方面,分析了广安构造须家河组储层物性的主要特征,研究了不同成岩作用对储层物性的影响,提出了该区溶蚀作用、构造破裂作用及部分胶结作用对改善储层物性具有建设性的作用,而压实-压溶作用和胶结作用则对储层物性具有破坏性的作用,其交代作用对储层物性影响不明显。

医学生物化学实验教学探索

生物化学实验是训练学生掌握生物化学基本知识和基本技能的重要手段,本文就如何提高生物化学实验教学质量进行了探讨。

PKCα反义核酸对肺癌A549细胞增殖的影响

目的探讨聚乙烯亚胺(PEI)介导的人蛋白激酶Cα(PKCα)基因反义寡核苷酸(ASODN)对人肺癌A549细胞生长增殖及PKCα基因表达的影响。方法以PEI介导PKCα ASODN,随机寡核苷酸(RODN)分别转染A549细胞,采用WST法和克隆形成抑制实验分析细胞生长增殖抑制效果;RT-PCR检测PKCα mRNA的表达水平;Western blotting检测PKCα蛋白的表达水平。结果PEI介导的PKCα ASODN转染A549细胞后,细胞生长增殖和克隆形成均受到抑制(P<O.05),并呈浓度依赖关系,其抑制率明显高于PEI或PEI介导的RODN组;RT-PCR和Western blotting结果均表明:PEI介导的PKCα ASODN转染A549细胞能明显抑制PKCα的表达,与空白对照组、PEI或PEI介导的RODN转染组相比,有统计学差异(P<0.05)。结论PEI介导的PKCα反义核酸能下调PKCα基因的表达,显著抑制A549细胞生长和增殖。

PKCα siRNAs有效序列的筛选及其对肺癌A549细胞的作用

目的探讨人蛋白激酶Cα(PKCα)小干扰RNA(siRNA)对肺癌A549细胞生长增殖及凋亡的影响。方法设计并化学合成6条PKCα siRNAs,转染A549细胞,通过改良MTT法及RT-PCR筛选;对3条效果较好的PKCα siRNAs,进一步采用克隆形成抑制实验、Hoechst 33258染色、PI单染和AnnexinⅤ/PI双染以及Western blot检测。结果6条PKCα siRNAs均显著下调了PKCα mRNA水平;除No.5siRNA外,其他5条siRNA均显著地抑制了A549细胞增殖(P<0.05)。3条效果较好的PKCα siRNAs转染组PKCα蛋白的表达显著下调,克隆形成抑制率、亚二倍体百分率和早期凋亡细胞比例均显著高于对照组(P<0.05),并出现了核固缩、边聚和裂解等凋亡形态学变化。结论本实验发现3条能显著抑制A549细胞增殖并诱导其凋亡的PKCα siRNAs。

生姜的化学成分及生物活性研究概况

生姜的化学组成可归属为挥发油、姜辣素和二苯基庚烷三大类成分;生姜具有提高消化酶活性、保护胃粘膜细胞、抑制血小板凝聚、降血脂、抗肿瘤、抗运动病、消除自由基、抗氧化、防腐抑菌等多方面生物活性。

丝瓜络对实验性高血脂大鼠的降血脂效应

目的 :探讨中药丝瓜络 (RLF)对实验性高血脂大鼠的降血脂效果 ,以及对实验大鼠体重的影响。方法 :雄性SD大鼠 32只 ,随机均分为 4组 :对照 (A)组、高脂模型 (B)组、高脂 +丝瓜络 (C)组、丝瓜络 (D)组。A组和D组大鼠每日饲基础饲料 ,B组和C组给予高胆固醇饲料 ,C组和D组的大鼠每日经胃灌服丝瓜络煎剂 10mL/kgBW ,A组和B组为每日每只经胃灌服饮用水 2mL ,实验周期为 14d。结果 :(1)实验后B组大鼠的血清胆固醇 (TC)和甘油三脂 (TG)分别为 (4 6 3± 1 10 )和 (1 13± 0 15 )mmol/L ,显著高于对照 (A)组的TC[(1 5 7± 0 13)mmol/L]和TG[(0 6 8± 0 0 9)mmol/L](P <0 0 1) ,而C组的TC[(3 71± 0 4 7)mmol/L]和TG[(0 77± 0 2 2 )mmol/L]则显著低于B组 (分别为P <0 0 5及P <0 0 1) ;(2 )D组大鼠的TC ,实验后较给药前有显著降低 (P <0 0 1) ;(3)在实验的第 8d ,B组大鼠的血清高密度脂蛋白胆固醇 (HDL -C)为 (0 6 1± 0 11)mmol/L ,显著低于A组 [(0 91± 0 14 )mmol/L](P <0 0 1) ,而C组HDL -C[(0 95± 0 0 8)mmol/L]与A组没有显著差异 (P >0 0 5 ) ;(4 )B组大鼠体重在实验后显著增加 ,而C组的体重在变化与A组相似。结论 :丝瓜络对实验性高血脂大鼠有明显的降血脂效应 。

茶多酚对酒精诱导的小鼠肝脂质过氧化和血清ALT活性变化的影响

目的 :研究茶多酚 (TP)对酒精性肝损伤的防治作用。方法 :通过离体和整体实验 ,采用分光光度法和血清生化检测法 ,检测肝组织脂质过氧化产物丙二醛 (MDA)水平和血清谷丙转氨酶 (ALT)的活性。结果 :离体实验中 ,TP +酒精组肝MDA水平明显低于生理盐水 +酒精组 (P <0 0 1 )。整体实验中 ,TP +酒精组小鼠肝脏MDA水平和血清中ALT活性均显著低于生理盐水 +酒精组 (P <0 0 5)。此外 ,灌酒精 1h后再给TP组 ,小鼠肝脏MDA含量也明显低于酒精 +生理盐水组 (P <0 0 1 )。结论 :茶多酚能抑制酒精引起的小鼠肝组织MDA水平和血清ALT活性的升高 。

小檗碱预防脂多糖性肝损伤的机制研究

目的:观察小檗碱对脂多糖性肝损伤的防治效果及其作用机制。方法:将雄性昆明小鼠随机分成4组:①对照组:用蒸馏水灌胃(0.01 mL/g),每天1次,共5 d,第5 d灌胃后1 h,腹腔注射生理盐水(0.02 mL/g);②小檗碱组:用5 g/L中性硫酸小檗碱灌胃(0.01 mL/g),每天1次,共5 d,第5 d灌胃后1 h,腹腔注射生理盐水(0.02mL/g);③脂多糖(LPS)组:除腹腔注射LPS(0.02 mL/g,28 mg/kg)外,其余处理同①;④小檗碱防治组:除腹腔注射LPS(0.02 mL/g,28 mg/kg)外,其余处理同②。腹腔注射后2 h和10 h去眼球取血,分别检测各组小鼠血清中TNF-α的含量以及丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)的活性;另于腹腔注射后24 h取肝组织标本,观察各组小鼠肝脏的组织学和超微结构的变化,同时测定肝组织MDA的含量及SOD的活性。结果:LPS组小鼠血清ALT、AST活性明显高于对照组(P<0.01),而小檗碱防治组小鼠血清ALT和AST活性明显低于LPS组(P<0.05)。腹腔注射LPS后2 h,LPS组小鼠血清中TNF-α含量明显高于小檗碱防治组。组织学检查发现,LPS组小鼠肝细胞水肿、变性、坏死,肝窦充血;电镜下可见,肝细胞核溶解、部分核膜不完整,线粒体肿胀、嵴消失。小檗碱防治组小鼠肝脏的病理变化明显轻于LPS组。此外,LPS组肝脏组织中MDA的含量明显高于对照组(P<0.01),而小檗碱防治组肝脏组织中MDA的含量低于LPS组(P<0.05),但小檗碱防治组肝组织中SOD活性与LPS组比较无显著差异。结论:小檗碱可以减轻LPS引起的肝脏损伤,其作用机制可能与其抑制LPS诱导的TNF-α释放,减少肝组织脂质过氧化和保护肝细胞线粒体有关。

茶多酚的离体抗氧化作用

目的和方法：采用分光光度法及电泳法，以离体ＲＢＣ膜，肝匀浆还原型谷胱甘肽（ＧＳＨ）水平，质粒ＤＮＡ损伤程度为检测指标测定茶多酚对离体生物组织的抗氧化作用。结果：茶多酚能显著抑制紫外线致人ＲＢＣ溶血作用（Ｐ＜０．０１）；能显著抑制６０Ｃｏγ射线致质粒ＰＵＣ１９ＤＮＡ单链断裂作用（Ｐ＜０．０５或Ｐ＜０．０１）；对ＶｉｔＣ／Ｆｅ２＋激发的肝匀浆ＧＳＨ耗竭，茶多酚也具有显著的抑制作用（Ｐ＜０．０５或Ｐ＜０．０１）。结论：茶多酚具有良好的抗氧化作用，能保护离体ＲＢＣ，组织ＧＳＨ，ＤＮＡ免受氧自由基损伤。

川中地区侏罗系适合页岩油气藏开采的地质依据

四川盆地川中地区中、下侏罗统油气藏包括大安寨段、马鞍山段、珍珠冲组(段)、凉高山组、下沙溪庙组底部油气藏。对于大安寨段油气藏的储层类型,传统观点公认为是裂缝型,并且得到了井筒的相关资料证实,但是随着该区页岩气的开采成功,又开拓了新的认识起点:随着远离井筒,不少证据显示出大安寨段油气藏储集层具有裂缝—孔隙型特征,而这些孔隙似乎更可能是存在于页岩当中的,后续产出的油气很可能还有页岩当中游离油气的供给。通过对油气显示、储层特征以及生产动态等资料的分析,认为该区大安寨段油气藏由页岩中的油气补给而形成目前的生产状况更为合理;裂缝更多起的是一种疏导通道作用——当然并不排除介壳灰岩中可能存在孔隙的可能性,只是认为石灰岩中的孔隙不应该是唯一的储集空间,甚至可能不是其最为重要的储集空间;中国石油化工股份有限公司在元坝区块已经做出了有关尝试,并取得成效。结论认为:如果页岩中的油气是该区侏罗系油气藏重要的补给源,那么,应用页岩油气(致密油)的开采思路和技术将有可能是更为有效的手段和方式。

中枢CRH在大鼠应激性体温升高和LPS性发热机制中的作用

目的 :进一步观察中枢促肾上腺皮质激素释放激素 (CRH)在大鼠应激性体温升高和脂多糖 (LPS)性发热中枢机制中的作用。方法 :第三脑室微量注射CRH受体拮抗剂α -helicalCRH( 9- 4 1)和LPS ,测定大鼠结肠温度及脑腹中隔区精氨酸加压素 (AVP)含量。结果 :生理盐水对照组大鼠体温明显升高 ,最大升幅为 ( 0 88± 0 3 1)℃。第三脑室注射CRH受体拮抗剂α -helicalCRH( 9- 4 1) 10min后再注射生理盐水组 ,90min内大鼠结肠温度未见明显波动 ,90min后体温开始上升 ,1 5h体温反应指数 (TRI1 5)明显低于生理盐水对照组 ,而脑腹中隔区AVP含量和TRI3 5与对照组比较均没有明显差别。第三脑室注射 3 0 0ng的LPS引起大鼠结肠温度双相性升高 ,其TRI3 5明显高于生理盐水对照组。事先向第三脑室注射α -helicalCRH( 9- 4 1) ( 5 μg)再注射LPS组 ,TRI3 5明显高于LPS组 ,而脑腹中隔区AVP含量明显低于LPS组。结论 :CRH介导应激诱导的早期体温升高。CRH可能通过诱导脑腹中隔区AVP的生成限制大鼠LPS性发热。在大鼠LPS性发热中 ,CRH可能是一种双相作用分子 ,一方面本身介导发热体温升高 ,另一方面又诱生发热体温负调节介质而限制发热体温的升高。

松树皮原花素的离体抗氧化作用

目的和方法:采用溶血试验、肝匀浆脂质过氧化产物丙二醛(MDA)含量测定、受照质粒DNA构象改变等为检测指标测定松树皮原花素对离休生物组织的抗氧化作用。结果:松树皮原花素能显著抑制H_2O_2所致的人红细胞(RBC)溶血作用(P<0.01),明显抑制VitC/Fe^(2+)诱导的小鼠肝匀浆组织过氧化作用(P<0.01),明显减轻^(60)Coγ射线所致质粒PUC_(18)DNA单链断裂程度(P<0.01)。结论:原花素具有很强的抗氧化作用,能保护离体RBC膜、DNA免受氧自由基的损伤。

半乳糖受体介导的PCNA反义核酸提高肝癌细胞对化疗药物的敏感性

目的 研究半乳糖(galactose ,Gal) -聚乙烯亚胺(polyethyleneimine ,PEI)介导的增殖细胞核抗原(pro liferatingcellnuclearantigen ,PCNA)反义核酸(antisenseoligdeoxynucleotides ,ASODN)分别与3种常用化疗药物5 -氟尿嘧啶(5 -fluorouracil,5 -FU) ,顺铂(cis-Diamminedichloroplatinum ,DDP) ,羟喜树碱(hydroxyicamptothecine ,HCPT)联合作用于人肝癌Bel- 74 0 2细胞,观察它们对细胞增殖的抑制作用。方法 将Gal-PEI与反义核酸形成交联复合物Gal-PEI-ASODN ,用CCK - 8细胞计数试剂盒检测单纯使用化疗药物以及联合0 0 3μmol/LASODN或0 0 3μmol/LGal-PEI-ASODN对Bel- 74 0 2细胞增殖的抑制作用,并分别计算抑制率和IC50 。结果 单纯使用5 -FU ,DDP ,HCPT作用于Bel- 74 0 2细胞4 8h ,其IC50 分别为16 15 ,1 88,0 31μg/ml;ASODN与上述药物联合使用其IC50 分别为12 5 9,1 71,0 2 7μg/ml,将Bel- 74 0 2细胞对化疗药物的敏感性分别提高到单用化疗药物的1 2 8,1 10 ,1 15倍;Gal-PEI-ASODN与上述药物联合使用其IC50 分别为0 5 1,0 90 ,0 10 μg/ml,将Bel- 74 0 2细胞对化疗药物的敏感性分别提高到单用化疗药物的31 6 7,2 0 9,3 10倍。金正均Q值法分析表明:5 -FU与Gal-PEI-ASODN联合使用。

头颈部鳞癌患者p53基因异常的研究

目的 研究头颈部鳞癌患者中抑癌基因p5 3的突变情况及探讨p5 3基因突变与临床病理参数鳞癌分级、淋巴结转移的关系。方法 收集 4 3例新鲜头颈部鳞癌标本 ,用酚 -氯仿 -异戊醇法提取基因组DNA ,用PCR -SSCP -银染法检测p5 3基因第 5～ 8外显子的突变情况。结果 4 3例标本中检测到 14例发生突变 ,突变率为 33% ,p5 3基因突变与鳞癌分级、淋巴结转移无相关关系 (P >0 0 5 )。结论 p5 3基因是头颈部鳞癌中较常发生改变的基因之一 ,提示p5

促肝细胞生长素改善单侧输尿管梗阻大鼠肾脏纤维化的研究

目的:研究促肝细胞生长素(hepatocyte growth-promoting factor,pHGF)改善梗阻性肾病肾小管间质纤维化的疗效和机制。方法:17只SD大鼠随机分为假手术组(SOR)、单侧输尿管梗阻组(UUO)和pHGF治疗组。给药组用促肝细胞生长素pHGF(30μg.kg-1.d-1)大鼠腹腔注射,其余组给予等剂量生理盐水。14 d后收获大鼠。通过测定肾皮质羟脯氨酸含量比较纤维化改变;肾脏病理分析用H.E.和Masson染色,免疫组化检测TGF-β1,α-SMA,FN在肾组织中的表达。结果:肾组织羟脯氨酸定量UUO组明显高于SOR组,pHGF组,pHGF组介于二者之间,P(0.01;Masson染色SOR组仅在血管和基底膜处有绿染的胶原纤维,UUO组胶原成分增多,而pHGF组较UUO组明显改善,P(0.01。免疫组化显示pHGF能明显降低梗阻肾组织TGF-β1,α-SMA,FN的表达水平降低,与UUO组比较,P(0.01。结论:pHGF能有效缓解梗阻性肾病肾小管间质纤维化。

牛磺酸与细胞膜自由基损伤的关系

为了探讨牛磺酸与细胞膜自由基损伤的关系，选用脂质过氧化物测定法、溶血试验及谷胱甘肽测定法的指标进行测定，结果显示：牛磺酸加剧了辐射导致的小鼠肝、脑、肾组织的脂质过氧化反应（Ｐ＜００５或Ｐ＜００１）；牛磺酸加剧了辐射导致的人红细胞悬液的溶血作用（Ｐ＜００１或Ｐ＜０００１）；牛磺酸与人红细胞悬液３７℃水浴１ｈ，发现牛磺酸致使红细胞中谷胱甘肽水平显著下降（Ｐ＜０００１）。结果提示，牛磺酸不是自由基清除剂，相反，它能加剧细胞膜的自由基损伤。