肿瘤饥饿环境对肺癌细胞中HMGB1表达的调控及其HMGB1在肺癌筛查中的应用价值

目的 探讨Hank′s平衡盐溶液(Hank′s balanced salt solution,HBSS)诱导的饥饿环境对肺癌细胞凋亡相关分子高迁移率组蛋白B1(HMGB1)表达的调控作用,并分析肺癌患者血清HMGB1水平在肺癌筛查中的应用价值。方法 设置HBSS处理组(使用HBSS更换完全培养基后继续培养)与对照组(使用完全培养基进行培养)。利用HBSS处理Lewis肺癌细胞12 h后,采用分光光度法检测肺癌细胞中含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(Caspase-3)活性。利用HBSS处理Lewis肺癌细胞 0.5 h 后,采用流式细胞术检测饥饿条件下肺癌细胞中氧化应激效应分子——活性氧(ROS)的表达水平。利用HBSS处理Lewis肺癌细胞0、4、8和12 h后,使用western blot检测细胞内HMGB1蛋白的表达水平。采用ELISA法检测肺癌患者( n =50)血清中HMGB1的表达水平,并分析其与血清肿瘤标志物水平间的相关性。结果 与对照组(0.14±0.01 U/L)相比,HBSS刺激 12 h 后,Lewis肺癌细胞中Caspase-3活性(0.24±0.01 U/L)明显升高( P <0.01)。流式细胞术检测结果表明,与对照组(MFI:63.00±4.58)相比,HBSS刺激0.5 h后,Lewis肺癌细胞中ROS水平(MFI:293.00±9.54)上调( P <0.01)。western blot结果显示,HBSS刺激0、4、8和12 h后,Lewis肺癌细胞中HMGB1蛋白的表达水平明显升高( P 均<0.01)。ELISA法结果显示,与健康人对照(3.36±0.20 ng/mL)相比,肺癌患者血清中HMGB1的水平(12.76±0.74 ng/mL)明显升高( P <0.05),且与血清CEA水平呈正相关( r =0.44, P <0.01)。结论 肿瘤饥饿环境能够促进肺癌细胞中凋亡相关分子HMGB1的表达,肺癌患者血清HMGB1水平与肺癌发展密切相关。

加硼酸或氯唑西林的改良Hodge试验检测肠杆菌科细菌碳青霉烯酶的研究

目的 探讨加硼酸或氯唑西林的改良Hodge试验在碳青霉烯酶类药物敏感性降低的细菌中检测碳青霉烯酶的临床应用价值.方法 收集2009年～2010年南京军区总医院对碳青霉烯酶类药物敏感性降低（亚胺培南、美罗培南或厄他培南的MIC≥2 μg/ml）的肠杆菌科细菌65株;采用琼脂倍比稀释法测定其对亚胺培南、美罗培南和厄他培南的MIC;通过改良Hodge试验和加硼酸或氯唑西林的改良Hodge试验检测碳青霉烯酶;采用PCR检测多种β-内酰胺酶基因,并对PCR阳性产物测序鉴定.结果 65株临床分离菌中,53株菌对亚胺培南不敏感（MIC＞4 μg/ml）,51株菌对美罗培南不敏感（MIC＞4 μg/ml）,58株菌对厄他培南不敏感（MIC＞2 μg/ml）.65株菌中38株改良Hodge试验阳性,包括7株弱阳性和31强阳性;33株加硼酸或氯唑西林的改良Hodge试验阳性,包括改良Hodge试验弱阳性2株和强阳性31株.经过对菌株进行β-内酰胺酶基因PCR和测序,发现加硼酸或氯唑西林的改良Hodge试验阳性菌株均携带blaKPC-2;32株阴性菌株均未携带碳青霉烯酶酶基因,但其中5株改良Hodge试验弱阳性菌株携带blampC/blaESBL.结论 加硼酸或氯唑西林的改良Hodge试验可快速、有效地区分改良Hodge试验的真、假阳性,是检测肠杆菌科细菌碳青霉烯酶的简便可靠方法,适用于临床微生物实验室.

骨形态发生蛋白-7在胃癌组织中的表达及意义

目的分析骨形态发生蛋白-7（BMP-7）在胃癌中的表达，初步探讨BMP-7对胃癌诊断的意义。方法以27例胃癌及相应的癌旁组织为研究对象，采用实时荧光定量PCR和Western blotting方法，分别检测组织中BMP-7 mRNA及其蛋白的表达情况。结果27例配对的胃癌及其癌旁组织中，63．0％（17／27）的癌组织BMP-7 mRNA的表达高于癌旁组织，差异有统计学意义（t=2．94，P〈0．01，配对t检验）；Western blotting结果显示，77．8％（7／9）的癌组织BMP-7蛋白水平的表达高于癌旁组织，差异有统计学意义（t=2．57，P％0．05，配对t检验）。结论胃癌组织中BMP-7的表达高于癌旁组织，可能与胃癌的发生、发展相关，对临床胃癌的辅助诊断可能具有潜在价值。