阿特拉津降解菌ADH-2的分离、鉴定及其特性研究

从长期施用阿特拉津的玉米地中采集土样,通过富集培养的方法分离出一株能以阿特拉津为唯一碳、氮源生长的细菌ADH-2,结合生理生化特性及16S rRNA基因的相似性分析将其初步鉴定为节杆菌属(Arthrobacter sp.)。该菌在10h内对100mg.L-1阿特拉津的降解率为99.9%。外加氮源能促进菌株的生长,但对阿特拉津的降解有轻微的抑制作用。外加蔗糖和葡萄糖能显著促进菌株的生长,但对阿特拉津的降解表现出显著的抑制。而淀粉既能促进菌株的生长又能促进阿特拉津的降解。对其降解基因的初步研究显示,该菌含有trzN、atzB和atzC3个阿特拉津降解相关基因。通过与本实验室另外两株阿特拉津降解菌比较,菌株ADH-2具有更好的应用潜力。

降解菌CDS-1产呋喃丹水解酶的条件及酶学特征

Sphingomonas sp．CDS-1是一株呋喃丹高效降解菌．为了给利用该菌产生的酶去除环境中的呋喃丹残留提供一些理论依据，对CDS-1产生的呋喃丹水解酶粗酶进行了研究．结果表明，在LB培养基中。CDS-1产生呋喃丹水解酶的晟适条件为pa6～8、30℃、培养30h；该酶在20—30℃、pH〉6．0的条件下比较稳定：在pH6．5和30℃时显示最大的呋喃丹水解酶活性；大多数金属离子浓度在0.2mmol／L时对其酶活有促进作用：酶定域实验结果显示该酶为胞内酶．

CONSTANS LIKE 7参与调控拟南芥的向地性以及侧根、子叶的发育

以拟南芥野生型(wild type,WT)、突变体col7、以及CONSTANS LIKE 7(COL7)过量表达转基因株系COL7-OX-10和COL7-OX-11为材料,分别研究COL7对拟南芥向地性、侧根、子叶形状的影响。结果表明,COL7参与调控拟南芥向地性、根、子叶的发育。

转座子挽救法克隆鞘氨醇单胞菌CDS-1中呋喃丹水解酶相关基因

用含Tn5转座子的自杀性质粒pSC123诱变呋喃丹降解菌Sphingomonas agrestis CDS-1,获得失去呋喃丹降解功能的突变株CDS-M1.以pMD18-T为载体在E. coli DH5α中构建了CDS-M1的基因组文库,采用转座子挽救法对Tn5插入位点两侧翼的序列进行克隆与测序,根据测序结果(共4551个碱基)设计引物,从CDS-1的基因组中扩增到同样大小的片段,把该片断克隆到广宿主载体pPZP201上,得到重组质粒pCDZ1,通过三亲接合的方法把pCDZ1导入CDS-M1中进行功能互补实验,结果显示CDS-M1的呋喃丹水解功能得到了恢复,表明该片断中包含呋喃丹水解酶相关基因.

红外光谱技术在淀粉粒有序结构分析中的应用

傅里叶变换红外光谱技术(FTIR)可用于研究淀粉粒的有序结构,包括透射模式和衰减全反射模式2种。本文探讨不同去卷积设置条件对FTIR波谱的影响,并分析FTIR在淀粉粒有序结构分析中的应用。研究结果表明,不同去卷积设置对FTIR波谱和相关峰强度影响较大,以半峰宽19cm1和增强因子1.9的设置对FTIR原始波谱去卷积,获得的结果较好。天然淀粉晶体类型不同,其FTIR波谱有差异,表现在马铃薯和山药淀粉的衰减全反射FTIR波谱相似,与水稻淀粉明显不同;水稻和马铃薯淀粉透射FTIR波谱相似,与山药淀粉明显不同。淀粉中的水分含量影响衰减全反射FTIR波谱,当水分含量超过60%时,对波谱分析结果基本没有影响。酸水解优先降解淀粉粒无定形区的结构成分,提高淀粉粒的有序度。淀粉葡糖苷酶水解淀粉对淀粉粒外部区域的有序度影响不大,但明显提高整个淀粉粒的有序度。不同品质稻米淀粉的衰减全反射FTIR波谱相似。上述研究结果为应用FTIR分析淀粉粒有序结构提供重要的参考作用。

流式细胞术在营养和食品卫生评价中的研究进展

流式细胞术作为单细胞水平上的分析技术,已逐渐被应用于食品科学研究领域,特别是在食品功能分析和食品生产与加工过程中的质量控制等方面呈现较好的应用前景。就其在食品功能成分评价与食品微生物检测等方面的应用研究进展作一综述。

一株耐铜菌的筛选及其对铜去除能力的研究

通过在固体培养中加入400 ppm的Cu2+,从铜尾矿土壤中筛选分离到一株耐铜菌。研究结果发现该菌株在28℃下生长最好,Cu2+对该菌株的生长具有抑制作用。该菌株对Cu2+具有很好的去除效果。

糖皮质激素诱导重组转基因二元载体pElrLEG的构建

以p Jawoh18-RNAi载体为骨架,构建地塞米松诱导的二元载体p Elr LEG。通过在p Elr LEG载体上的Xho I与Spe I位点插入2个同向的locus of X-over P1(Loxp)位点,以及在Loxp位点之间再插入Glucocorticoid Recepot(GR)融合的Cre重组酶及Gateway cassette,从而成功构建地塞米松诱导型二元载体。

十字花科植物DFR蛋白的生物信息学分析

采用生物信息学的方法分析已经在GenBank上注册十字花科植物的DFR基因序列及相应氨基酸序列,并对其理化性质、结构特征、系统进化关系等进行预测。结果表明,十字花科植物的DFR蛋白大部分都有6个外显子,分子质量36481.89~43129.21Da,大多数蛋白亚细胞定位于叶绿体中;除了BnaDFRA402,其他的DFR蛋白均具有酶活性部位、NADP结合位点和底物特异结合位点,这些保守区域形成了5个motifs;每个DFR蛋白均有多个磷酸化位点,以Ser为主,以Thr和Tyr磷酸化为辅;二级结构均由α-螺旋、β-转角、延伸链和无规则卷曲组成,其中α-螺旋为主要结构元件。

沙门菌Ⅲ型分泌系统研究进展

沙门菌是一种重要的人兽共患肠道病原菌,在引起人类食物中毒的微生物中常列榜首。沙门菌的致病性与其Ⅲ型分泌系统(T3SS)密切相关。沙门菌能够利用T3SS选择性分泌效应蛋白至感染细胞的胞质中,在较短的时间内通过调节宿主细胞的功能,完成细菌的感染和胞内定殖过程,从而逃避机体的清除作用。沙门菌T3SS的作用机制研究对于沙门菌病的防治具有重要意义,论文主要对沙门菌T3SS的结构、组装及作用机理做一综述,以期为沙门菌病的防控提供参考。

小鼠感染猪源鼠伤寒沙门菌分离株的检测

小鼠对鼠伤寒沙门菌感染的检测分析有助于沙门菌致病机理的研究。从扬州市某屠宰场猪胴体表面采样分离出了一株沙门菌,通过生化鉴定及血清型分析,判断该菌株为鼠伤寒沙门菌。药物敏感性分析表明,该菌株对氨苄青霉素高度耐药,而对头孢类等药物敏感。动物试验结果表明,腹腔注射5×105CFU/只的剂量即可致死小鼠,1×104 CFU/只的剂量感染后,虽然不能致死小鼠,但能引起小鼠肝脏和脾脏的病理损伤和炎症反应,脏器系数升高,肝脏抗氧化系统紊乱;细菌在小鼠体内的定殖能力较强,4周以后肝脏和脾脏中仍能分离到;感染小鼠血清生化指标(ALT、AST、ALP、TP、ALB)异常,部分细胞因子(IFN-γ和TNF)升高。说明该菌株能诱导脾脏中T淋巴细胞的活化。通过以上分析,对该分离菌株的生物学特性有了初步的了解。

实践导向型教学在研究生课程改革中的探索——以“生物分析测试技术与仪器”课程为例

为了提高“生物分析测试技术与仪器”研究生课程的实际教学效果,针对课程当前教学体系建设中存在的问题,从教学内容、实践环节、考核方式、课程特色等角度,以实践为导向,通过优化教师队伍、更新教学内容、构建综合型教学方案、设置项目型及进阶式教学课程体系、搭建仪器实训平台、多维度考核等方面对其教学模式进行探索,以激发学生的学习动力,增强学生的实践能力,提高学生的就业率,为其他高校分析测试技术类课程的教学改革提供有益参考。

利用圆二色谱和流式细胞术分析干扰素-α的构象与其抗病毒活性的相关性

利用圆二色谱(Circular dichroism,CD)和流式细胞术(Flow cytometry,FCM)分析干扰素(Interferon,IFN)-α的构象与其抗病毒活性之间的关系。以重组人IFN-α(rIFN-α2b和rIFN-α2a)为材料,变温CD谱分析表明,在65℃以下,两种IFN-α的二级结构相对稳定,当温度高于65℃以后,两者的二级结构发生不可逆的改变。FCM分析构象变化前后IFN-α的抗病毒活性发现,构象的改变一定程度上减弱了其抗病毒活性。rIFN-α2b和rIFN-α2a具有相似的变化趋势。以上结果表明,IFN-α的构象是影响其抗病毒活性的重要因素之一,同时也验证了CD结合FCM是分析蛋白质药物构象与其细胞水平上生物学活性相关性的较好组合。

大肠杆菌EscI蛋白C-末端多肽诱导巨噬细胞炎性体应答

【目的】分析E.coli的Esc I蛋白C-末端多肽诱导巨噬细胞NLRC4炎性体应答情况。【方法】以含有E.coli的Esc I蛋白C-末端氨基酸序列的多肽为材料,通过体外导入小鼠腹腔巨噬细胞,分析细胞的应答情况。【结果】利用脂多糖预先刺激后,含有Esc I蛋白C-末端15个氨基酸的多肽能够明显地激活细胞内NLRC4炎性体应答,细胞内半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1被激活,细胞发生pyroptosis,细胞培养上清中IL-1β和IL-18的含量增加(P<0.05)。通过优化刺激条件发现,以多肽/脂质体为70μg/μL的比例导入细胞并孵育4 h时,IL-1β的分泌量最高。【结论】含有E.coli的Esc I蛋白C-末端15个氨基酸的多肽能够明显地诱导巨噬细胞NLRC4炎性体应答。