云南省部分地方品种鸡禽白血病病毒感染情况调查及南涧乌骨鸡种鸡禽白血病净化效果评估

为了解云南省部分地方品种鸡禽白血病病毒(ALV)的感染情况并评估禽白血病(AL)净化效果,本试验于2019—2021年自云南省5个地区采集12种地方品种鸡的血清和血浆样本共3321份,通过ELISA试剂盒检测禽白血病病毒J亚群(ALV-J)抗体和ALV p27抗原阳性率,分析云南省部分地方品种鸡ALV的感染情况;于2020—2022年对南涧乌骨鸡进行连续3个世代的AL净化并评估净化效果。结果显示:被调查的12种地方品种鸡均存在ALV感染,ALV-J抗体群体平均阳性率为44.82%(765/1707),ALV p27抗原群体平均阳性率为14.06%(227/1614);在不同地方品种鸡群中,公鸡群体阳性率30.52%(405/1327)高于母鸡群体阳性率29.44%(587/1994),散养户ALV-J抗体群体阳性率47.72%(325/681)高于种鸡场ALV-J抗体群体阳性率42.88%(440/1026)。南涧乌骨鸡种鸡经过3个世代净化,与1世代ALV p27抗原阳性率[精液58.33%(658/1128)、蛋清33.71%(360/1068)、40周龄公鸡血浆22.54%(94/417)和母鸡血浆18.71%(119/636)]相比,3世代[精液16.87%(218/1292)、蛋清14.56%(285/1958)、40周龄公鸡血浆0.85%(9/1065)和母鸡血浆0.66%(11/1656)]极显著下降(P<0.01);与1世代相比,3世代商品肉鸡生产性能和种鸡繁殖性能明显提升,说明该净化方案切实可行。本试验为云南省地方品种鸡群AL的净化和防控工作提供参考依据和数据支持,为云南省地方品种鸡遗传资源保护和开发利用提供借鉴。

一例番鸭3型腺病毒感染的实验室诊断和序列分析

为确诊昆明某番鸭场送检病死番鸭的致病原因,对病死番鸭进行病理剖检、细菌分离培养、PCR检测以及序列分析。结果显示,所检样品无细菌感染,鸭3型腺病毒(DAdV-3)PCR核酸检测结果为阳性,其他病原核酸检测结果均为阴性;阳性PCR产物测序,基因序列比对及进化树分析,发现该样品基因序列与DAdV-3为同一进化树分支,同源性为100%。结合病理剖检特征、PCR检测及临床症状,诊断该番鸭场为鸭3型腺病毒感染。研究结果为DAdV-3感染的防控提供了参考。

烈性噬菌体KM104对不同血清型鸡源沙门菌的防治效果评价

【目的】研究烈性噬菌体KM104株对不同血清型鸡源沙门菌雏鸡感染的防治效果。【方法】测定KM104株体外裂解谱及体内安全性,确定攻菌剂量和最佳感染复数(MOI);按噬菌体的不同使用时间、频率和滴度分组,构建白羽蛋鸡3个不同血清型鸡源沙门菌感染防治模型,通过记录试验动物存活数及存活率、生长性能、临床症状及病理变化,测定肛拭子排菌量、脾脏载菌量和脏器系数等指标,综合评价KM104的防治效果。【结果】噬菌体KM104对5个血清型沙门菌的综合裂解率为80.65%(50/62),在体外具有较好的抑菌效果,且对雏鸡无明显致病作用;最佳治疗方式:针对鸡白痢沙门菌、鸡伤寒沙门菌和肠炎沙门菌的治疗剂量分别为7.96×10^(7)、1.26×10^(4)和1.68×10^(7)PFU/mL,采用连续3 d灌喂高滴度噬菌体的方式雏鸡存活率最高(分别为90%、80%、90%),与攻菌后不处理对照组相比,有效减轻试验雏鸡的临床症状及脏器损伤,增重显著上升(P<0.05)、肛拭子排菌量、脾脏载菌量及脏器系数显著降低(P<0.05)。【结论】噬菌体KM104对多个血清型致病性沙门菌具有广谱裂解活性,对雏鸡无明显致病作用;攻菌前连续3 d灌喂高滴度KM104的方式对预防雏鸡感染鸡白痢沙门菌、鸡伤寒沙门菌和肠炎沙门菌的效果最佳,可用于沙门菌生防制剂开发。

2021—2023年云南省鸭病统计分析报告

概述了2021—2023年云南省水禽产业现状,重点统计分析了2021—2023年度云南省各地送检的鸭病临床诊断数据、样品病原检测和抗体监测结果,报道了2021—2023年分离鉴定的鸭疫里默氏菌、禽大肠杆菌和鸭源沙门氏菌代表菌株的药物敏感性统计结果,并针对云南鸭疫病流行特点,提出关注重点及防治措施。

一株野生马来穿山甲源奇异变形杆菌的分离鉴定及生物学特性分析

为查明野生动物保护协会送检的1只野生马来穿山甲(Manis javanica)的死亡原因,对其进行剖检,从肺脏组织中分离得到1株病原菌。对分离菌株进行革兰氏染色、生化试验、16S r RNA同源性分析、药敏试验、耐药基因检测、毒力基因检测和小鼠致病性试验等研究。结果显示:分离菌株在麦康凯、SS、血琼脂和LB培养基上均能生长;革兰氏染色镜检为阴性短杆菌;生化鉴定和16S r RNA同源性分析鉴定该菌株为奇异变形杆菌(Proteus mirabilis),命名为YN2018株;生长曲线表明该菌株在2 h后进入对数生长期,16 h后进入稳定期;该菌株对头孢他啶、头孢噻肟和大观霉素较敏感,对庆大霉素、阿米卡星、阿莫西林、妥布霉素和链霉素中度敏感,对罗红霉素、多西环素和复方新诺明等14种抗菌药物耐药;该菌株含有aadA1、aadB、sul1、sul2和dfrA1耐药基因,并携带有mrpA、rsbA、ureC、zapA、rsmA、hpmA、fliL、ucaA、pmfA和atf A毒力基因;小鼠接种菌株浓度为8.50×10^(8)、1.70×10^(9)、3.40×10^(9)、6.80×10^(9)、1.36×10^(10)cfu/m L的死亡率分别为0、50%、75%、100%、100%;死亡小鼠肝脏和肺脏组织病理切片显示发生局灶性细胞坏死及炎性细胞浸润。分离得到的奇异变形杆菌具有多重耐药和强致病性,可能是导致野生马来穿山甲死亡的原因。

戊型肝炎病毒感染模型研究进展

戊型肝炎是一种重要的人兽共患传染病,其病原戊型肝炎病毒(HEV)变异性强、宿主范围广。HEV体外培养难度大,建立感染模型对深入研究HEV的复制机理、致病性和跨种系传播等具有重大意义。资料表明恒河猴、黑猩猩、短尾猴等非人灵长类,猪、兔等动物以及传代细胞等均有望作为感染模型。恒河猴、黑猩猩是理想的动物模型,但存在价格高、操作难和医学伦理等问题。猪、兔相对成本低,操作简便,但只感染基因3/4型。动物感染模型中,以长爪沙鼠较为理想。人胚肺二倍体传代细胞系、猪肝脏干细胞系、人肝癌细胞系和肺癌细胞系等均可用于HEV培养,以人肝癌细胞系PLC/PRF/5和肺癌细胞系A549最为高效。

洱源、怒江猫源弓形虫虫株的分离与鉴定

为了分离猫源弓形虫,本试验从云南洱源、怒江两地区捕捉18只野猫,取其心脏、肝脏、肺脏、脑组织用盐酸—胃蛋白酶溶液消化处理后,腹腔接种小白鼠,将分离到的弓形虫虫株至少传3代,用特异PCR方法对所分离的虫株进行鉴定。结果表明,从18只野猫的样品中分离出3株弓形虫虫株,用特异性引物对3株虫株进行PCR鉴定,均得到弓形虫的特异性目的条带,测序结果表明所扩增出的DNA片段确为弓形虫核糖体B1基因部分序列。同源性比对分析结果显示分离株与T.gondii B1的同源性为100.0%。将动物组织用盐酸—胃蛋白酶溶液消化处理后腹腔接种小白鼠是一种分离弓形虫虫株较理想的方法,对弓形虫B1基因进行特异性扩增,可以快速地鉴定弓形虫虫株。

圆环病毒2型感染猪组织病理变化观察

猪圆环病毒病由猪圆环病毒2型(PCV2)引起,可引起断奶仔猪多系统衰竭综合征、仔猪先天性震颤、猪皮炎与肾病综合征和繁殖障碍等疾病。本文作者对云南猪场PCV2感染猪的组织病理学变化进行了观察,结果发现感染猪心肌纤维断裂肝窦、中央静脉淤血,淋巴细胞浸润;脾脏有严重的坏死性血管炎;肺泡腔、支气管存在间质性肺炎和炎性渗出物;肾脏出现严重的坏死性血管炎和纤维坏死性血管肾炎;淋巴结淋巴细胞缺失,还有大量组织细胞及多核巨细胞浸润。研究结果为PCV2感染的临床诊断及致病机制研究等提供重要参考。

戊型肝炎病毒在长爪沙鼠体内消长规律研究

为掌握戊型肝炎病毒(HEV)感染长爪沙鼠后各组织器官中病毒的载量及消长规律,以1株云南猪源HEV感染ZCLA长爪沙鼠,采用实时荧光定量PCR相对定量法,对不同感染时间的血液、粪便及肝、肠等组织中的病毒进行测定。结果表明,从感染3d后开始,长爪沙鼠血液、粪便、肝、肠和胆汁中均能检测到病毒,以肠和胆汁中含量最高,感染5周后各组织中还能检测出病毒。研究结果为建立长爪沙鼠感染HEV模型,揭示HEV复制与疾病进程的关系、致病机理,以及建立防控技术等奠定基础。

云南猫源弓形虫致病性的研究

研究以从小鼠腹腔液中的活化过的云南猫源弓形虫速殖子,对昆明鼠及乌骨鸡做致病性实验,分别在第7、10d将小鼠和雏鸡剖杀,采集心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、脑组织,用4%多聚甲醛固定,制作病理切片。试验结果显示,该猫源弓形虫分离株为弱毒株,小鼠与雏鸡攻虫后均不出现死亡,小鼠临床症状如被毛粗乱、拱背、精神沉郁等明显,雏鸡见水样便,病理切片显示肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、脑组织均出现明显病理变化,心脏未见明显病变。

一起番鸭感染鸭瘟、新型番鸭细小病毒、鸭圆环病毒的诊断

对昆明郊县的番鸭病例诊断,根据发病情况、临床症状、剖检病变,结合实验室细菌分离培养、病原学检测、基因序列测定等实验方法,确定养殖场该批次番鸭为鸭瘟(DP)、新型番鸭细小病毒(N-MDPV)、鸭圆环病毒(DuCV)感染。

云南省家禽弓形虫感染的流行病学调查及基因分型研究

为了解云南省家禽中弓形虫感染的流行情况,于2018年3月至2020年12月,在云南省家禽养殖比较集中的地区,从8个规模化家禽养殖场、10个地方鸡养殖场及部分散养户中采集各种家禽血样及土壤样品2802份,采用间接血凝试验(IHA)和套式PCR方法对弓形虫的抗体和核酸分别进行检测,并对核酸检测为阳性的样品通过PCR-RFLP进行了基因分型研究。结果显示:云南省家禽中弓形虫平均抗体阳性率为4.48%,血样、土壤核酸的平均阳性率分别为1.40%和2.74%;不同饲养模式、不同品种、不同地区之间存在一定差异,但地方品种家禽和散养家禽阳性率明显高于规模化养殖场;云南省家禽感染的弓形虫及环境中弓形虫的基因型主要是Ⅰ型,占表面抗原SAG3基因分型的97.92%(47/48)。提示:应重视地方品种家禽和散养家禽中弓形虫病的流行控制,加强饲养管理并采取综合防控措施。

昆明市某猪场猪戊型肝炎病毒流行情况调查

【目的】了解昆明市某猪场戊型肝炎病毒感染情况,进一步探究病毒基因型及分子进化情况,为戊型肝炎防控提供参考。【方法】从该猪场随机采集39份新鲜粪便,用逆转录巢式聚合酶链反应对HEV ORF2部分基因片段扩增、克隆及测序;应用生物信息学软件进行同源性分析并构建系统进化树。【结果】PCR检测结果发现:该猪场核酸阳性率达35.9%(14/39)。同源性分析结果表明:14株流行毒株核苷酸序列与GenBank中HEV Ⅰ~Ⅳ型参考株的同源性分别为77.4%~83.9%、81.0%~83.2%、78.8%~86.9%和90.5%~98.5%,全部流行株均属基因Ⅳ型。进化分析结果表明:YN-KM-9与该猪场其他流行毒株同源性较远,应属不同基因亚型。【结论】该猪群HEV Ⅳ感染率较高,对公共卫生安全构成潜在威胁。

云南省地方品种鸡群4种垂直传播病毒血清流行病学调查

为了解云南省地方品种鸡群中禽白血病病毒(ALV)、禽网状内皮组织增生症病毒(REV)、鸡传染性贫血病毒(CAV)和禽脑脊髓炎病毒(AEV)的感染情况,采用ELISA方法对云南省滇东、滇西、滇中、滇南和滇北5个区域8个地方品种鸡群的2295份血清样品进行了上述4种垂直传播病毒的抗体检测。结果显示:云南省8个地方品种鸡群中,ALV、REV、CAV和AEV平均抗体阳性率分别为27.02%、72.77%、98.47%和76.25%,二重、三重、四重感染率分别为32.90%、36.38%、15.90%;不同区域、不同品种鸡群中均存在上述4种病原的感染,抗体阳性率有一定差异,但无规律性。结果表明,云南省地方品种鸡群中4种垂直传播病毒感染率较高,流行面较广,且呈现严重的混合感染状态。结果提示:应重视这4种可垂直传播病原的流行控制,谨防因病毒混合感染导致重大疫病免疫失败;继续加强抗体检测,及时淘汰阳性鸡群,净化种群,同时定期进行疫苗污染监测,提升饲养管理水平,保障云南省地方鸡种质资源的安全健康发展。

鸽源阿哥纳沙门菌的分离鉴定和生物学特性研究

为了解云南某鸽场的肉鸽发病原因,拟定治疗方案,试验无菌采集病鸽肝脏组织,划线于麦康凯培养基进行细菌分离培养、生化鉴定、血清型鉴定、16S rDNA同源性分析、动物回归试验、药敏试验及毒力分析。结果显示,在麦康凯培养基上可见圆形、光滑、无色半透明的菌落,初步鉴定为革兰氏阴性菌;经沙门菌属血清凝集试验和16S rDNA同源性分析,鉴定该菌为阿哥纳沙门菌(Salmonella Agona),其抗原结构式为:O抗原1(+)、4(+)、12(+),H抗原fg(+)、s(+),将其命名为SSYN036株。细菌生长曲线测定表明,该菌株生长速度较快;动物试验表明,该菌株对试验小鼠致病强,接种浓度为5×108、5×107、5×106和5×105 CFU/mL的小鼠在7 d内死亡率分别为100%、100%、60%和30%;病理切片显示产生明显的多灶性坏死炎症及炎性细胞浸润;药敏试验表明,该菌株对青霉素、苯唑西林、链霉素、强力霉素和四环素存在耐药,对利福平中度敏感,对阿莫西林、氨苄西林、庆大霉素、妥布霉素和头孢他啶等11种抗菌药物敏感;菌株毒力基因检测表明,菌株含有spvB、spiA、pagC、msgA、invA、sipB、prgH、spaN、tolC、iroN、sitC、lpfC、sifA、sopB和pefA共15种毒力基因。本研究为了解鸽源沙门菌的致病性和菌株生物学特性提供了新的信息,具有重要的公共卫生学意义。

抗O型口蹄疫兔化弱毒YNTBa株单克隆抗体的制备及其生物学特性鉴定

为建立O型口蹄疫病毒(FMDV)检测方法,用纯化的O型FMDV兔化弱毒YNTBa株抗原免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合;经间接ELISA方法筛选,获得一株稳定分泌单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞株9B3,其细胞培养上清效价为1∶25600,小鼠腹水效价为1×10^(6),抗体亚类为IgG2a/κ。经免疫荧光(IFA)和病毒中和试验(VNT)鉴定,9B3为一株抗O型FMDV型特异性mAb,但无中和活性;Western-blot结果显示,9B3不与YNTBa全病毒抗原反应,表明其识别非线性抗原表位。经硫氰酸盐洗脱法测定,9B3的相对亲和力指数为1.0 mol/L。这株单抗的获得为O型FMDV抗原表位研究及检测方法的建立奠定了基础。

鸭坦布苏病毒荧光定量RT-PCR方法的建立及应用

为建立鸭坦布苏病毒(duck tembusuvims,DTMUV)荧光定量RT-PCR (qRT-PCR)检测方法,对DTMUV的NS5基因设计特异性引物和MGB探针,使用RT-PCR扩增NS5基因并将其连接到pEASY-T1载体上构建重组质粒,提取阳性重组质粒作为qRT-PCR阳性模板绘制标准曲线,用SYBRGreenI法检测MGB探针法qRT-PCR的引物是否有非特异性扩增,并进行特异性、敏感性、重复性试验和临床样品检测。结果显示:MGB探针法qRT-PCR标准曲线的相关系数为0.999 3,其引物没有非特异性扩增;对于其他阳性样本,如鸭肝炎病毒(DHV)、新城疫病毒(NDV)、禽流感病毒(AIV)等抗原无扩增曲线,只能检出DTMUV;qRT-PCR敏感性可达3×10^(2) copies/μL,是普通RT-PCR的10 000倍;批内和批间重复性试验变异系数(CV)为0.08%~0.49%,均小于0.5%。从云南省不同地区采集20份临床出现产蛋下降症状的病鸭组织,应用试验建立的qRT-PCR方法检出12份阳性样品,而普通RT-PCR检出10份,两者的阳性率分别为60% (12/20)和50% (10/20)。结果表明,本试验成功建立了基于DTMUV NS5基因的MGB探针qRT-PCR检测方法,其标准曲线线性关系显著,特异性强,与其他禽源性病原无交叉反应性,敏感性和重复性良好,敏感性和阳性检出率较普通RT-PCR高,更适合于DTMUV感染的临床诊断和流行病学调查。

云南鸡源副禽嗜血杆菌的分离鉴定与耐药性分析

无菌棉签深入病死鸡鼻窦腔深部无菌采集病料进行细菌分离,对分离菌进行形态学观察、生理生化试验、革兰氏染色、血凝活性测定、16S rDNA序列测定和药敏试验。结果在富含V因子血琼脂平板上分离到一株灰白色、圆形、边缘整齐的光滑型小菌落,菌落在血琼脂平板、麦康凯等培养基上无明显菌落生长;镜检观察为革兰氏阴性菌,具有血凝活性,符合副禽嗜血杆菌生化培养特性;细菌16S rDNA核酸序列Blast比对结果显示为副禽嗜血杆菌。分离菌株对妥布霉素、阿奇霉素、庆大霉素、阿米卡星具有敏感性。

鉴别诊断鸡传染性法氏囊病RT-PCR方法的建立

诊断鉴别鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)对该病的临床诊治具有重要意义。从IBDV弱毒疫苗中提取病毒RNA,采用二步RT-PCR方法,建立诊断和鉴别IBDV毒株性质的分子诊断方法。结果表明:针对IBDVVP2基因高变区的基础RT-PCR引物和巢式RT-PCR引物,分别能够扩增出目标大小的特异性片段;区分IBDV超强毒株和经典毒株的RT-PCR扩增结果与预期目标一致。该方法可用于鸡传染性法氏囊病毒病的快速分子诊断及鉴别。

75株蛋鸡源沙门菌的MLST分型与耐药性分析

旨在掌握2017年7月至2019年5月期间云南地区蛋鸡源沙门菌血清型、药物敏感性及毒力基因携带等基本情况。无菌采集发病鸡肝组织,共分离到沙门菌75株,对分离株进行MLST分型、药物敏感性及相关耐药基因和毒力基因检测。结果显示,MLST鉴定到ST78序列型鸡伤寒沙门菌54株(72.00%)、ST92序列型鸡白痢沙门菌21株(28.00%);分离株对青霉素的耐药率为100%,对其它抗生素的耐药率分别为:四环素26.67%、强力霉素26.67%、复方新诺明22.67%、阿莫西林18.67%、氨苄西林16.00%、恩诺沙星14.67%、链霉素8.00%、环丙沙星2.67%、庆大霉素1.33%,共存在7种耐药谱型,28.00%的菌株表现为多重耐药,且集中于鸡伤寒沙门菌;耐药基因tetA、sul2和bla_(TEM)的检出率分别为26.67%、10.67%和8.00%;毒力基因mogA、mgtC、bcfA、araB、stn和spvC的检出率均高达100%,而spvB的检出率为89.33%。结果表明,鸡伤寒沙门菌和鸡白痢沙门菌为云南地区蛋鸡源沙门菌主要流行血清型,多重耐药情况严重,耐药基因与毒力基因检出率较高。