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日本血吸虫cDNA基因库的构建 被引量:1
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作者 严维耀 高泽人 +2 位作者 吴公责 刘述先 郑兆鑫 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 1990年第4期249-251,共3页
采用一种简单的互补脱氧核糖核酸(cDNA)克隆技术制备日本血吸虫的cDNA基因库.方法的主要过程如下:以血吸虫信使核糖核酸(mRNA)为模板,在禽成髓细胞白血病病毒(AMV)反向转录酶的作用下,合成第一股单链cDNA;用核糖核酸酶H和核糖核酸酶除去... 采用一种简单的互补脱氧核糖核酸(cDNA)克隆技术制备日本血吸虫的cDNA基因库.方法的主要过程如下:以血吸虫信使核糖核酸(mRNA)为模板,在禽成髓细胞白血病病毒(AMV)反向转录酶的作用下,合成第一股单链cDNA;用核糖核酸酶H和核糖核酸酶除去mRNA,并用AMV反向转录酶和T_4-脱氧核糖核酸(T_4-DNA)聚合酶催化合成第二股双链cDNA;通过耐克斯(NACS)小柱除去1千碱基对(kb)以下的cDNA片断:质粒pUC18作为载体,DNA末端转移酶催化加接寡聚鸟嘌呤核苷酸;血吸虫的cDNA加接寡聚胞嘧啶核苷酸。然后退火连接并转化大肠杆菌菌株MC1061,得到日本血吸虫的cDNA基因库。克隆效率为10~4转化子/μg mRNA,有cDNA插入片段的转化子占30%。 展开更多
关键词 日本血吸虫 基因库 脱氧核糖核酸
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以猪IgG重链恒定区为抗原载体的抗口蹄疫病毒DNA疫苗的研制 被引量:18
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作者 李光金 严维耀 +2 位作者 徐泉兴 盛祖恬 郑兆鑫 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期322-324,共3页
The peptide of amino acids 141~160 of VP1 protein of foot\|and\|mouth disease virus (FMDV) is a major B cell epitope and the peptide of amino acids 21~40 is an important T cell epitope.In this study,the DNA fragment... The peptide of amino acids 141~160 of VP1 protein of foot\|and\|mouth disease virus (FMDV) is a major B cell epitope and the peptide of amino acids 21~40 is an important T cell epitope.In this study,the DNA fragments of 141~160 and 21~40 peptide epitopes of a strain of type O FMDV was chemically synthesized and arranged into a tandem repeat 141~160 (20AA)\|21~40 (20AA)\|141~160 (20AA).This tandem sequence was fused to the 3′ end of the heavy chain constant region gene of swine immunoglobulin G and was then cloned into mammalian expression vector pCDM8 to form a recombinant plasmid pCDM8FZ3.After pCDM8FZ3 was inoculated intramuscularly into guinea pigs,it elicited a neutralizing antibody response and a specific spleen T cell proliferative response,and 66% of the vaccinated animals were protected from viral challenge.Our study indicated that the heavy chain constant region of swine IgG can act as the carrier protein for FMDV peptide epitopes,and pCDM8FZ3 is a potential DNA vaccine candidate to prevent FMDV infection. 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 DNA疫苗 免疫球蛋白G 抗原
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以免疫球蛋白为载体的抗O型口蹄疫病毒基因工程疫苗的构建 被引量:13
3
作者 赵凯 陈光辉 +10 位作者 张震宇 严维耀 郑兆鑫 孙理云 盛祖恬 尤永进 徐泉兴 朱彩珠 冯霞 张强 卢永干 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第6期679-683,共5页
以自体免疫球蛋白作为外源抗原的载体来研制疫苗是一条研制安全、高效疫苗的新途径。将猪IgGH链基因中的CDR3区缺失 ,剩余的两个片段分别连接到pBluescriptⅡSK(+)和 pBluescriptⅡKS(+)上 ,其中一片段再与编码FMDVVP1两个拷贝的 141~ ... 以自体免疫球蛋白作为外源抗原的载体来研制疫苗是一条研制安全、高效疫苗的新途径。将猪IgGH链基因中的CDR3区缺失 ,剩余的两个片段分别连接到pBluescriptⅡSK(+)和 pBluescriptⅡKS(+)上 ,其中一片段再与编码FMDVVP1两个拷贝的 141~ 16 0位氨基酸残基和一个拷贝的 2 0 0~ 2 13位氨基酸残基构成的串联片段2 0AA~ 14AA~ 2 0AA的核苷酸片段相连。然后将它们切下与质粒表达载体 pET2 8b相连 ,构建出融合表达质粒pET2 8b FH ,经限制酶酶解及DNA序列分析证明该融合基因各连接点及读框正确。转入大肠杆菌BL2 1(DE3) plysS表达出一分子量为 6 4kD的蛋白质。经ELISA检验证明 ,大肠杆菌细胞中表达的融合蛋白有O型FMDV抗原活性。将该融合蛋白肌肉注射免疫豚鼠和猪 ,攻毒实验表明 ,疫苗pET2 8b FH对豚鼠产生了保护作用 ,保护率为 6 6 % ,对猪也有保护作用。 展开更多
关键词 基因工程疫苗 O型口蹄疫病毒 构建
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编码口蹄疫病毒VP1免疫活性肽基因片段的化学合成及克隆与表达 被引量:8
4
作者 郑兆鑫 贺沛富 +9 位作者 严维耀 王启松 施文 赵洪兴 周智爱 朱慈晖 徐泉兴 陈嘉棣 李致勋 施履吉 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 1989年第1期41-45,共5页
口蹄疫病毒(FMDv)VP1蛋白质141~160位氨基酸的肽段,是免疫活性肽,含20个氨基酸,用DNA合成仪合成这段免疫活性肽基因片段,共72bp,5'端带有Eco RI切点,3'端带有BamHI切点,利用Eco RI和BamHI切点将兔疫活性肽基因片段克隆到带肴1ac启动... 口蹄疫病毒(FMDv)VP1蛋白质141~160位氨基酸的肽段,是免疫活性肽,含20个氨基酸,用DNA合成仪合成这段免疫活性肽基因片段,共72bp,5'端带有Eco RI切点,3'端带有BamHI切点,利用Eco RI和BamHI切点将兔疫活性肽基因片段克隆到带肴1ac启动子的基因表达载体pWR590质粒中,以O型FMDV抗体做为特异的IgG,检查FMDV抗原活性肽基因片段的表达,从210个菌落中选到有明显表达的菌株8株。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 VP1基因 基因克隆
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大肠杆菌pheA基因在黄色短杆菌中的克隆与表达 被引量:6
5
作者 雷呈祥 范长胜 +3 位作者 黄伟达 沈水源 严维耀 郑兆鑫 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 1996年第S1期184-189,共6页
在大肠杆菌中,影响苯丙氨酸生物合成的关键酶基因之一是pheA基因。利用大肠杆菌棒状杆菌穿梭表达载体pLCX36克隆了一个对反馈抑制不敏感的大肠杆菌基因pheA,组建成质粒pLCX37。pLCX37以接合转移方法转移到... 在大肠杆菌中,影响苯丙氨酸生物合成的关键酶基因之一是pheA基因。利用大肠杆菌棒状杆菌穿梭表达载体pLCX36克隆了一个对反馈抑制不敏感的大肠杆菌基因pheA,组建成质粒pLCX37。pLCX37以接合转移方法转移到抗氟代苯丙氨酸的黄色短杆菌3621等菌株中,获得若干基因工程菌株。经发酵测定,编号为362109的黄色短杆菌的苯丙氨酸产量比出发菌3621高出1倍。最高达2626mg/ml。 展开更多
关键词 pheA基因 苯丙氨酸生产 黄色短杆菌 氨基酸基因工程
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中国脑型疟患者恶性疟原虫分离株裂殖子表面蛋白MSP1第16-17区基因和MSP2基因的分子克隆与鉴定 被引量:4
6
作者 边中启 宋关鸿 +2 位作者 管惟滨 严维耀 郑兆鑫 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 1997年第1期1-6,共6页
目的 :为设计研制安全有效的人脑型疟疫苗提供理论依据。方法 :根据 MAD2 0株裂殖子表面蛋白 1( MSP1)和 FC2 7株裂殖子表面蛋白 2 ( MSP2 )基因编码区高度保守碱基设计并合成两对引物 ,应用多聚酶链反应 ( PCR)技术对 5例脑型疟患者恶... 目的 :为设计研制安全有效的人脑型疟疫苗提供理论依据。方法 :根据 MAD2 0株裂殖子表面蛋白 1( MSP1)和 FC2 7株裂殖子表面蛋白 2 ( MSP2 )基因编码区高度保守碱基设计并合成两对引物 ,应用多聚酶链反应 ( PCR)技术对 5例脑型疟患者恶性疟原虫云南省勐腊县勐罕分离株 CMH/ YN和云南省盈江县农场 CYJ/ YN分离株基因组 DNA MSP1第 13- 17区基因和MSP2基因进行扩增 ,并将扩增产物分别经 Eco RI和 Kpn I,Bam HI和 Hind III双酶切后 ,分子定向克隆 M13mp18和 M13mp19载体 ,转染大肠杆菌 ( E.coli) TG1,从含 X- gal和 IPTG的 LB平板上 ,将随机筛选得到的单个无色噬菌斑经 E.coli JM10 3扩增 ,用碱裂解法抽提重组子复制型DNA ( RFDNA)后 ,再分别经 Eco RI和 Kpn I,Bam HI和 Hind III双酶切鉴定。结果 :证实重组子为编码脑型疟患者恶性疟原虫 CMH/ YN和 CYJ/ YN分离株 MSP1第 16- 17区基因和 MSP2基因分子克隆 M13载体。结论 :首次报道确证脑型疟患者恶性疟原虫 CMH/ YN和 CYJ/ YN分离株MSP1第 16- 17区基因和 MSP2基因分别与 MAD2 0株 MSP1和 FC2 7株 MSP2相应基因完全一致。这些发现对研究预防人脑型疟疫苗和建立一种新型脑型疟恶性疟原虫检测方法具有重要意义。 展开更多
关键词 脑型疟 疟原虫 裂殖子 表面蛋白 克隆 疫苗
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无血清培养体系中CD3AK细胞诱导HL-60细胞凋亡的研究 被引量:1
7
作者 李光金 陈功星 +1 位作者 严维耀 郑兆鑫 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第7期353-355,共3页
目的 :采用无血清培养体系 ,研究CD3单克隆抗体激活的杀伤 (CD3AK)细胞诱导HL 6 0细胞凋亡情况。方法 :用血清代用品代替人血清培养CD3AK细胞 ,将诱导生成的CD3AK细胞与HL 6 0细胞共同孵育后 ,通过观察细胞形态、琼脂糖凝胶电泳检测DNA... 目的 :采用无血清培养体系 ,研究CD3单克隆抗体激活的杀伤 (CD3AK)细胞诱导HL 6 0细胞凋亡情况。方法 :用血清代用品代替人血清培养CD3AK细胞 ,将诱导生成的CD3AK细胞与HL 6 0细胞共同孵育后 ,通过观察细胞形态、琼脂糖凝胶电泳检测DNA条带及流式细胞仪 (FCM)检测分析HL 6 0细胞凋亡情况。结果 :与CD3AK细胞孵育 7h后的HL 6 0细胞出现凋亡细胞形态特征 ,DNA凝胶电泳出现典型梯状电泳带 ,FCM检测凋亡细胞比例为 2 4 5 9%。结论 :无血清培养条件下CD3AK细胞可诱导HL 6 展开更多
关键词 无血清培养 CD3单克隆抗体 细胞凋亡 效应细胞 粒酶 白血病 HL-60细胞
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同源重组构建表皮葡萄球菌纤维蛋白原结合基因缺失突变菌株 被引量:1
8
作者 赵旭 朱德妹 +2 位作者 张婴元 郑兆鑫 严维耀 《中国感染与化疗杂志》 CAS 2006年第3期154-158,共5页
目的构建表皮葡萄球菌(表葡菌)纤维蛋白原结合基因(fbe基因)缺失突变菌株,为fbe基因功能研究提供实验工具。方法采用同源基因重组技术。构建质粒ΔpBT2(含fbe::ermB基因),将其电转化进入金葡菌RN4220,再次抽提后电转化进入fbe基因阳性... 目的构建表皮葡萄球菌(表葡菌)纤维蛋白原结合基因(fbe基因)缺失突变菌株,为fbe基因功能研究提供实验工具。方法采用同源基因重组技术。构建质粒ΔpBT2(含fbe::ermB基因),将其电转化进入金葡菌RN4220,再次抽提后电转化进入fbe基因阳性表葡菌(HB)中。将含有质粒ΔpBT2的表葡菌HB在5mg/L红霉素平板42℃经多次传代,使质粒ΔpBT2裂解,fbe::ermB基因同源重组到表葡菌HB的染色体上,通过红霉素耐药、氯霉素敏感等特性筛选出含有fbe::ermB基因的新表葡菌HB-ermB。结果经酶切鉴定后确认质粒ΔpBT2构建成功以及成功转导入金葡菌RN4220和表葡菌HB中,经PCR方法以及测序确认表葡菌HB的fbe基因缺失突变菌株HB-ermB构建成功。结论采用同源重组的方法完成了表葡菌HB的fbe基因缺失突变菌株的构建。 展开更多
关键词 表皮葡萄球菌 纤维蛋白原结合基因 同源重组
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棒状杆菌亮氨酸操縱子在大肠杆菌中的克隆和表达 被引量:1
9
作者 温晋 周天鸿 +1 位作者 郑兆鑫 严维耀 《暨南大学学报(自然科学与医学版)》 CAS CSCD 1989年第1期41-45,共5页
以质粒pTZ22为载体,用HindШ限制酶切割谷氨酸棒状杆菌染色体DNA进行克隆。分离到带有亮氨酸操纵子的4.5kb片段。用Southern切口移位分子杂交检测,证明在4.5kb的片段中既包含有leuB基因,而且对leuA基因也表现同源性。
关键词 基因克隆 亮氨酸操纵子 棒杆菌
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联用抗口蹄疫病毒重组多肽及DNA疫苗诱发豚鼠产生特异免疫应答
10
作者 李光金 吴永庆 +5 位作者 严维耀 徐泉兴 盛祖恬 尤永进 葛燕 郑兆鑫 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2001年第6期1-4,共4页
选择一株O型口蹄疫病毒 (FMDV)外壳蛋白VP1中 2 1~ 40位及 1 41~ 1 60位氨基酸残基两个抗原表位 ,组成串联结构 1 41~ 1 60 ( 2 0AA) 2 1~ 40 ( 2 0AA) 1 41~ 1 60( 2 0AA) ,并与大肠杆菌β 半乳糖苷酶相连 ,在大肠杆菌中表达了... 选择一株O型口蹄疫病毒 (FMDV)外壳蛋白VP1中 2 1~ 40位及 1 41~ 1 60位氨基酸残基两个抗原表位 ,组成串联结构 1 41~ 1 60 ( 2 0AA) 2 1~ 40 ( 2 0AA) 1 41~ 1 60( 2 0AA) ,并与大肠杆菌β 半乳糖苷酶相连 ,在大肠杆菌中表达了此融合蛋白。同时将编码此融合蛋白的基因克隆进真核表达载体中 ,构建成重组表达质粒 pCDM8FZ1。将pCDM8FZ1DNA与融合蛋白混合 ,免疫豚鼠一次 ,观察豚鼠产生免疫应答情况。结果显示 ,豚鼠可产生抗FMDV中和抗体及特异性T细胞增殖反应 ,部分豚鼠能抵抗FMDV的攻击 ,保护率为 50 % ,证明将DNA疫苗与重组多肽疫苗结合起来作一次免疫 ,是可望用于预防FMDV感染的新途径 ,值得进一步探索。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 DNA疫苗 苗组多肽疫苗 免疫应答 预防 口蹄疫 大肠杆菌 免疫接种
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肾上腺髓质素 被引量:1
11
作者 李光金 严维耀 郑兆鑫 《国外医学(生理病理科学与临床分册)》 1997年第2期172-174,共3页
肾上腺髓质素(AM)是近年发现的一种在体内广泛分布的内源性血管活性肽。人AM前体含有185个氨基酸残基,成熟AM由52个氨基酸残基组成。AM具有舒张动脉、降低血压、排钠利尿等生物作用,在人。
关键词 肾上腺髓质素 血管舒缓素 生物学效应
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靶向HBV C基因的siRNA在HepG2.2.15细胞中对HBV的抑制作用
12
作者 肖安 刘斌 +4 位作者 焦晔 赵欣 刘明秋 严维耀 郑兆鑫 《西南国防医药》 CAS 2012年第12期1277-1280,共4页
目的研究靶向HBV C基因的短发夹状RNA(shRNA)表达质粒对HepG2.2.15细胞中HBV的抑制作用。方法设计构建两个靶向HBV C基因的shRNA表达质粒S1和S2,以及用于对照的非同源shRNA表达质粒S3。转染HepG2.2.15细胞后,通过RT-PCR和ELISA方法分别... 目的研究靶向HBV C基因的短发夹状RNA(shRNA)表达质粒对HepG2.2.15细胞中HBV的抑制作用。方法设计构建两个靶向HBV C基因的shRNA表达质粒S1和S2,以及用于对照的非同源shRNA表达质粒S3。转染HepG2.2.15细胞后,通过RT-PCR和ELISA方法分别检测细胞中HBV C基因表达和细胞上清中HBV DNA、HBsAg和HBeAg表达。结果在转染后24 h时,HBV C基因mRNA表达量下降58%~83%,HBV DNA下降了2.44~3.36个log值,HBsAg和HBeAg的表达水平分别降低了51%~79%和50%~77%。S1、S2联合运用可以提高对HBV的抑制作用,而S3无抑制效果。结论靶向HBV C基因的shRNA表达质粒S1、S2及其联合运用,均能有效地抑制HepG2.2.15细胞中HBV的复制和表达。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 RNA干扰 小干扰RNA 短发夹状RNA
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棒状杆菌发酵基因工程研究进展
13
作者 雷呈祥 严维耀 郑兆鑫 《工业微生物》 CAS CSCD 北大核心 1995年第4期32-38,共7页
传统的育种方法由于本身的缺陷受到了基因工程育种的强有力挑战,基因工程技术应用于发酵工业创立了全新的发酵基因工程。传统发酵菌种棒状杆菌的分子生物学研究欣欣向荣,棒状杆菌的受体系统、载体系统以及DNA转移技术都已取得长足进展... 传统的育种方法由于本身的缺陷受到了基因工程育种的强有力挑战,基因工程技术应用于发酵工业创立了全新的发酵基因工程。传统发酵菌种棒状杆菌的分子生物学研究欣欣向荣,棒状杆菌的受体系统、载体系统以及DNA转移技术都已取得长足进展。对棒状杆菌的分子遗传机制的阐明使得构建表达载体并表达目的基因成为现实。利用基因突变和基因重组技术选育优良的棒状杆菌发酵菌种,业已取得明显成效。 展开更多
关键词 基因工程 发酵基因工程 棒状杆菌 发酵工程
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家庭——妇女的职责吗?——社会党国际妇女部第十五次代表大会声明
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作者 严维耀 《中国妇女管理干部学院学报》 CSSCI 1993年第4期69-70,共2页
新的家庭结构 今天,尽管妇女在经济和政治生活中日趋活跃,但在社会文化中占统治地位的仍然是男子。大部分妇女从事职位低的工作、照顾家庭和抚养孩子。然而,随着社会的不断变化,克服男女差别,将越来越成为可能,经济和政治的发展正极大... 新的家庭结构 今天,尽管妇女在经济和政治生活中日趋活跃,但在社会文化中占统治地位的仍然是男子。大部分妇女从事职位低的工作、照顾家庭和抚养孩子。然而,随着社会的不断变化,克服男女差别,将越来越成为可能,经济和政治的发展正极大地冲击着人们的生活和相互关系。 展开更多
关键词 社会党国际 政治生活 单身母亲 社会保障政策 社会促进 社会立法 福利机构 东道国政府 性别歧视 基金管理机构
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穿梭表达载体的构建及产L-苯丙氨酸基因工程菌的选育
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作者 雷呈祥 范长胜 +4 位作者 段峰海 黄伟达 沈水源 严维耀 郑兆鑫 《自然科学进展(国家重点实验室通讯)》 1996年第3期374-377,共4页
基因工程技术已经给发酵工程的发展注入了新的活力,使传统的发酵工业面貌一新。它不仅开创了许许多多新的发酵产品,而且也使不少传统发酵产品的产量、质量和生产技术有了新的飞跃。棒状杆菌中许多菌(如,谷氨酸棒杆菌和黄色短杆菌)是重... 基因工程技术已经给发酵工程的发展注入了新的活力,使传统的发酵工业面貌一新。它不仅开创了许许多多新的发酵产品,而且也使不少传统发酵产品的产量、质量和生产技术有了新的飞跃。棒状杆菌中许多菌(如,谷氨酸棒杆菌和黄色短杆菌)是重要的工业生产菌。这类菌生长迅速、不产胞外蛋白酶、无内毒素、产品易分离纯化,已广泛用于各种氨基酸、核苷酸等的发酵生产。因此开展棒状杆菌的基因工程研究具有重要的理论意义和应用价值。 展开更多
关键词 棒状杆菌 穿梭载体 L-苯丙氨酸 基因工程菌 发酵
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沙门菌侵染机制及减毒菌株传递DNA疫苗的研究进展
16
作者 刘明秋 严维耀 郑兆鑫 《国外医学(微生物学分册)》 2002年第4期19-20,共2页
沙门菌减毒菌株是被深入研究的蛋白疫苗载体,但对沙门菌减毒菌株传递DNA的研究却很少。近几年来,关于沙门菌侵染机制和减毒菌株传递DNA疫苗的研究有新进展,为DNA疫苗的研究提供了新的方向。本文对此予以综述。
关键词 沙门菌 侵染机制 减毒菌株 DNA疫苗 研究进展
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降钙素基因相关肽基因直接注射大鼠 被引量:3
17
作者 孙立春 唐炯 +7 位作者 葛昕晖 黄妤 李光金 严维耀 汤健 郑兆鑫 闵阳 叶汉章 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1998年第6期557-560,共4页
所设计的基因表达一个含降钙素基因相关肽(CGRP,37个氨基酸)、及其N端信号肽和C端酰胺化位点的多肽.该基因克隆到哺乳动物表达载体pBPV上并构成pBPVCGRP.将此质粒DNA直接注射自发高血压大鼠并导致其血压... 所设计的基因表达一个含降钙素基因相关肽(CGRP,37个氨基酸)、及其N端信号肽和C端酰胺化位点的多肽.该基因克隆到哺乳动物表达载体pBPV上并构成pBPVCGRP.将此质粒DNA直接注射自发高血压大鼠并导致其血压在注射样品后3~22d内明显下降,下降幅度超过了12%,在第16天甚至达到了2442%.基因直接注射比CGRP本身的降压作用维持时间更久. 展开更多
关键词 高血压 大鼠 基因治疗 CGRP
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基因疫苗——防治疾病的新武器 被引量:12
18
作者 陆军 严维耀 郑兆鑫 《生命的化学》 CAS CSCD 2000年第1期17-19,共3页
关键词 基因疫苗 表达文库免疫 疾病防治 作用机制
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CpG序列的免疫激活机理及应用 被引量:2
19
作者 陆军 严维耀 郑兆鑫 《生物技术通报》 CAS CSCD 1999年第5期30-33,共4页
CpG序列是一些在动物体内具有强烈的免疫激活功能的寡聚脱氧核苷酸。本文探讨了CpG 序列在动物体内激活免疫反应的作用机理,概述了CpG应用研究的进展,展望了CpG
关键词 CPG序列 作用机理 应激激酶 Thl类 免疫药剂
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用特异性抗体筛选日本血吸虫基因组DNA基因库 被引量:1
20
作者 陶伊文 徐裕信 +2 位作者 刘述先 郑兆鑫 严维耀 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 1990年第4期264-266,共3页
用酶免疫测定法筛选日本血吸虫(S.j.)基因组DNA基因库,先将λ噬菌体(λgt11),重组体噬菌斑的表达抗原转移至硝酸纤维(NC)膜,然后用经导入λgt11的大肠杆菌Y1090细胞裂解液吸收的感染兔血清(IRS)检测。结果,从97只平板初筛出8个可能阳性... 用酶免疫测定法筛选日本血吸虫(S.j.)基因组DNA基因库,先将λ噬菌体(λgt11),重组体噬菌斑的表达抗原转移至硝酸纤维(NC)膜,然后用经导入λgt11的大肠杆菌Y1090细胞裂解液吸收的感染兔血清(IRS)检测。结果,从97只平板初筛出8个可能阳性噬菌斑,经再次筛选,8个中2个仍为阳性。其中1个阳性克隆经纯化后导入Y1089细胞扩增,其表达产物经ELISA复筛进一步证实S.j.抗原阳性。表明该克隆编码S.j.抗原,该克隆的表达产物能被IRS识别。该免疫筛选方法能有效地分离单个编码S.j.抗原的克隆,且筛选效率高(每次可筛选1×10~5噬菌斑形成单位),结果可靠、特异,不需要同位素标记技术,操作简便,为进一步筛选编码诱导S.j.保护性免疫力的抗原的基因打下基础。 展开更多
关键词 日本血吸虫 基因库筛选 DNA基因库
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