超高效液相色谱法测定五子衍宗丸中五味子甲素的含量

目的建立五子衍宗丸中五味子甲素含量测定的超高效液相色谱法(UPLC),并比较不同溶剂对五味子甲素的提取效果。方法色谱柱:Waters ACQUITY UPLC BEH C_(18)(2.1 mm×100 mm,1.7μm);流动相ACN∶0.2%HAc=49∶51;流速0.4 ml/min,柱温30℃,进样体积1μl,检测波长250 nm。结果五味子甲素在0.001 3-0.05μg范围内具有良好的线性关系(r=0.999 9);平均回收率为101.73%,RSD为2.29%;70℃蒸馏水、常温蒸馏水、70%乙醇、无水乙醇和DMSO 5种溶剂提取五味子甲素得率分别为,0.013%,0.012%,0.008%,0%和0%。结论 UPLC简便、准确、重现性好,可用于五子衍宗丸中五味子甲素的含量测定。

木豆叶对心肌缺血-再灌注损伤大鼠心功能的影响及其作用机制初探

目的:探讨木豆叶对心肌缺血-再灌注损伤大鼠心功能的影响及其可能的作用机制。方法:60只健康成年SD大鼠被随机分成6组,每组10只。结扎大鼠左冠状动脉前降支(LAD)30 min,再灌注90 min,在不同时间点记录大鼠心率(HR)、平均动脉血压(MAP)、左室发展压(LVDP)、左室内压最大上升速率(+dp/dtmax)和左室内压最大下降速率(-dp/dt_(max));测定大鼠血清中丙二醛(MDA)含量及乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GXH-Px)、一氧化氮(NO)和肌酸激酶(CK)的活性。结果:缺血后模型组血流动力学指标开始逐渐下降,除HR外,MAP、LVDP及±dp/dt_(max)较T_0时显著降低(P<0.05);应用木豆叶后,各指标在某些时间点虽仍低于T0时刻,但差异无统计学意义。缺血-再灌注可导致大鼠血清MDA含量和LDH、CK活性显著升高,SOD、NO、GSH-Px活性显著降低(P<0.05),应用木豆叶能显著对抗这种变化。结论:木豆叶能对抗心肌缺血-再灌注引起的大鼠心功能紊乱,作用机制可能与其抗氧化有关。

当归不同炮制品的UPLC指纹图谱与多成分含量测定研究

选择来源于甘肃驮乡、岷县、渭源3个产地的10批当归为研究对象,通过规范的炮制方法分别炮制成生当归、酒当归、土当归。采用UPLC建立当归3种炮制品的指纹图谱,并对其中9种酚酸及苯酞类成分进行指认。采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》进行相似度分析,结果显示当归同一炮制品样品色谱峰基本相似,相似度均大于0. 950;不同炮制品与其对照图谱之间差别不明显,相似度亦均大于0. 950。在采用主成分分析和正交偏最小二乘判别分析,寻求组间差异性成分的基础上,采用开发的改良距离系数法,可有效的通过指纹图谱相似度对生当归、酒当归、土当归进行区分。同时采用UPLC建立了当归9种酚酸及苯酞类成分含量测定方法,并进行了不同炮制品之间的比较。实验结果显示与生当归相比,各成分均有变化,其中酒当归中阿魏酸松柏酯及藁本内酯含量明显上升;当归土炒之后阿魏酸松柏酯明显上升。该实验建立的方法可有效地对当归不同炮制品进行区分,同时对其中主要成分进行含量测定。

基于荧光定量PCR技术的当归不同炮制品中大肠埃希菌数量测定方法开发及比较研究

目的对当归不同炮制品中大肠埃希菌变化进行定量分析。方法建立荧光定量PCR方法,对当归不同炮制品、不同产地、不同收集企业、不同储藏时间的大肠埃希菌进行定量分析。结果不同炮制品中大肠埃希菌数量变化为生当归>土炒当归>酒当归;在不同产地的当归中以甘肃岷县地区所含的大肠埃希菌的数量最少;与零售企业相比,生产销售企业的当归和酒当归中大肠埃希菌的数量较少;不同储藏时间对当归和酒当归中大肠埃希菌数量有一定影响,随储藏时间的增加,大肠埃希菌的数量也在增加。对部分代表性样品进行平板计数法与荧光定量PCR法比较时发现,平板计数法结果多呈阴性,荧光定量PCR结果均呈阳性。结论所建立的荧光定量PCR法特异性、灵敏度、可靠性以及报告周期均优于平板计数法,可为当归不同炮制品中大肠埃希菌的快速、准确定量检测提供有效手段。

基于实时荧光定量PCR技术的当归不同炮制品中金黄色葡萄球菌含量测定方法的开发及比较

目的:对当归不同炮制品中金黄色葡萄球菌的变化情况进行定量分析。方法:建立了实时荧光定量聚合酶链式反应法(Real-time PCR),对不同产地、不同收集企业、不同储藏时间当归饮片中金黄色葡萄球菌进行定量分析。荧光定量反应体系为SYBR Premix Ex Taq Ⅱ10μL,正向引物、反向引物(10μmol·L-1)各0.8μL,模板/基因组DNA 1μL,双蒸水7.4μL。荧光定量反应条件为①扩增曲线:94℃预变性30 s,94℃变性10 s,60℃退火12 s,72℃延伸30 s,循环45次,72℃单点检测信号;②熔解曲线:72℃开始检测,以0.5℃为台阶温度停留15 s采集荧光。根据Real-time PCR的测定结果,分别从生当归、酒当归和土炒当归中选择具有代表性的样品进行平板计数法测定,并与Real-time PCR检测结果进行比较。结果:不同炮制品中金黄色葡萄球菌含量排序为生当归>土炒当归>酒当归;在不同产地的当归饮片中均以甘肃渭源地区样品所含的金黄色葡萄球菌含量为最低;与零售企业相比,生产销售企业的生当归和酒当归中金黄色葡萄球菌含量较低;不同储藏时间对生当归和酒当归中金黄色葡萄球菌含量有一定的影响,随储藏时间的增加,金黄色葡萄球菌的含量增加。对部分代表性样品进行检测时发现,平板计数法检测结果数量级较Real-time PCR低3~4个数量级。结论:建立的Real-time PCR的特异性、灵敏度、准确性以及报告周期均优于平板计数法,可为当归不同炮制品中金黄色葡萄球菌的快速、准确定量检测提供有效技术手段。

基于多成分测定及指纹图谱评价不同产地栀子质量

建立超高效液相色谱法测定栀子中7种成分的方法,同时构建栀子指纹图谱识别模式,并结合多元统计分析评价不同产地栀子质量。采用Waters Acquity UPLC BEH C18色谱柱(2.1 mm×50 mm,1.7μm),以0.1%甲酸水-乙腈为流动相,流速0.4 m L·min^-1,梯度洗脱,多波长检测进行含量测定和指纹图谱研究。含量测定结果显示各产地栀子7种成分总含量为浙江>福建>江西>四川。采用"中药色谱指纹图谱相似度评价系统"(2012版)进行相似度评价,样品的相似度均大于0.95。建立了32批栀子药材共有图谱并标定了19个共有峰,经聚类分析(HCA)和主成分分析(PCA),将不同产地栀子样品分成3组,并进一步通过偏最小二乘法-判别分析(PLS-DA)筛选出栀子苷、西红花苷Ⅰ等5个差异成分。该研究所建立的栀子UPLC多成分含量测定和指纹图谱的方法准确可行,可作为不同产地栀子质量评价的一种手段。

栀子姜炙工艺及姜炙前后化学成分变化研究

优选姜栀子炮制工艺,建立栀子姜炙前后的超高效液相(UPLC)指纹图谱,并同时测定京尼平苷酸、绿原酸、京尼平龙胆双糖苷、栀子苷、芦丁、西红花苷Ⅰ和西红花苷Ⅱ7种成分含量。采用Waters ACQUITY UPLC BEH C18(2.1 mm×50 mm,1.7μm)色谱柱,以乙腈-0.1%甲酸水为流动相,流速0.4 m L·min^-1,梯度洗脱,用相似度评价、主成分分析(PCA)、偏最小二乘判别分析(PLS-DA)进行数据处理与分析。结果显示,样品中标定了20个共有峰,相似度结果均大于0.97。主成分分析和偏最小二法乘判别分析法结果表明栀子和姜栀子在化学成分组成和含量上有差异,且可明显区分,并揭示了贡献最大的9个潜在标志性色谱峰。含量测定结果表明,栀子经姜炙后绿原酸、西红花苷Ⅰ、西红花苷Ⅱ的含量降低,其余4种成分含量增加。该实验所优选的姜栀子制备工艺稳定可行,建立的UPLC指纹图谱及含量测定方法能够有效地区分栀子和姜栀子。

不同加工方法对党参叶中抗营养因子含量影响研究

目的为综合利用中药党参的植物资源,以非药用部位党参叶为试验材料,比较新鲜与晒、炒、蒸、冷冻这四种加工方式中党参叶抗营养因子的含量,以期探明加工方式对党参叶抗营养因子含量变化的影响。方法采用BAEE法测定胰蛋白酶抑制剂活性,CBB-G250色素结合法测定植物凝集素含量与三氯化铁法测定植酸含量。结果新鲜党参叶植酸与植物凝集素含量最高,含量分别为8.76%、0.767mg·g-1,经过晒、炒、蒸、冷冻这四种加工方式后抗营养因子含量与活性有所降低,其中蒸制过的党参叶植酸与植物凝集素含量最低,炒制党参叶的胰蛋白酶抑制率活性最低。结论对党参叶中的3种抗营养因子进行了研究,为党参叶申请新食品原料奠定了基础。