流式细胞仪的应用体会

流式细胞仪是集激光、电子、光电测量、细胞荧光、单克隆等技术为一体的仪器,具有灵敏度高、重复性好、特异性强、方法灵活、分析速度快等优点,从流式细胞仪实际应用的角度介绍、总结了用流式细胞仪标本处理、染色、检测分析过程中的质量控制体会.

胸腔镜手术与小切口开胸肺切除术后细胞因子反应的随机对照研究

背景与目的:细胞因子在诱导急性期炎症反应及免疫反应中起重要作用,能否通过微创入路手术减少细胞因子的释放,减轻术后急性期反应和免疫抑制是肿瘤外科治疗关心的问题。本研究希望通过前瞻性随机对照研究,比较电视辅助胸腔镜手术(video-assisted thoracoscopic surgery,VATS)与小切口开胸(minimal incision thoracotomy,MIT)肺切除术治疗临床早期非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC),对比两种术式术后的细胞因子水平。方法:从2004年3月～2006年12月有47例CT提示为临床早期NSCLC、肿物直径≤6cm、符合入组条件的患者被随机分为VATS组(24例)和MIT组(23例),VATS组有2例患者因术中不能控制的出血和胸膜广泛粘连转为开胸手术而被剔除,MIT组1例因术中输血被剔除。使用流式微球分析技术(cytometric bead array,CBA)测定两组患者术前、术后4、24、48h血浆中肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-α,TNF-α),白介素-2(interleukin-2,IL-2)、IL-4、IL-6和IL-10的浓度。结果:术后两组患者TNF-α、IL-2和IL-4的血浆浓度均较低,差异无统计学意义。术后4h两组患者IL-6和IL-10均达峰值浓度。其中IL-6峰值浓度VATS组(91.0±63.9)ng/L,MIT组(84.2±53.1)ng/L,IL-10峰值浓度VATS组(12.6±8.1)ng/L,MIT组(16.3±11.2)ng/L,两组间差异无统计学意义(P=0.732和P=0.235)。重复测量数据的方差分析显示两组间4个时间点IL-6和IL-10的浓度差异均无统计学意义(F=0.143,P=0.708和F=0.000,P=0.996)。结论:胸腔镜手术和小切口开胸肺切除术后患者细胞因子反应无差异,其临床意义有待进一步研究。

喉咽鳞癌患者外周血T淋巴细胞亚群和NK细胞活性分析

背景与目的:T淋巴细胞亚群及NK细胞是主要的细胞免疫形式,通过对两者的研究可以了解细胞免疫在肿瘤发生、发展的作用。喉咽鳞癌患者可能存在一定程度的细胞免疫缺陷,本研究是通过检测外周血T淋巴细胞亚群及NK细胞活性,了解喉咽鳞癌患者的细胞免疫功能。方法:用流式细胞仪对78例喉咽鳞癌患者的外周血进行T淋巴细胞亚群及NK细胞活性的检测,并取20例非肿瘤患者的外周血作为对照组。结果:喉咽鳞癌患者组较非肿瘤患者组CD4淋巴亚群、CD4/CD8比值下降,CD8淋巴亚群升高;NK细胞活性下降。T3～4组较T1～2组、N+组较N0组都有CD4淋巴亚群、CD4/CD8比值下降;NK细胞活性下降。中低分化组CD4淋巴亚群、CD4/CD8比值下降(均P<0.05)。结论:喉咽鳞癌患者CD4T淋巴细胞亚群及NK细胞活性受到抑制,细胞免疫功能降低;检查外周血T淋巴细胞亚群及NK细胞活性有助于喉咽鳞癌患者的细胞免疫功能监测。

112例淋巴系统恶性肿瘤骨髓免疫表型分析

背景与目的:淋巴细胞白血病和淋巴瘤骨髓侵犯的诊断以细胞形态学为基础,而免疫分型可通过获得肿瘤细胞分化和发育阶段的信息使淋巴系统恶性肿瘤的诊断更为准确,为临床合理治疗和预后判断提供重要的科学依据。本研究应用多参数流式细胞术(flow cytometry,FCM)探讨淋巴细胞白血病和非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin's lymphoma,NHL)骨髓侵犯的免疫表型特点。方法:收集112例病理确诊NHL并伴骨髓侵犯和淋巴细胞白血病患者的骨髓标本。应用FCM检测肿瘤细胞的免疫表型。结果:45例前驱B淋巴母细胞白血病/淋巴瘤(precursor B lymphoblastic lymphoma/leukemia,B-ALL/LBL)主要表达CD19、CD10、TdT、CD34、HLA-DR和CD20;32例前驱T淋巴母细胞白血病/淋巴瘤(precursor T lymphoblastic lymphoma/leukemia,T-ALL/LBL)主要表达胞内CD3(cytoplasmicCD3,CyCD3)、CD7、CD5、TdT、膜表面CD3(surfaceCD3,sCD3)和HLA-DR。77例前驱淋巴细胞肿瘤中,28例(36%)有髓系抗原CD13、CD33的表达;9例(20%)B-ALL/LBL病例有CD20与CD34共同表达,28例(87.5%)T-ALL/LBL病例有CyCD3与TdT共同表达。成熟淋巴细胞肿瘤35例,其中17例慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤主要表达CD19、CD20、CD5和HLA-DR,并有CD19与CD5共同表达。4例弥漫大B细胞性淋巴瘤主要表达CD19、CD20、CD10和HLA-DR。3例伯基特淋巴瘤主要表达CD19、CD10、CD20、SIgM。1例套细胞淋巴瘤表达CD5、CD19、CD20、HLA-DR。5例外周T细胞淋巴瘤(PTCL)主要表达sCD3、CD5、CD7、CD4或CD8。1例间变性大细胞淋巴瘤主要表达sCD3、HLA-DR。4例NK/T细胞肿瘤表达CD56、HLA-DR,也表达CD7或CD4或CD8。成熟淋巴细胞肿瘤不表达早期抗原如CD34、TdT。成熟淋巴细胞肿瘤可伴有髓系抗原CD13、CD33的表达。结论:淋巴系统恶性肿瘤侵犯骨髓采用形态学结合FCM免疫学分型可获得T、B细胞来源、肿瘤细胞分化阶段和异常抗原表达等参数,有助于临床诊断和微小残留病灶的检测。

FG020327逆转肿瘤多药耐药性的作用及其机制

背景与目的肿瘤细胞过量表达P鄄糖蛋白穴P-glycoprotein.P-gp雪导致多药耐药穴multidrug resistance,MDR雪是目前肿瘤化疗的一大障碍,使用多药耐药逆转剂与抗癌药物联合化疗是克服临床多药耐药的重要方法。本研究对一种新的多芳基取代咪唑化合物FG020327的体外逆转活性及其逆转机制进行了探讨。方法以MTT法检测FG020327对多药耐药肿瘤细胞MCF-7/ADR及KBv200的耐药逆转活性;以荧光分光光度计法检测FG020327对MCF-7/ADR细胞内抗癌药物阿霉素累积的影响;以罗丹明蓄积实验检测该化合物对P-gp功能的影响。结果FG020327在体外具有较强的逆转活性,在5μmol/L浓度下使多药耐药细胞KBv200对长春新碱的敏感性增加44.9倍,逆转活性是公认的强逆转剂维拉帕米的3倍熏但它对敏感株对抗癌药物的敏感性基本无影响。2.5、5和10μmol/L的FG020327使MCF-7/ADR细胞中阿霉素的累积分别增加2.3、2.7和3.7倍,但是在敏感株MCF鄄7细胞却观察不到阿霉素累积的增加。FG020327浓度依赖性增加KBv200细胞内的罗丹明蓄积,但对敏感株KB细胞内的罗丹明蓄积无影响。结论FG020327具有较强的体外逆转MDR的活性,它可能通过抑制P鄄gp功能及增加MDR细胞内抗癌药物的累积逆转MDR。

髓系抗原在T淋巴母细胞淋巴瘤中表达的临床意义

背景与目的：前驱T淋巴母细胞淋巴瘤（precursor Tlym phob lasticlymp hom a,T-LBL）是一类高侵袭型恶性淋巴系统肿瘤,部分患者合并有髓系抗原表达,其临床意义值得探索。本文通过分析T-LBL患者合并髓系抗原表达的临床特点以及与近期疗效的关系,探讨其预后价值。方法：收集2000年1月至2008年7月中山大学肿瘤防治中心内科收治的45例初治的T-LBL患者资料,患者年龄5.5-66岁,中位年龄14岁,根据患者骨髓或胸水流式细胞术免疫分型分为髓系抗原阳性表达[My（＋）组]和阴性表达[My（-）组]两组。观察和分析髓系抗原的表达与临床特征、近期疗效及2年总生存率的关系。结果：45例T-LBL患者中My（＋）组18例（40.0%）,My（-）组27例（60.0%）。全组髓系抗原表达与患者初治的LDH水平呈负相关,与其他临床特征无明显相关性。My（＋）组诱导期完全缓解（completere mission,CR）率为38.8%,My（-）组诱导期CR率为70.3%,两组相比差异有统计学意义（P=0.028）。My（＋）组2年总生存为51.9%,My（-）组2年总生存时间（overall survival,OS）为78.7%,两组相比差异有统计学意义（P=0.036）。不同年龄亚组分析显示儿童青少年LBL患者髓系抗原阳性组与阴性组在近期疗效和2年总生存率方面无明显差异;成人LBL患者髓系抗原阳性组在近期疗效和2年总生存均低于阴性组患者。单因素和多因素分析显示年龄和髓系抗原表达是T-LBL的不良预后因素。结论：本研究显示髓系抗原阳性表达的成人T-LBL较阴性表达者近期CR率低,2年总生存率较低;而对儿童青少年T-LBL近期疗效和生存率无明显影响。

多参数流式细胞术在淋巴细胞白血病和非霍奇金淋巴瘤骨髓侵犯诊断的应用

背景与目的:骨髓形态学检查可诊断淋巴细胞白血病,结合淋巴结活检可诊断非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin’s lymphoma,NHL)侵犯骨髓,但形态学仅是初步的诊断,采用免疫分型而获得肿瘤细胞来源及发育阶段的资料是目前诊治淋巴系统恶性肿瘤所必需的。本研究探讨多参数流式细胞术(flow cytometry,FCM)在淋巴细胞白血病、NHL骨髓侵犯的诊断和免疫分型方面的应用价值。方法:取初治白血病患者骨髓标本11例和NHL患者骨髓侵犯的骨髓标本41例,以及2例分别表现为巨大纵隔肿块和腹部巨大肿块的患者因无法取得病理标本而取骨髓检测的骨髓标本2例。采用B细胞系列抗体、T细胞系列抗体、粒细胞系列抗体,按常规行FCM免 疫表型检测,CD45结合两个系列单抗或阶段特异性单抗进行三色免疫荧光染色,CD45/SSC设门后可将骨髓细胞清晰地分出成熟细胞和幼稚细胞群,然后行FSC、SSC、McAb1-FITC、McAb2-PE、CD45-Cychrome五参数分析。结果:11例白血病患者骨髓形态学经FCM的免疫分型获得进一步确诊和分型。41例NHL骨髓侵犯标本免疫表型与其淋巴结病理免疫组化相符合的为80.5％(33/41),不相符的有19.5％(8/41),结合临床、病理、骨髓形态学诊断和骨髓FCM的结果,最终获得明确诊断。2例分别为巨大纵隔肿块和腹块的患者仅靠骨髓形态学和骨髓FCM?

BD流式细胞仪数据处理系统的升级

我院1997年购入美国BD公司的FACS Calibur流式细胞仪,其数据处理系统已不能满足目前的工作需要,若重新购置一套数据处理系统,价格昂贵.因此,我们对其进行系统软硬件的升级,用很低的成本解决了上述问题.现将升级过程介绍如下.

血液病患者红细胞可滤过性的初步研究

采用DXC—300型核孔滤过膜红细胞变形能力测定仪测定红细胞滤过性,籍以反映红细胞变形能力。26例血液病人红细胞滤过指数(EFI)和25例正常人相比,前者EFI值显著增高。其中14例白血病患者与12例非白血病患者的EFI相比较未见明显差异。24例血液病人EFI与其自身的血红蛋白(HB),红细胞数(RBC),红细胞压积(HCT),红细胞平均体积(MCV)的相关性研究发现,EFI与HB、HCT无关,而与MCV呈负相关。

脑胶质瘤患者T淋巴细胞亚群检测的临床意义

目的探讨T淋巴细胞亚群与胶质瘤恶性程度及其预后的关系，寻找术前评估胶质瘤恶性程度及其预后的临床免疫学指标。方法对中山大学肿瘤防治中心神经外科自2003年1月至2004年12月收治住院的117例脑肿瘤患者[其中胶质瘤共85例，高级别组（WHOⅢ～Ⅳ级）45例，低级别组（WHOⅠ～Ⅱ级）40例；脑膜瘤32例]术前用流式细胞仪（FACS）测定T淋巴细胞的含量，统计分析不同级别胶质瘤、脑膜瘤之间免疫学指标的差异，并依据术前外周血T淋巴细胞亚群检测结果，把胶质瘤患者分为CD4^＋／CD8^＋比值〉1及CD4^＋／CD8^＋比值〈1两组，随访3～5年，作生存分析，比较两组之间的差异。结果统计分析结果显示，高级别胶质瘤组较低级别胶质瘤组CD4^＋／CD8^＋比值下降、CD8^＋升高，差异均有统计学意义（P〈0．05），其余指标差异无统计学意义。高级别胶质瘤组较脑膜瘤组CD4^＋／CD8^＋比值下降、CD8^＋升高，差异均有统计学意义（P〈0．05），其余指标差异无统计学意义。低级别胶质瘤组较脑膜瘤组CD4^＋／CD8^＋比值下降，差异有统计学意义（P〈0．05），其余指标差异无统计学意义。胶质瘤组与脑膜瘤组比较，CD4^＋、CD4^＋／CD8^＋值下降、CD8^＋升高，差异均有统计学意义（P〈0．05），CD3^＋差异无统计学意义。CD4^＋／CD8^＋比值〉1组患者48例随访3～5年，死亡21例（43．8％），中位生存期31个月；CD4^＋／CD8^＋比值〈1的患者37例，死亡23例（62．2％），中位生存期16个月。两者行生存分析Kaplan Meier法检验，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论术前外周血T淋巴细胞亚群与胶质瘤的恶性程度相关。CD4^＋／CD8^＋比值低的患者生存时间较短，预后差。术前外周血T淋巴细胞亚群检测可以作为临床评估胶质瘤恶性程度及预后的参考指标。