下调SRR可缓解Aβ对PC12细胞的神经毒性和突触损伤

目的研究下调丝氨酸消旋酶(SRR)缓解β-淀粉样蛋白(Aβ)对PC12细胞的神经毒性、突触损伤作用及其可能机制。方法(1)将体外培养的PC12细胞分为0、20、40、80μmol/L Aβ_(25-35)组,分别加入0、20、40、80μmol/L Aβ_(25-35)作用24 h,采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测细胞存活率,采用Western blotting实验检测细胞SRR蛋白的表达。用40μmol/L Aβ_(25-35)分别处理PC12细胞0、12、24、48 h,采用CCK-8法、Western blotting实验分别检测细胞存活率、SRR蛋白的表达。(2)将PC12细胞分为对照组、无义序列组、SRR小干扰RNA(siRNA)1组、SRR siRNA 2组、SRR siRNA 3组,后4组细胞分别转染SRR无义序列或不同SRR siRNA序列,48 h后采用Western blotting实验检测细胞SRR蛋白的表达,选择效果最佳的SRR siRNA用于后续实验。(3)将PC12细胞分为对照组、AD组、AD+无义序列组、AD+SRR siRNA组,后2组细胞分别瞬时转染无义序列或SRR siRNA,作用48 h,后3组细胞均加入40μmol/L Aβ_(25-35),对照组加入等量溶剂。处理24 h后采用Western blotting实验检测细胞SRR蛋白的表达,CCK-8法检测细胞存活率,Hoechst 33258染色检测细胞凋亡,ELISA法检测细胞半胱氨酸蛋白酶3(Caspase 3)活性,Western blotting实验检测细胞活化Caspase 3、N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体相关蛋白、突触后致密蛋白95(PSD95)的表达。结果(1)0、20、40、80μmol/L Aβ_(25-35)组细胞存活率依次降低,SRR蛋白的表达依次增高,差异均有统计学意义(P<0.05)。40μmol/L Aβ_(25-35)处理PC12细胞0、12、24、48 h后细胞存活率依次降低,SRR蛋白的表达依次增高,差异均有统计学意义(P<0.05)。(2)SRR siRNA 1组、SRR siRNA 2组、SRR siRNA 3组细胞SRR蛋白的表达均低于对照组和无义序列组,差异均有统计学意义(P<0.05),其中SRR siRNA 2组降低最明显。(3)与对照组比较,AD组细胞SRR蛋白的表达、细胞凋亡率升高,细胞存活率降低,Caspase 3活性和活化Caspase 3蛋白表达升高,NMDA受体2A(NMDAR2A)和NMDA受体2B(NMDAR2B)蛋白的表达升高,PSD95蛋白的表达降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与AD组比较,AD+SRR siRNA组细胞SRR蛋白的表达、细胞凋亡率降低,细胞存活率升高,Caspase 3活性和活化Caspase 3蛋白表达降低,NMDAR2A蛋白的表达降低,PSD95蛋白的表达升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论下调SRR可通过降低PC12细胞内NMDAR2A蛋白表达,缓解细胞NMDA受体的过度激活,减少细胞凋亡,提高细胞存活率,保护Aβ_(25-35)损伤的神经细胞,还可以升高PSD95蛋白的表达,缓解突触损伤。

伴有脑萎缩的抗titin抗体阳性的自身免疫性脑炎1例

抗titin抗体阳性的自身免疫性脑炎是一种罕见的疾病,诊断和治疗相对困难。当抗体检测结果为阴性时,不能排除自身免疫性疾病的可能性,必要时需要重新检测抗体谱。