葛根蛋白及其酶解物的体外抗氧化活性和功能特性

以葛根为原料,采用碱提法提取葛根蛋白,对其进行酶解,研究不同蛋白酶(碱性蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶)对葛根蛋白的酶解效果及其酶解物的抗氧化活性和功能特性,并与葛根蛋白进行对比。3种蛋白酶对葛根蛋白的酶解效果及其酶解物抗氧化特性研究结果表明,碱性蛋白酶酶解物水解度和蛋白回收率最佳,并具有良好的体外抗氧化活性。功能特性研究结果表明,与葛根蛋白相比,3种葛根蛋白酶解物的溶解性、持油性和起泡性均有不同程度提升,但持水性、起泡稳定性、乳化性及乳化稳定性均有所下降。其中碱性蛋白酶酶解物的功能特性最优,pH值为5时,溶解度达98.43%;温度为60℃时,持油性达4.23%;pH值为6时,起泡性达106%。结果表明,碱性蛋白酶酶解效率高,且适合用于提高葛根蛋白抗氧化活性及功能特性。

南、北五味子蛋白抗氧化活性和对HepG2细胞氧化应激损伤的修复作用

采用碱提酸沉法提取南五味子蛋白(Schisandra sphenanthera protein,SSP)和北五味子蛋白(Schisandra chinensis protein,SCP),并测定其体外清除自由基能力、还原能力和对H_(2)O_(2)诱导的HepG2细胞氧化损伤的修复作用。采用CCK-8法检测细胞增殖率,荧光检测胞内活性氧水平,酶联免疫吸附法检测细胞氧化应激产物和抗氧化物酶系活性。结果表明,SSP清除自由基和还原能力均优于SCP,SSP与SCP都能对H_(2)O_(2)诱导HepG2造成的细胞生长抑制起到修复作用(P<0.05),显著降低胞内活性氧、丙二醛水平(P<0.05),显著提高超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶和谷胱甘肽的水平(P<0.05),且SSP对H_(2)O_(2)诱导的HepG2氧化应激损伤修复能力优于SCP。综上,2种五味子蛋白中SSP更适合应用于抗氧化功能性食品或保健食品工业中。

葛根蛋白酶解物大孔树脂吸附工艺优化及其体外抗氧化活性研究

目的:优化大孔树脂吸附葛根蛋白酶解物工艺及其抗氧化活性研究。方法:采用Box-Behnken响应面法确定大孔树脂吸附葛根蛋白酶解物最佳工艺。以维生素C为对照,测定最佳工艺下纯化前后葛根蛋白酶解物的抗氧化活性。结果:大孔树脂的最佳吸附—解吸工艺为上样液质量浓度10.0 mg/mL,洗脱液流速2.6 mL/min,洗脱液乙醇体积分数74%,纯化后葛根蛋白酶解物含量提升至37.19%。大孔树脂纯化后的葛根蛋白酶解物对DPPH自由基、ABTS+自由基、羟自由基的清除率均强于吸附前的。结论:大孔树脂纯化后的葛根蛋白酶解物抗氧化效果良好,可以作为一种潜在的蛋白多肽应用于食品中。

基于熵权法和灰色关联度结合成分分析优选人参提取物抗氧化活性最佳极性部位

目的:考察人参不同极性部位抗氧化活性差异,筛选最佳活性部位。方法:本研究以石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇依次萃取人参水提物。通过高效液相色谱(High Performance Liquid Chromatography,HPLC)、紫外分光光度计测定人参不同极性部位总酚酸、总皂苷、总多糖、总黄酮、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1含量;以DPPH自由基、ABTS^(+)自由基、羟基自由基、超氧阴离子自由基及细胞氧化损伤模型测定不同极性部位间体外抗氧化活性;结合熵权法与灰色关联度分析,建立人参不同极性部位的质量评价模型。对人参不同极性部位的12个质量特性指标赋权,最终优选出人参抗氧化最佳极性部位。结果:人参不同极性部位成分含量及抗氧化活性差异明显。其中,正丁醇部位的总酚酸、总黄酮、人参皂苷Rb1含量高于其他部位。正丁醇部位抗氧化活性最强,对DPPH自由基、ABTS^(+)自由基、羟基自由基、超氧阴离子自由基具有一定的清除能力,相应的IC50值分别为0.14、0.57、0.92、0.75 mg/mL。另外,结合质量评价模型得到人参不同极性部位的相对关联度值的范围为0.352~0.618,正丁醇部位测得相对关联度最高(0.618),进一步表明正丁醇部位抗氧化活性最强。结论:综合熵权法和灰色关联度分析的评价结果,初步优选出正丁醇部位为人参抗氧化最理想部位,为人参作为天然抗氧化剂的研究及人参抗氧化食品的开发应用提供理论基础。

人参治疗阿尔茨海默病药理作用及机制研究进展

阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)是最常见的神经退行性疾病,因大脑逐渐退化而引起记忆、日常功能减退和行为障碍问题,俗称“老年痴呆”。痴呆症患者有多种类型,阿尔茨海默病占比最大,目前尚无逆转其病程的特效药物。近年来,对这种疾病的发病机制及药物尤其是中药及复方治疗方面,逐步取得了实质性进展,利用动物与细胞模型,诸多研究学者已经从不同角度证实了人参药材提取物、有效部位、单体化合物及复方人参制剂治疗AD具有显著的疗效。就近年来国内外关于人参对AD的治疗新进展研究文献进行梳理归纳,为将其开发成治疗阿尔茨海默病和各种类型记忆障碍的健康产品提供参考和科学依据。

五味子四种组分蛋白结构、理化性质和功能特性比较

以北五味子脱脂粉为原料,通过奥斯本四步法提取清蛋白、球蛋白、醇溶蛋白和谷蛋白,分析比较4种组分蛋白的结构、理化性质和功能特性。结果表明,4种组分蛋白所含有的营养成分差异显著,其中谷蛋白的蛋白质含量最高而脂肪含量最低,同时蛋白提取率最高;4种组分蛋白还原性电泳和非还原型电泳在10~180 kDa和3.3~33.0 kDa亚基条带分布存在差异,超低分子质量电泳发现醇溶蛋白分子质量分布于5 kDa;扫描电镜观察出4种组分蛋白不同的表面结构和聚集程度,谷蛋白最为松散;傅里叶变换红外光谱证实了不同组分蛋白二级结构的差异。此外,谷蛋白的热稳定性、溶解性、持水性、持油性、乳化性和乳化稳定性及起泡性和泡沫稳定性均为最优,揭示出4种组分蛋白组成和结构的不同,导致其表现出的理化性质和功能特性也存在差异。

Box-Behnken设计-响应面法优化桔梗醇提工艺及醇提物美白活性分析

利用响应面法优化桔梗醇提工艺,并考察其美白活性。以提取时间、提取次数、溶媒量为影响因素,采用单因素考察和Box-Behnken响应面设计试验,优化桔梗醇提工艺;以酶抑制活性和抗氧化为指标考察提取物的美白活性。结果表明,桔梗的最佳乙醇提取工艺为提取次数3次,提取时间1 h,溶媒量8倍,该条件下制备的桔梗醇提物中桔梗皂苷D、熊果苷、桔梗总皂苷的提取率分别为0.122%±0.003%、0.128%±0.005%、0.582%±0.007%,且具有良好的酪氨酸酶抑制活性(92.39%)、透明质酸酶抑制活性(88.26%)、细胞黑色素抑制效果及自由基DPPH(90.19%)和ABTS^(+)(80.57%)清除活性。优化的桔梗醇提工艺稳定可靠,可操作性好,该工艺提取的桔梗醇提物具有良好的美白和抗氧化活性,为进一步研究桔梗生物活性及美白机制提供科学依据。

葛根蛋白组分提取、抗氧化活性及功能特性研究

以葛根为原料,提取葛根蛋白组分,对其进行体外抗氧化活性研究,采用SDS-PAGE和傅里叶红外光谱(Fourier infrared spectroscopy,FT-IR)对葛根蛋白组分进行亚基、结构分析,对谷蛋白进行功能特性研究。结果表明,谷蛋白的DPPH自由基、ABTS阳离子自由基及·OH清除率均可达90%以上,其IC50值分别为0.118、0.089、0.217 mg/mL,还原能力也较高,为1.33;亚基分析结果显示,葛根醇溶蛋白无条带,葛根清蛋白在10~55 kDa均有分布,葛根球蛋白主要分布于10~25 kDa,葛根谷蛋白主要分布于33~25 kDa;氨基酸分析结果显示,4种葛根分级蛋白的氨基酸含量不同,其中葛根谷蛋白的氨基酸含量最高。FT-IR显示蛋白组分均有典型的蛋白吸收峰。谷蛋白的功能特性研究表明,pH值、温度及离子强度对葛根谷蛋白的持水(油)性、乳化及乳化稳定性、起泡及起泡稳定性有明显影响。

基于熵权法和灰色关联度法优选人参—酸枣仁抗氧化活性最佳配比

目的:开发以人参—酸枣仁为原料的相关保健品。方法:应用HPLC、紫外分光光度计对人参、酸枣仁不同配伍比例进行化学成分研究;应用DPPH自由基、ABTS自由基、羟自由基和超氧阴离子自由基清除率分析样品的体外抗氧化活性;同时采用灰色关联度法,以熵权法所得权重为分辨系数进行统计分析,结合性状进行综合评价优选出最佳配伍比例。结果:人参—酸枣仁不同配比的样品的抗氧化活性与总酚酸、酸枣仁皂苷A、斯皮诺素含量呈显著相关关系;m_(人参)∶m_(酸枣仁)为1∶1的样品的总酚酸、酸枣仁皂苷A、斯皮诺素含量高于其他配比的,且其抗氧化活性强于其他配比的,说明抗氧化活性的药效物质基础是总酚酸、酸枣仁皂苷A、斯皮诺素。结论:人参—酸枣仁抗氧化活性最佳配比(m_(人参)∶m_(酸枣仁))为1∶1。

复方前列康胶囊治疗慢性前列腺炎的活性作用研究

目的探讨复方前列康胶囊治疗慢性前列腺炎的活性作用研究。方法采用高效液相色谱法对复方前列康胶囊提取物进行成分分析;通过分析复方前列康胶囊提取物对DPPH自由基、ABTS自由基、羟基自由基和O2-·的清除能力来测定体外抗氧化活性;通过建立角叉菜胶致大鼠足肿胀模型观察其抗炎作用;应用ELISA法检测前列腺组织中白细胞和卵磷脂小体数目、促炎因子COX-2、iNOS及炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8、PEG2的含量;利用qRT-PCR方法检测前列腺组织中PI3K、Akt、RAGE mRNA表达。结果化学成分分析表明主要含有芦丁、槲皮素、黄柏碱和盐酸小檗碱等成分。抗氧化实验结果表明复方前列康胶囊提取物具有优良的体外抗氧化能力。抗炎实验表明,复方前列康胶囊提取物可以抑制角叉菜胶所致的小鼠足肿胀。前列腺炎活性实验结果表明,复方前列康胶囊提取物可以明显的降低大鼠前列腺液中白细胞数目,提高卵磷脂小体密度,降低大鼠前列腺组织中促炎因子COX-2、iNOS及炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8、PEG2的含量。qRT-PCR结果显示,复方前列康胶囊提取物可以下调大鼠前列腺组织中PI3K、Akt、RAGE mRNA表达含量。结论复方前列康胶囊提取物可能通过PI3K-Akt和AGE-RAGE两条通路、多成分协同作用的方式抑制炎症因子的生成以及减轻氧化应激反应,进而对慢性前列腺炎起到治疗作用。

酸枣仁不同极性部位成分含量与抗氧化活性及其相关性分析

目的:以酸枣仁为研究对象,探究其不同溶剂萃取部位中化学成分含量及抗氧化活性,并分析其相关性。方法:采用水煎煮法提取酸枣仁,依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇对提取液进行萃取,分别得到水提取物(S1)、石油醚萃取物(S2)、氯仿萃取物(S3)、乙酸乙酯萃取物(S4)、正丁醇萃取物(S5)5种极性部位。应用紫外分光光度法、高效液相色谱法对不同极性部位总酚酸、总黄酮、总多糖、总皂苷、酸枣仁皂苷A及斯皮诺素等成分进行含量测定,同时应用经典体外抗氧化和H2O2细胞氧化损伤法对各极性部位抗氧化活性进行研究,并采用偏最小二乘回归法对6种化学成分与抗氧化活性之间进行相关性分析。结果:比较同一部位不同成分,在S1、S2、S3萃取部位总多糖成分含量最高,分别为(17.40±0.47)、(5.38±0.05)、(5.43±0.01)mg/g,在S4、S5萃取部位中总黄酮成分含量最高,分别为(17.49±0.47)、(23.18±0.20)mg/g。各萃取部位均具有良好的抗氧化活性,其中正丁醇萃取部位(S5)抗氧化能力最强,呈明显量效关系。相关性分析得出总皂苷(X_(2))、总多糖(X_(3))、斯皮诺素含量(X_(5))对酸枣仁发挥抗氧化能力影响较大。结论:酸枣仁正丁醇萃取部位抗氧化能力最强,起到抗氧化作用的活性成分为总皂苷、总黄酮和斯皮诺素。本研究为酸枣仁作为天然抗氧化剂和抗氧化食品的深入研究和开发利用提供理论依据。

梅花鹿茸中活性多肽的纯化、测序及功能研究

利用凝胶过滤、离子交换层析及C18反相柱层析等方法,从梅花鹿茸中分离得到了一个多肽CNT14,SDS-PAGE电泳显示其为一条带,HPLC图谱为单峰,激光解析电离飞行时间质谱测定其分子量为1479.9028.氨基酸组成分析结果表明,此多肽主要含缬氨酸、亮氨酸、谷氨酸及脯氨酸,用电喷雾串联质谱法测序结果为E-P-T-V-L-D-E-V-C-L-A-H-G-P.活性检测结果表明,该多肽能够明显促进小鼠海马HT22细胞增殖.同时,采用固相合成法对该多肽进行了合成,与所分离的天然多肽进行了结构与性质的比较.

梅花鹿鹿茸中促进海马神经细胞增殖蛋白的分离纯化

目的研究梅花鹿鹿茸中蛋白的分离纯化和促进细胞增殖的生物活性。方法采用硫酸铵分级沉淀法提取鹿茸蛋白,蛋白组分经过DEAE Sep Harose FastFlow、SepHacrylS-200和Affi-gel Blue Gel柱色谱分离纯化。结果分离得到3个单一蛋白化合物CNTP Ⅰ、CNTP Ⅱ、CNTP Ⅲ。结合激光解析电离飞行时间质谱和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳确定其相对分子质量分别为6.7018×104、4.3749×104、2.3855×104。分析了CNTPⅢ的氨基酸组成,采用Edman测序法测定N末端氨基酸序列为GDRGTAAKHALDEEP。CNTP Ⅲ具有促进小鼠海马神经细胞(HT22)增殖的作用。结论 CNTPⅢ是具有促进细胞增殖的新蛋白。

浙贝母茎叶化学成分的研究

从浙贝母Fritillariathunberii地上茎叶中分得6个化合物，根据理化性质、波谱分析及化学方法鉴定为：丁香脂素（syringaresinol，Ⅰ）、2，5－二甲基苯醌（2，5－dimethoxy1，4－benzoquinone，Ⅱ）、β－谷甾醇（Ⅲ）、斯贝甲素（verticine，Ⅳ），浙贝乙素（verticinone，Ⅴ）和茄啶（solanidine，Ⅵ）。其中Ⅰ和Ⅱ为本属植物中首次分得。

飞蓬的化学成分研究

目的：研究飞蓬（Erigeron acerL.）全草的化学成分。方法：应用硅胶柱色谱法及制备型硅胶薄层色谱对其化学成分进行分离,并利用^13C-NMR,^1H-NMR和MS等方法鉴定分离得到的化合物。结果：从飞蓬的干燥全草中分离得到5个化合物,分别鉴定为α-香树脂醇（1）、β-香树脂醇（2）、咖啡酸（3）、槲皮素（4）、4′-羟基黄芩素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷（5）。结论：该5个化合物均为首次从飞蓬中分离得到。根据DEPT、HMQC、HMBC谱对化合物（5）的碳信号重新进行了归属,同时根据HMBC、HMQC、^1H-^1HCOSY谱首次归属了该化合物葡萄糖醛酸部分的2″-5-″H的信号。

肝胆双清口服液中丹皮酚的HPLC测定

目的:建立肝胆双清口服液中丹皮酚含量测定的HPLC方法。方法:岛津VP-ODS C18色谱柱(250 mm×4．6 mm,5μm),流动相:甲醇-0．4％磷酸溶液(60:40)检测波长为274 nm,流速1．0 ml·min-1;柱温25℃。结果:丹皮酚线性范围为0．11-0．54μg,平均回收率99．8％,RSD为2．1％。结论:方法可靠,简单可行,为控制肝胆双清口服液的内在质量提供了科学依据。

人参皂苷Rg_2注射液制备工艺的研究

目的确定人参皂苷Rg2注射液的制备条件.方法采用正交试验法研究注射液的优化工艺条件.结果工艺条件是：选用25%1,2-丙二醇与25%聚乙二醇400为混合助溶剂,不加抗氧剂,调节注射液pH值为3.5～5.5.结论该制备工艺稳定、可靠,可作为人参皂苷Rg2注射液的制备工艺.

黄花草木犀总皂苷体外抗肿瘤作用研究

目的以MCF-7、PC3M、ACC、A549、SW620几种肿瘤细胞株为研究对象,体外加入黄花草木犀总皂苷,研究黄花草木犀总皂苷对几种肿瘤细胞株的增殖抑制作用。方法 CCK-8法检测黄花草木犀总皂苷对5种肿瘤细胞株的增殖抑制作用。结果黄花草木犀总皂苷对MCF-7、PC3M、ACC、A549、SW620肿瘤细胞株均有细胞毒作用,但对正常细胞株的毒性作用则明显较低,对MCF-7、PC3M、ACC、A549、SW620作用72 h时的IC50分别为0.45、0.73、1.05、1.17、1.19 mg/m L。结论黄花草木犀总皂苷能有效抑制5种肿瘤细胞株增殖,且对正常细胞株毒性较小,筛选出对黄花草木犀总皂苷最敏感的肿瘤细胞株为MCF-7、PC3M肿瘤细胞,值得进一步开展基础及临床研究。

小儿温胃颗粒剂中丁香酚的HPLC测定

目的：建立小儿温胃颗粒剂中丁香酚的含量测定方法。方法：HPLC法，流动相：甲醇-水（60：40）为流动相；检测波长为281nm；柱温40℃。结果：丁香酚线性范围为0．9792～5．8752μg，平均回收率99．14％，RSD为0．966％。结论：方法可靠，简单可行，为控制小儿温胃颗粒剂的内在质量提供了科学依据。