雷公藤内酯醇联合热疗对肝癌细胞增殖、凋亡及p62蛋白表达的影响

目的观察雷公藤内酯醇(TPL)联合热疗对肝癌细胞增殖、凋亡及p62蛋白表达的影响。方法将对数生长期的肝癌HepG2细胞随机分为4组,对照组不处理,TPL组加入终浓度20 nmol/L的TPL作用24 h,热疗组于43℃加热150 min,联合组加入TPL后热疗处理。取各组细胞,采用MTT法测算细胞增殖抑制率,流式细胞仪测算细胞凋亡率,Western blotting法检测自噬相关蛋白p62。结果联合组细胞增殖抑制率高于TPL组、热疗组(P均<0. 05),TPL组、热疗组细胞增殖抑制率差异无统计学意义。细胞凋亡率对照组<TPL组、热疗组<联合组(P均<0. 05),TPL组、热疗组细胞凋亡率差异无统计学意义。细胞中p62蛋白相对表达量对照组<TPL组、热疗组<联合组(P均<0. 05),TPL组、热疗组细胞中p62蛋白相对表达量差异无统计学意义。结论 TPL联合热疗较单一治疗可更有效地抑制肝癌细胞增殖并促进其凋亡,该作用有可能与其上调p62蛋白表达抑制细胞自噬有关。

来曲唑新辅助内分泌疗法治疗绝经后乳腺癌临床观察

目的观察来曲唑新辅助内分泌疗法治疗绝经后乳腺癌患者的疗效。方法 92例绝经后老年乳腺癌患者随机分为两组各46例,观察组口服来曲唑,对照组口服他莫昔芬,疗程均为3个月。比较两组临床疗效、肿瘤分期变化及不良反应。结果观察组CR 4例、PR 21例、SD 17例、PD 4例,RR为54.35%;对照组CR 2例、PR 17例、SD 22例、PD 5例,RR为41.30%;两组RR比较,P<0.05。观察组7例由临床Ⅱ期降为Ⅰ期,对照组4例由临床Ⅱ期降为Ⅰ期,两组比较,P<0.05;观察组9例由临床Ⅲ期降为Ⅱ期,对照组5例由Ⅲ期降为Ⅱ期,两组比较,P<0.05。观察组发生恶心呕吐4例、潮热4例、阴道出血1例、肌肉关节疼痛1例,不良反应发生率为21.74%;对照组发生恶心呕吐6例、潮热9例、阴道出血5例、肌肉关节疼痛0例,不良反应发生率为43.48%;两组不良反应发生率比较,P<0.05。结论来曲唑新辅助内分泌疗法治疗绝经后老年乳腺癌患者近期疗效好,且更为安全。

溶瘤性单纯疱疹病毒G47Δ调节HER2促进人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的机制研究

目的探讨溶瘤性单纯疱疹病毒G47Δ调节HER2促进人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的机制研究。方法用不同滴度G47(MOI=0.00,MOI=0.01,MOI=0.1)处理乳腺癌MCF-7/HER2过表达组(ER+,HER2-high)、MCF-7/HER2低表达组(ER+,HER2-low)和MCF-7对照组(ER+)细胞,CCK-8法检测检测细胞成活率;流式细胞术检测细胞凋亡率;Hoechst33258染色法检测乳腺癌细胞凋亡形态;Western blot检测溶瘤性单纯疱疹病毒G47Δ作用后乳腺癌细胞中HER2和Cleaved-caspase-3凋亡蛋白表达。结果随着溶瘤性单纯疱疹病毒G47Δ给药剂量的增大,MCF-7/HER2过表达组、MCF-7/HER2低表达组和MCF-7对照组细胞存活率明显降低,细胞凋亡率显著上升,HER2和Cleaved-caspase-3凋亡蛋白表达明显上升,差异有统计学意义(P<0.05)。与病毒G47ΔMOI=0.01处理MCF-7对照组相比,MCF-7/HER2低表达组细胞存活率显著升高,细胞凋亡率显著下降,HER2和Cleaved-caspase-3凋亡蛋白表达明显下降;MCF-7/HER2过表达组存活率显著降低,细胞凋亡率显著上升,HER2和Cleaved-caspase-3凋亡蛋白表达明显上升;与病毒G47ΔMOI=0.1处理MCF-7对照组相比,MCF-7/HER2低表达组细胞存活率显著升高,细胞凋亡率显著下降,HER2和Cleaved-caspase-3凋亡蛋白表达明显下降;MCF-7/HER2过表达组存活率显著降低,细胞凋亡率显著上升,HER2和Cleaved-caspase-3凋亡蛋白表达明显上升,差异有统计学意义(P<0.05)。结论溶瘤性单纯疱疹病毒G47Δ有效诱导HER2过表达乳腺癌MCF-7细胞发生细胞凋亡作用;溶瘤性单纯疱疹病毒G47Δ可以呈浓度依赖性地促进HER2蛋白降解,诱导乳腺癌MCF-7细胞发生凋亡。

280例cT1aN_0M_0肺腺癌淋巴结转移影响因素的回顾性分析

目的:探究影响cT1aN_0M_0肺腺癌淋巴结转移的影响因素。方法:选取我院2013年1月至2015年12月收治的280例cT1aN_0M_0肺腺癌患者的临床病例资料,对其淋巴结转移情况以及患者的临床因素进行回顾性统计分析。对患者的病理特征以及相关临床资料,联合单一因素和多种因素共同分析,探究cT1aN_0M_0肺腺癌淋巴结转移的影响因素。结果:经过对所有入选的280例cT1aN_0M_0肺腺癌患者进行薄层CT扫描之后发现,CT影像学类型为纯磨玻璃影的患者108例(38.6%),CT影像学类型为磨玻璃影带有实性成分的患者(实性成分直径<5mm)117例(41.8%),CT影像学类型为部分实性结节的患者(实性成分直径≥5mm)12例(4.3%),CT影像学类型为纯实性结节的患者43例(15.4%)。患有淋巴结转移的患者28例(10%),其中N1淋巴结转移患者16例(5.7%)N2淋巴结转移患者12例(4.3%)。本次研究对象中,所有实性成分直径小于5mm及CT影像学类型为纯磨玻璃影的患者在经过手术治疗之后均未发现淋巴结转移,P<0.05。结论:临床上cT1aN_0M_0肺腺癌患者,若其影像学表现为纯磨玻璃影或实性成分直径小于5mm,通常没有淋巴结转移情况发生。患者肿瘤直径大于1cm,混合性结节和实性结节以及CEA>5μg/L等成为淋巴结转移的重要预测因素。PET-CT表明,当最大标准摄入值大于5时,患者更容易发生淋巴结转移,P<0.05。

Ⅱ型谷氨酰胺转氨酶对缺氧骨肉瘤MG-63细胞凋亡的影响

目的探讨缺氧条件下骨肉瘤MG-63细胞凋亡与Ⅱ型谷氨酰胺转氨酶(TG2)表达的关系,以及TG2抗凋亡机制与细胞色素C和Caspase-3表达的关系。方法建立骨肉瘤细胞体外缺氧培养模型,设立单纯缺氧组和TG2 siRNA缺氧组,缺氧培养时间为12 h,观察TG2活性、蛋白及mRNA水平,胞核、胞浆中细胞色素C和Caspase-3蛋白水平及细胞凋亡率。结果单纯缺氧组胞核中TG2活性、蛋白及mRNA水平均显著高于TG2 siRNA缺氧组(P<0.05),而胞浆中比较,无显著差异(P>0.05);单纯缺氧组胞核中细胞色素C和Caspase-3蛋白水平显著高于TG2 siRNA缺氧组,胞浆中含量显著低于TG2 siRNA缺氧组(P<0.05);单纯缺氧组的细胞凋亡率显著低于TG2 siRNA缺氧组(P<0.05)。结论缺氧条件下TG2高表达有抑制MG-63骨肉瘤细胞凋亡作用,其机制可能与抑制胞核中细胞色素C和Caspase-3向胞浆中转移有关。

Smad4、TGF-β1、TGF-βR1在乳腺癌细胞中的表达和意义

目的探究Smad4、转化生长因子-β1(TGF-β1)、转化生长因子-β受体1((TGF-βR1)在乳腺癌细胞中的表达和意义。方法选取2014年1月-2016年1月在该院确诊为乳腺浸润性导管癌并行手术治疗的女性患者60例,收集其标本作为观察组。另取正常乳腺组织20例作为对照组。采用免疫组化技术检测组织中的Smad4、TGF-β1和TGF-βR1,比较乳腺浸润性导管癌和正常乳腺组织中上述指标的表达差异及影响表达的因素。结果观察组TGF-β1和TGF-βR1的阳性表达率高于对照组,Smad4阳性表达率低于对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。Smad4、TGF-β1和TGF-βR1在乳腺癌中的表达与年龄无关,而同分化程度和TNM分期有关,分化程度低、TNM分期高的标本TGF-β1和TGF-βR1的阳性表达程度高于分化程度高、TNM分期低的标本;分化程度低、TNM分期高的标本Smad4的阳性表达程度低于分化程度高、TNM分期低的标本,差异均有统计学意义(均P<0.05)。TGF-β1和TGF-βR1在乳腺癌组织中的表达呈正相关(r=0.647,P<0.05),而Smad4与TGF-β1、TGF-βR1的表达均呈负相关(r=-0.329和-0.426,均P<0.05)。结论 TGF-β1和TGF-βR1在乳腺浸润性导管癌组织中表达显著增加,而Smad4表达下降,表达程度均与分化程度和TNM分期有关。

Lgr5和MIF在结直肠癌组织中的表达及其临床意义

目的研究富含亮氨酸重复单位的G蛋白偶联受体5(Lgr5)和巨噬细胞游走抑制因子(MIF)在结直肠癌中的表达及其与临床病理因素之间的相关性。方法收集2014年5月至2016年5月结直肠癌石蜡包埋标本64例。采用免疫组化检测34例正常肠道组织、40例肠上皮内瘤变、64例结直肠癌组织中的Lgr5和MIF的表达,并分析其与临床病理因素之间的关系。结果 Lgr5在正常肠道组织、肠上皮内瘤变以及结直肠癌中的阳性表达率分别为6.88%、47.50%、84.38%,呈逐渐增高的趋势,且两两比较差异均有统计学意义(P均<0.01)。MIF在正常组织、肠上皮内瘤变以及结直肠癌组织中的表达率分别为17.65%、40.00%、81.25%,也呈逐渐增高的趋势,且两两比较差异均有统计学意义(P均<0.01)。结直肠癌组织中的Lgr5、MIF高表达与病理分级、Dukes分期以及有无淋巴结转移等临床病理因素有关(P<0.05,P<0.01),而与性别、年龄无关(P均>0.05)。结论 Lgr5和MIF在结直肠癌组织中呈高表达,且与其发生、发展、侵袭、转移密切相关,对上述因子的调控有可能成为结直肠癌治疗的新的靶点。

一种弱阳离子交换材料的亲水模式糖肽富集新方法

亲水作用色谱(HILIC)材料在糖肽的富集与分离中得到越来越广泛的应用.针对目前HILIC材料糖肽选择性不足的缺点,发展新的糖肽富集方法十分必要.本工作发展了一种商品化的弱阳离子交换材料(WCX)在亲水模式下对糖肽的富集方法.首先考察了微固相萃取(SPE)模式下WCX上多肽保留的机理.结果显示,WCX上糖肽的保留同时受乙腈含量和p H的影响.将WCX用于牛胎球蛋白(fetuin)胰蛋白酶酶解液中糖肽的富集,获得了39条糖肽信号.当fetuin与牛血清白蛋白(BSA)酶解液以物质的量比1∶5混合时,富集到26条糖肽信号.富集人免疫球蛋白(Ig G)胰蛋白酶酶解液时获得25条糖肽信号,1∶5时获得23条糖肽信号.实验说明WCX对唾液酸化和非唾液酸化糖肽的富集均有高选择性.该方法拓展了WCX的应用范围,丰富了HILIC材料的种类.

混合模式色谱材料Click TE-GSH高效富集多磷酸化肽

多磷酸蛋白对于生物体适应内外环境具有重要意义,而明确多磷酸蛋白的磷酸位点功能及其信号转导机制尤为关键.复杂生物样品中多磷酸化肽的低丰度、低电离的特性,以及非磷酸化肽的抑制作用,决定了质谱分析前进行多磷酸化肽富集是非常必要的步骤.本工作采用基于巯基-烯烃点击化学法合成的混合模式材料Click TE-GSH进行单磷酸化肽和多磷酸化肽的选择性富集.我们建立了单磷酸化肽、双磷酸化肽和多磷酸化肽的顺序分段富集方法.该优化方法能抗干扰,应用于脱脂牛奶时富集到11条多磷酸化肽.与商品化固化金属亲和色谱(IMAC)材料相比,Click TE-GSH富集多磷酸化肽的选择性更好.本工作所建立的富集方法为高效富集多磷酸化肽提供新方法和新技术.

结直肠癌组织LASS2、HOXB7蛋白表达与凋亡指数及预后的关系分析

目的:探讨结直肠癌(CRC)组织人源长寿保障基因2(LASS2)、同源异型盒基因B7(HOXB7)表达与凋亡指数(AI)及预后的关系。方法:选择2013年10月至2015年4月期间在我院接受治疗的105例CRC患者作为研究对象。检测其CRC组织以及癌旁组织中LASS2、HOXB7表达以及AI,分析LASS2、HOXB7表达与临床病理特征的关系,采用Kaplan-Meier生存曲线分析不同LASS2、HOXB7表达患者总生存率的差异,Cox比例风险回归分析CRC患者预后的影响因素。结果:CRC组织中LASS2阳性率低于癌旁正常组织,而HOXB7阳性率高于癌旁正常组织(P<0.05),CRC组织中AI低于癌旁正常组织(P<0.05)。经Spreaman相关性分析显示CRC组织LASS2阳性率和AI呈正相关关系,而HOXB7阳性率和AI呈负相关关系(P<0.05)。LASS2表达与临床分期、浸润深度和淋巴结转移有关(P<0.05),而HOXB7表达与临床分期和淋巴结转移有关(P<0.05)。HOXB7表达阳性患者的生存率低于HOXB7表达阴性患者,而LASS2表达阳性患者的生存率高于LASS2表达阴性患者(P<0.05)。Cox比例风险回归分析结果显示,临床分期为Ⅲ期、有淋巴结转移、LASS2阴性表达、HOXB7阳性表达以及AI<2.0%均是影响CRC患者预后的危险因素(P<0.05)。结论:在CRC组织中HOXB7阳性率升高,而LASS2阳性率以及AI下降,且与临床分期以及淋巴结转移密切相关。LASS2、HOXB7表达及AI与CRC患者的生存和预后联系密切。

参芪消痞汤对慢性萎缩性胃炎癌前期病变胃黏膜修复作用和血管生成机制及血清p53、MDA、GSH-Px的相关影响

目的:观察参芪消痞汤对慢性萎缩性胃炎(CAG)癌前期病变大鼠胃黏膜表皮生长因子(EGF)、表皮生长因子受体(EGFR)表达水平与缺氧诱导因子(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)及血清p53、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的相关影响。方法:选择60只健康SD雄性大鼠喂养1周后,根据体重随机区组法将10只纳入正常组,50只纳入模型组。制备CAG癌前期病变大鼠模型,选取正常组中8只生长状况良好的大鼠纳入实验,选取与正常组存在显著差异的40只大鼠纳入实验,通过随机区组法将大鼠分为模型组、维酶素组、(低、中、高剂量)参芪消痞汤组,每组各8只。给予各组大鼠对应的药物灌胃治疗,正常组与模型组大鼠灌等体积的生理盐水,连续治疗3个月后检测各项指标表达水平。结果:与模型组对比,维酶素组及低、中、高剂量组大鼠胃黏膜组织病理损伤明显修复。各组大鼠胃黏膜EGF、EGFR表达水平均低于模型组(P<0.05)。模型组大鼠HIF-1α、VEGF表达水平高于其他各组(P<0.05),随着参芪消痞汤剂量的增加,大鼠HIF-1α、VEGF表达水平随之降低,且均低于模型组(P<0.05)。随着参芪消痞汤剂量的增加,大鼠p53、MDA逐渐下降,GSH-Px表达水平逐渐升高,与模型组差异统计学意义(P<0.05)。结论:参芪消痞汤可以降低胃黏膜EGF、EGFR、HIF-1α、VEGF、p53、MDA的表达水平,提高GSH-Px的表达水平,改善病变程度。

骨肉瘤组织中Livin蛋白的表达水平及与肿瘤MVD表达水平的关系

目的:探讨Livin蛋白在骨肉瘤组织中的表达及与骨肉瘤组织中肿瘤微血管密度(MVD)、临床病理特征的关系。方法:选取2013年1月~2015年12月我院病理科收集的71例术后骨肉瘤组织标本作为研究对象,采用免疫组化染色观察标本中Livin蛋白、MVD的表达情况,并探讨Livin蛋白与肿瘤组织中的MVD水平、患者的临床病理特征之间的关系。结果:71例骨肉瘤组织中,Livin蛋白阳性表达率为57.75%、MVD阳性率为60.56%,差异不具有统计学意义(P>0.05);肉瘤组织中Livin蛋白阳性表达与MVD阳性率呈显著的正相关关系(Spearman r=0.953,P<0.001);骨肉瘤患者的Livin蛋白阳性表达与患者的分化程度、发生肺部转移具有显著的相关性(P<0.05),Livin蛋白阳性表达与患者的年龄、性别、病灶大小、Enneking分期、病理学分型关系不显著(P>0.05)。结论:Livin蛋白在骨肉瘤组织中的表达与MVD、肿瘤分化程度、发生肺部转移具有显著的相关性。

肺腺癌患者血清肿瘤异常蛋白表达与化疗效果的相关性

目的 探讨肺腺癌患者血清肿瘤异常蛋白（TAP）与化疗效果的相关性.方法 对2012年5月至2016年4月华中科技大学同济医学院附属梨园医院收治的90例肺腺癌患者进行前瞻性研究.根据治疗方案分为辅助化疗组（30例）和姑息化疗组（60例）.辅助化疗组采用FOLFOX方案进行术后辅助化疗,姑息化疗组以培美曲塞（PEM）为基础进行术后化疗.采用TAP图像分析仪检测两组化疗前后的血清TAP表达水平.采用t检验比较两组患者TAP表达水平,χ2检验比较TAP表达、肿瘤标志物阳性检测与患者化疗疗效的关系,Pearson相关性分析法分析血清TAP表达水平与肿瘤标志物变化的相关性.结果 两组患者接受姑息化疗前检测血清TAP,差异无统计学意义[TAP凝聚物面积为（230±80）μm2和（206±50）μm2,t=1.487,P〉0.05];两组患者血清TAP表达均为100％.辅助化疗组与姑息化疗组患者中血清TAP凝聚物面积较大者比例比较,差异无统计学意义（46.7％和48.3％,χ2=0.022,P〉0.05）.两组肿瘤标志物糖类抗原125（CA125）、癌胚抗原（CEA）、糖类抗原19-9（CA19-9）及碱性磷酸酶（ALP）阳性率比较,差异均无统计学意义（χ2值分别为4.02、3.81、4.01、5.01,均P〉0.05）.两组患者化疗前后血清TAP变化与年龄、性别、病理分化程度和转移脏器数目等临床因素间比较,差异均无统计学意义（均P〉0.05）.姑息化疗组患者化疗后血清TAP、CEA、CA19-9表达与化疗疗效有关（χ2值分别为6.62、7.78、8.62,均P〈0.01）.Pearson相关性分析结果显示：姑息化疗组患者血清TAP水平变化与CA125、CEA、CA19-9及ALP各指标水平变化无相关性（r值分别为0.42、0.19、0.09、0.28,均P〉0.05）.辅助化疗组患者血清TAP水平与CA125水平呈正相关（r=0.51,P=0.02）,与CEA、CA19-9及ALP水平变化无相关性（r值分别为0.20、0.24、0.19,均P〉0.05）.结论 肺腺癌患者血清TAP水平检测具有准确性良好、敏感度高的优点,可作为评价化疗疗效的指标和肺腺癌独立的检测项目.