脑脊液漏致自发性低颅压综合征的诊断和治疗 (1例报道及文献复习)

目的 探讨自发性脑脊液漏所致的自发性低颅压综合征诊断治疗的方法。方法 对 1例脑脊液漏致自发性低颅压综合征应用同位素脑池造影和脊髓造影后CT薄层扫描确定脑脊液漏口的位置 ,然后在相应节段进行硬膜外血液修补治疗 ,并进行随诊观察。结果 同位素脑池造影没有发现脑脊液漏的直接征象 ,但放射性核素过早在膀胱内出现 ,并难以升达枕大孔和基底池到达脑部 ,显示有脑脊液漏的间接征象 ;脊髓造影后进行CT薄层扫描显示脑脊液漏发生在T4 段 ,17mL自体血注入病人的硬膜外腔 ,3天后病人症状缓解 ,临床治愈。结论 同位素脑池造影能够提供脊髓脑脊液漏的间接证据 ,脊髓造影后CT薄层扫描能够准确确定脑脊液的漏口位置 ,硬膜外血液修补是治疗该病最为有效的方法。

老年人结核性脑膜炎的临床研究

目的评估老年人结核性脑膜炎的临床、实验室和影像学特点,并探讨治疗对策。方法对60例患有结核性脑膜炎(TBM)的老年人进行了回顾性研究。结果老年人TBM很不典型,多种多样的临床表现和伴随症状往往妨碍该病的及时诊断,多数病人得不到及时的治疗。老年TBM患者脑膜刺激征可能不存在,卒中和癫痫发生多见;脑脊液改变不典型,部分病例细胞数在正常范围,CT和MRI常可以发现脑梗死、脑积水、脑膜增厚、水肿、颅内钙化和结核球等改变。结论老年人结核性脑膜炎的诊断非常困难,目前的检查既不及时也不敏感;基于临床,结脑既不能被排除,也不能被确诊,错误的诊断和治疗的延误将会导致致命性的后果。因此,对该病保持高度的警惕和及时采用果断的抗痨诊断性治疗,是挽救病人的生命和提高治愈率的关键。

应用USE定点诱变技术制备Wilson病突变体

【目的】克隆Wilson病(WD)基因的全长cDNA,制备WD的突变体,为进一步研究突变蛋白的功能奠定基础。【方法】采用RT-PCR和TOPO-TA克隆技术,克隆了全长WDcDNA,并以此为膜板应用USE定点诱变技术(特异性位点抹除技术)构建了778位(CGG→CTG)、1069位(GTG→GTC)两个突变体。【结果】成功克隆了WDcDNA,并经过全长测序没有发现突变的存在。以此为模板制备了WD基因8号外显子第778位密码子由CGG突变为CTG、14号外显子1069位GTG→GTC的突变体,从而构建了含中国人和欧美WD基因的高频突变点。【结论】USE定点诱变技术是寡核苷酸引物诱变技术的一个重大的改进,该技术采用双位点同时突变的方法,经两次酶切,两次转化,选择效率很高。

神经生长因子对脑缺血再灌注大鼠突触素表达的影响

为研究大鼠脑缺血再灌注后突触素p38表达的变化规律及其与神经生长因子的关系 ,取大鼠 72只 ,随机分为假手术组、人工脑脊液组和神经生长因子治疗组。采用线栓法建立大脑中动脉缺血再灌注模型 ,应用免疫组织化学方法观察p38的表达。结果发现 ,脑缺血再灌注 3天后p38表达增高 ,第 7天达高峰 ,之后逐渐降低 ,第 2 1天降至对照组水平。应用外源性神经生长因子后 ,p38表达较对照组无明显升高 (P >0 .0 5 )。提示中枢神经系统损伤后 ,神经元具有再生和修复的可塑性 ,外源性神经生长因子对p38的调节有待于进一步研究。

肝豆状核变性基因表达蛋白的多克隆抗体制备和纯化

目的 制备并纯化肝豆状核变性（WD）基因表达蛋白的多克隆抗体,为进一步研究WD蛋白的结构和功能打下基础。方法 应用RT-PCR扩增目的基因,GST基因融合载体表达并纯化融合蛋白,Thrombin酶切并收集目的蛋白,免疫家兔,凝胶过滤层析纯化抗体血清中的lgG,ELISA检测抗体滴度和western blot检测抗体特异性。结果 本方法生产的抗体滴度达到了1:12500,特异性好。结论 我们应用该方法成功制备了Wilson病蛋白的多克隆抗体,为我们进一步研究该蛋白的结构和功能奠定了基础。

反复误诊的一例MELAS型线粒体脑肌病的临床病理研究

本文报道1例MELAS型线粒体脑肌病,该病人早期发育正常,9岁起病,以反复发作的头痛、腹痛起病,继以局部和全身抽搐发作、四肢无力及反复的卒中样发作,反复发作视物不清和偏盲、逐渐智力减退;血清乳酸增高;MRI示半球额、顶、枕、颞叶多发性长T1和长T2异常信号,呈灶状和层性改变。肌活检组化检查可见破碎红纤维(RRF),电镜发现糖原堆积和异常线粒体。诊断符合MELAS型。本例长期误诊为精神异常、多发性硬化和间脑综合征。本文将对MELAS的临床、病理和影像学所见进行讨论。

CCC2基因缺陷型酵母对中国人Wilson病突变热点致病性的研究

【目的】应用CCC2基因缺陷型酵母研究中国人Wilson病(Wilsondisease,WD)突变热点Arg778Leu的致病性,在蛋白水平上探讨中国人Wilson病的发病机制。【方法】应用RT-PCR和TOPOTA克隆技术分段克隆ATP7B的全长cDNA,USE定点诱变技术制备突变体,应用酵母功能互补分析的方法研究Arg778Leu的致病性。【结果】本研究应用USE定点诱变技术成功制备了ATP7B的Arg778Leu突变体,在CCC2缺陷型酵母内表达人的野生型ATP7B可以弥补酵母内CCC2蛋白的运铜功能,使CCC2缺陷型酵母在铜、铁及亮氨酸缺陷型培养基上生长良好;对突变体的研究表明Arg778Leu只能部分代偿CCC2蛋白的运铜功能。【结论】本试验证明CCC2基因缺陷型酵母是研究人ATP7B的一种良好的细胞模型,证明了中国人WD的常见突变Arg778Leu是一种致病性的突变。

脑缺血再灌注后生长相关蛋白和突触素表达及其意义

1目的 研究脑缺血再灌注后生长相关蛋白 - 43(GAP- 43)和突触素 p38表达的变化规律 ,探讨中枢神经损伤后修复的可塑性。 2方法 成年健康雌性 Wistar大鼠 36只 ,随机分为实验组和对照组。采用线栓法建立大脑中动脉缺血再灌注大鼠模型 ,应用免疫组织化学方法观察脑缺血再灌注后 GAP- 43和突触素 p38的表达。 3结果 脑缺血再灌注 6 h后 ,GAP- 43表达逐渐增高 ,第 7天达高峰 ,以后逐渐降低 ,第 2 1天仍有表达。脑缺血再灌注 1d后突触素 p38表达增高 ,第 7天达高峰 ,之后逐渐降低 ,第 2 1天降至对照组水平。4结论 中枢神经系统损伤后 ,神经元具有再生和修复的可塑性 ,GAP- 43和突触素 p38是神经损伤和修复的分子标志物。

Dejerine-Sottas病(1例报道和文献复习)

目的探讨Dejerine-Sottas病(Dejerine-Sottas disease,DSD)的临床、病理和电生理特点。方法报道了1例DSD病患者的临床、病理和电生理表现,并对该病的文献进行复习。结果本例DSD患者在婴儿期发病,运动发育迟缓。双下肢无力进行性进展,四肢远端对称性肌萎缩,并渐向肢体近端扩展。四肢末端深浅感觉障碍,腱反射普遍减弱或消失。患者有马蹄内翻足、垂腕和爪形指,可扪及粗大的尺神经。双下肢运动神经传导速度引不出,感觉传导速度明显减慢。进行腓肠神经活检,组织学检查显示大部分区域髓鞘脱失。电镜示部分髓鞘塌陷卷曲,胶原增生,并有轴索变性,基底膜有轮状增厚,可见洋葱球样结构,部分洋葱球样结构的中心轴索变薄或消失。结论本例DSD的诊断明确。DSD是一种罕见的运动感觉神经病,确定诊断需要详细的临床病史和体检,并结合神经电生理检查和神经活检。

抗结核分支杆菌治疗对难治性视神经脊髓炎转归的相关性研究

目的本研究旨在探讨难治性视神经脊髓炎(NMO)的治疗方法,以及与结核分支杆菌的相关性。方法本研究对13例激素治疗无效的视神经脊髓炎的病人进行了前瞻性的研究,治疗前均进行磁共振和腰穿检查,脑脊液进行常规检查和应用巢式PCR监测分支杆菌MPB-64基因,治疗前应用EDSS对病人的伤残程度进行评分。进行抗结核诊断性治疗,并进行长期随访和观察。结果所有的病人在治疗前脊髓MR均有超过3个脊髓阶段的异常信号,EDSS评分在4.5～9;视敏度均有明显下降。巢式PCR扩增结核杆菌基因有3个病人呈阳性结果。病人对抗结核治疗反应良好,治疗后EDSS评分逐步下降,脊髓内的异常信号在治疗后逐渐消退,视力改善。结论本研究显示结核分支杆菌感染在NMO的发生、发展过程中可能起着重要作用。鉴于该病预后差,以及抗结核治疗在本研究中令人鼓舞的效果,作者认为在激素治疗无效时,应为病人进行诊断性抗结核治疗。

联合应用异烟肼对顽固性神经痛治疗效果的初步研究

【目的】评估联合应用异烟肼(INH)治疗在难治性神经病理性疼痛(NP)治疗中的价值。【方法】采用前瞻性、联合用药的自身对照研究,36例患有难治性NP的病人入组,这些病人对卡马西平和加巴喷丁联合治疗无效,给以异烟肼8mg/kg联合治疗,观察期8周,检测其疗效和副作用。治疗前后采用采用视觉模拟量表(VAS)、睡眠干扰评分和病人总体印象改变表(PGIC)进行疗效评定。【结果】经过8周治疗后,VAS评分较加用异烟肼前有明显下降(配对t检验P<0.01),VAS评分由治疗前的61.76下降至32.94,下降幅度达46.7%。痛觉过敏明显减少,23例病人(63.9%)PGIC改善。另外,病人的平均睡眠分数也有明显改善。【结论】联合应用异烟肼可能是一种对治疗NP潜在有效的治疗方法,尤其对难治性NP可能有效。INH的作用机制不明,其疗效仍需要在大样本的RCT研究中进一步确定。

1～6月龄TX小鼠铜代谢和肝损害情况研究

【目的】研究不同月龄TX小鼠的铜代谢情况、肝脏功能和病理学损害特点,为以TX鼠为模型的研究在选择不同月龄动物方面提供适合的时间点。【方法】选取1～6月的每月龄TX小鼠和同系DL小鼠雌雄各3只,分别作为病例组和对照组,测定肝、脑、肾、血清中的金属铜含量,测定血清铜蓝蛋白及谷草转氨酶等指标,肝脏标本HE染色观察组织病理学改变,电镜下观察超微结构。【结果】TX小鼠自第2月起肝、脑的干体质量铜含量较对照组明显增高(P<0.05),肝脏增高幅度更甚,至4月龄时两组差异尤为显著,同期肾铜增高及血清铜降低与对照组相比有统计学意义(P<0.05);血清铜蓝蛋白明显降低;转氨酶的升高以第5月时为著;病理改变光镜下主要为变性坏死,胞核空泡样变,电镜下见线粒体、溶酶体中大量电子致密物沉积,以第4月时最重。【结论】理想的Wilson病模型和肝损害动物模型,症状前治疗的探索可选用1月龄的TX鼠,出现临床症状后治疗的探索应选用2月龄小鼠,病情高峰时期的实验可考虑选用4、5月龄的动物。

中国人视神经脊髓炎疾病谱NMO-IgG/anti-AQP4抗体检测方法学的比较

【目的】建立NMO-IgG/anti-AQP4抗体检测的间接免疫荧光法(IIF),细胞分析法(CBA)和荧光免疫沉淀法(FIPA)法;研究并比较不同的检测方法对中国人群NMO疾病谱的检测效率。【方法】建立3种检测NMO-IgG/anti-AQP4抗体的方法,包括IIF、CBA和FIPA。应用盲法检测病人血清106例,其中视神经脊髓炎(NMO)组24例,纵形扩展性脊髓炎(LETM)组22例,多发性硬化(MS)组30例,健康对照(HC)组30例;对其检测的阳性率进行分析。【结果】通过3种方法检测,发现NMO组NMO-IgG/anti-AQP4抗体阳性率分别为IIF(62.5%,15/24),CBA(91.7%,22/24)及FIPA(75.0%,18/22),LETM组为IIF(59.1%,13/22),CBA(86.4%,19/22)及FIPA(72.3%,16/22),MS组IIF、CBA及FIPA均为(3.3%,1/30)。正常对照组未见该抗体阳性表达。NMO组及LETM组血清NMO-IgG/anti-AQP4抗体阳性率明显高于MS和健康对照组。【结论】在中国人群NMO疾病谱患者中,IIF、CBA和FIPA的检测效率基本和美欧报道一致。IIF是该抗体检测的基础方法;CBA法看起来最为敏感;FIPA检测可以量化该抗体,可用于临床高通量大样品筛查。

小鼠肝脏特异性表达载体ALB-ATP7B的构建

[目的]构建人肝豆状核变性病ATP7B基因野生型及常见突变型的小鼠肝脏特异性表达载体ALB-ATP7B,为制备转基因小鼠及相关基因治疗作准备。[方法]定点突变法获取人群中常见的Arg778Leu及His1069Gln两种ATP7B基因突变体,定向克隆将小鼠白蛋白启动子ALB序列及野生和突变的ATP7B基因亚克隆至真核表达载体kbpala上,得到可在小鼠肝脏特异性表达的人ATP7B基因正常及突变型真核表达载体ALB-ATP7B。[结果]经测序及酶切鉴定证实,真核表达载体ALB-ATP7B构建成功。[结论]人类正常及突变ATP7B基因真核表达载体ALB-ATP7B的构建初步奠定了转基因小鼠制备的基础。

大鼠局灶性脑缺血再灌注后脑缺血半影区的界定

①目的 界定大鼠局灶性脑缺血再灌注后脑缺血半影区的范围。②方法 应用线栓法建立大鼠大脑中动脉闭塞再灌注模型 ,氯化三苯基四氮唑 (TTC)染色、甲苯胺蓝染色、焦油紫染色和苏木精 伊红染色界定脑缺血半影区和中心区。③结果 脑缺血再灌注 2h ,缺血病灶位于纹状体外侧区和额顶叶皮质下部 ,随着缺血再灌注时间的延长病灶范围逐渐扩大 ;再灌注 1～ 2d最大 ,波及纹状体内侧区和额顶叶皮质上部以及梨状区皮质 ,之后逐渐缩小 ;再灌注 7～ 14d恢复到再灌流 2h的水平。缺血病灶与周围正常脑组织之间有一形态和结构过渡区 ,该区的着色和细胞形态结构界于病灶和正常脑组织之间 ,即缺血半影区。缺血中心区神经细胞明显减少 ,呈现坏死特征 ;缺血半影区细胞主要呈现核固缩、染色质凝聚等凋亡特征。④结论 脑缺血再灌注缺血中心区位于纹状体外侧区和额顶叶皮质下部 ,缺血半影区位于纹状体内侧区和额顶叶皮质上部以及梨状区皮质。

小鼠侧脑室注射卡介苗诱导NMO-IgG/AQP4抗体的表达

【目的】通过小鼠侧脑室注射卡介苗(BCG)致中枢神经系统结核分枝杆菌(MTB)感染,检测小鼠血清中是否有视神经脊髓炎(NMO)-IgG/水通道蛋白4(AQP4)-Ab的表达。【方法】雌性C57BL/6J小鼠40只,6～8周,随机分为4组:5×106CFU BCG组、1×106CFU BCG组、0.01 mol/L PBS组、正常组。右侧侧脑室注射,注射后1周脑室注射追加1次。小鼠BCG注射后第7、14、21、28天,分别取血并检测血清中NMO-IgG/AQP4-Ab。注射后第28天处死小鼠行抗酸杆菌培养,并对脑和脊髓进行HE、抗酸、LFB髓鞘染色,免疫组化检测病灶处AQP4、GFAP的表达及C5b9沉积情况。【结果】脑室注射后,BCG组小鼠行为活动降低,出现肢体瘫痪,甚至死亡,其中5×106CFU BCG组表现严重,死亡率高。注射卡介苗21 d时小鼠血清检测发现5×106CFU BCG组中2只小鼠血清NMO-IgG/AQP4-Ab阳性,1×106CFU BCG组中4只小鼠血清中抗体阳性。第28天时5×106CFU BCG组的两只血清阳性的小鼠死亡,1×106CFU BCG组中原抗体阳性的小鼠血清中抗体仍为阳性。病理检测显示脑和脊髓出现炎性细胞浸润,病灶处抗酸染色阳性,出现脱髓鞘改变。组织培养3周后可见MTB生长,免疫组化显示病灶区域AQP4、GFAP表达降低,部分炎性细胞及血管周围出现补体C5b9沉积。【结论】中枢神经系统MTB直接感染可诱导产生NMO-IgG/AQP4-Ab。

伴耳鸣和听力下降的重症肌无力(附7例报告)

目的探讨重症肌无力(MG)患者伴有耳鸣和听力下降的诊断与鉴别诊断及可能的机制。方法7例伴耳鸣和听力下降的MG患者在注射新斯的明前后进行脑干诱发电位(BAEP)和电测听检查,并随访。结果所有患者在抗胆碱酯酶药治疗前BAEP检查均异常,治疗后检查BAEP好转或恢复正常,耳鸣和听力下降症状6例消失,1例好转。结论MG患者的耳鸣和听力下降可能与听神经传导通路和中耳听小骨肌神经-肌肉接头受累有关,无需特殊治疗。