大鼠骨髓细胞PPARγ和Cbf α1mRNA表达的增龄变化及相关性研究

目的观察大鼠骨髓细胞中过氧化物酶体增殖物激活受体(peroxisome proliferator-activated receptor γ,PPARγ)与核结合因子α1(cote binding factoralpha l,Cbfα1)表达的增龄性变化,分析二者变化的相关性,探讨老年性骨衰退发生的可能分子机制。方法取1、3、7、12、16、18和 20月龄的SD大鼠,每组雌雄各5只,无菌获得腰椎骨髓细胞,用RT-PCR方法检测骨髓细胞中 PPARγ与Cbfα 1mRNA的表达水平;并采用SPSS11．0统计软件进行差异单因素方差分析和相关分析。结果 PPARγ mRNA的表达水平在3月龄前变化不大,7月龄时下降,约为3月龄的34％ (P<0．01),之后逐渐上调,18月龄约为7月龄的8．8倍(P<0．001);Cbfα1 mRNA表达水平在3 月龄为最高,为1月龄的3倍(P<0．001),随后逐渐下调, 18月龄为最低,约为3月龄的6％ (P<0．001)．PPARγ与Cbfα 1mRNA的表达水平从3月龄开始呈负相关(r=0．5967,P<0．01), 相关系数随月龄增加而增加,16～20月龄期间二者变化的相关性最大。结论 PPARγ mRNA在老年大鼠骨髓细胞中高表达,且与Cbfα 1mRNA的表达呈负相关,提示骨髓细胞PPARγ高表达可能参与老年性成骨细胞前体减少和骨衰退的过程。

PTH作用于老年大鼠骨髓细胞骨代谢相关基因表达的实验方法

目的 从骨髓微环境角度研究甲状旁腺激素 (parathyroidhormone,PTH)对老年大鼠骨形成刺激作用的分子机制。方法 8只 2 0月龄雄性大鼠随机平均分两组 ,每组 4只 ,分别给予人重组甲状旁腺激素和生理盐水 ,1次 /天 ,5次 /周 ,8周后处死 ,无菌获取股骨和腰椎骨髓细胞 ,用RT PCR法检测成骨功能相关基因核结合因子α1(Cbfα1)、碱性磷酸酶 (ALP)和骨钙素 (BGP)及破骨细胞分化成熟调节基因NF κB受体激活因子配体(RANKL)、骨保护素 (OPG)、巨噬细胞克隆刺激因子 (M CSF)、肿瘤坏死因子受体相关因子 6 (TRAF6 )和白介素 - 6 (IL 6 )mRNA表达水平。结果 PTH显著增加骨髓细胞中成骨功能相关基因Cbfα1、ALP和BGPmRNA表达 (P <0 .0 5～ 0 .0 0 1) ;调整破骨细胞分化成熟调节基因mRNA表达 :下调RANKL、M CSF和TRAF6mRNA表达 (P <0 .0 5～ 0 .0 1) ,上调OPGmRNA表达 (P <0 .0 1)和IL 6mRNA表达 (P <0 .0 5 )。股骨与腰椎呈类似变化。结论 PTH增加老年大鼠骨量可能与其强烈刺激骨髓微环境中成骨活性基因表达 ,同时调整破骨细胞分化和功能成熟状态有关。

破骨细胞RANK激活后的信号通路

破骨细胞属血源性单核-巨噬细胞系统,多核为其重要功能形式,它通过分泌酸和蛋白酶溶解骨组织从而启动骨重建、完成骨吸收.RANKL-RANKOPG(osteoprotegerin)调节轴是其分化和活化的主要调节形式,其中跨膜受体RANK的激活是该调节轴作用的核心.RANK信号传导通路,以及通路中各因子作用的研究不仅对该调节轴作用机制的阐明具有重要意义,更为在分子水平认识和干预骨代谢疾病提供了理论基础.

EXAKT切磨系统在带金属种植体软硬组织切片中的应用

背景：目前常用的Polycut硬组织切片机难以制作皮质骨或含坚硬植入物组织的薄层切片,近年来这些切片多用EXAKT硬组织切磨系统进行制作。目的：实验采用EXAKT切磨系统制作含金属内植物的软、硬组织薄层切片。方法：取大鼠股骨远端、小鼠股骨干骨折部、带有钛合金种植体的犬下颌骨和带有钴铬支架的猪冠状动脉标本,经多聚甲醛固定和丙酮脱水后用有机玻璃（甲基丙烯酸甲酯）浸透包埋。组织包埋块用EXAKT系统作厚度约300μm的切片,然后磨片至厚5~10μm的切片。不同切片用苏木精-伊红和甲苯胺蓝染色后在光学显微镜下观察形态。结果与结论：甲苯胺蓝染色显示,大鼠股骨远端骨组织切片中干骺端矿化骨小梁呈浅蓝色、皮质骨结构完整,无碎裂。含带有钛合金种植体的犬下颌骨切片浅蓝色宿主骨与黑色金属种植体密切结合,形成牢固的界面。四环素标记的小鼠股骨干骨折部骨痂切片,在荧光显微镜（紫外光）下显示明显的双层荧光带。苏木精-伊红染色的包裹钴铬合金支架材料的猪冠状动脉组织切片显示,支架材料维持在原位,与血管壁无脱离或游移现象,组织无皱缩或折叠。结果提示,采用EXAKT切磨系统技术能制作出高质量的软、硬组织薄层切片,可清晰显示各种组织结构和人工植入物。

利用单细胞凝胶技术估算淋巴细胞受照剂量

目的 明确γ射线照射致淋巴细胞DNA损伤的量效关系,拟合曲线方程。方法 采用聚苯乙烯凹槽单层铺胶后进行碱性单细胞凝胶电泳,观察γ射线外照射引起的人外周血淋巴细胞DNA损伤效应。应用IPP软件采集“彗星”尾长,利用SPSS软件进行数据分析和曲线拟合。结果 γ射线照射导致淋巴细胞DNA单链断裂,DNA断片电泳图像清晰。“彗星”尾长与照射剂量正相关(r=0.907,P<0.01),量效曲线的拟合方程为y=109.369319-40.258796x+13.636240x^2(P<0.001)。结论 一元二次方程可以很好反映淋巴细胞DNA断片迁移长度与γ射线照射剂量之间的量效曲线。

碱性单细胞凝胶电泳铺胶技术的改进

目的 聚苯乙烯孔槽单层铺胶技术在碱性单细胞凝胶电泳中的可行性研究。方法 自制聚苯乙烯孔槽的载胶片 ,将 1%低熔点凝胶与淋巴细胞混合后单层铺胶 ,经 6Gyγ射线照射后进行碱性单细胞凝胶电泳 ,观察胶面和淋巴细胞的DNA损伤情况。结果 载胶片孔槽单层灌胶后胶面平整 ,操作过程无脱落 ;淋巴细胞DNA电泳图像清晰 ,6Gy照射产生的“彗星”形态特征明显。结论 采用聚苯乙烯孔槽进行单层铺胶的技术 。

外源性PTH对摘卵大鼠骨髓PPARγ mRNA表达的影响

目的观察骨质疏松大鼠骨髓微环境PPARγ mRNA表达变化和PTH治疗绝经后骨质疏松症的分子机制。方法雌性大鼠随机分为Sham、OVX和OVX＋PTH（1-34）20μg组，摘卵12周后给药，药后8周处死，观察骨髓脂肪细胞及PPARγmRNA表达变化。结果OVX组大鼠腰椎骨髓腔内脂肪空泡数较Sham组明显增加（P〈0．001），空泡百分面积为Sham组的26．81倍（P〈0．001）。OVX＋PTH20μg组的脂肪空泡数明显减少（P〈0．001），仅为OVX组的18．7％（P〈0．001）；OVX组骨髓PPARγmRNA表达较Sham组明显升高（P〈0．05—0．001），OVX＋PTH（1-34）20μg组PPARγmRNA表达则较不治疗组明显降低（P〈0．05～0．01）。结论OVX骨质疏松大鼠骨髓微环境PPARγmRNA表达上调，PTH对骨质疏松的促进骨形成作用与其抑制骨髓PPARγmRNA表达有关。

低氧诱导因子在骨巨细胞瘤中表达及其与肿瘤临床分期关系

目的通过观测不同临床分期骨巨细胞瘤组织中低氧诱导因子(HIF)及其下游靶基因血管内皮生长因子(VEGF)表达水平,了解HIF在骨巨细胞瘤发病中的调节作用。方法收集2006年6月至2009年7月间18例骨巨细胞瘤病例,根据Campanacci骨巨细胞瘤影像学临床分期进行分期;采用免疫组织化学技术分别对18例骨巨细胞瘤组织标本进行HIF-1α、HIF-2α和VEGF染色,观测其表达水平及分布状况。结果 18例患者中5例为Ⅰ期病损,4例为Ⅱ期病损,5例为Ⅲ期病损,4例为复发病损。组织标本切片免疫组织化学染色显示,有7例(7/18)呈HIF-1α阳性反应,全部标本呈HIF-2α、VEGF阳性反应;HIF-1α表达水平在各期病例组间无明显差异(P>0.05),HIF-2α、VEGF表达水平在Ⅱ、Ⅲ期和复发病例组明显高于Ⅰ期病例组(P<0.05)。结论骨巨细胞瘤进展中HIF-2α、VEGF表达水平增高,并与骨巨细胞瘤骨破坏程度及局部复发呈正相关。

骨肉瘤干细胞研究进展

肿瘤的组织结构多种多样,其中间质成分起支持和营养作用,实质是肿瘤的主要成分,决定肿瘤的生物学特点.通常根据肿瘤的实质形态来识别肿瘤的组织来源,并根据其分化成熟程度和异型性大小来确定肿瘤的恶性程度.随着对肿瘤实质细胞研究的深入,科学家发现其中含量较少的部分实质细胞与干细胞在表面标志和生物学特性上有很多相似之处,具有特殊的生物学行为,与肿瘤的生长、转移、耐药和复发关系密切,并由此推断肿瘤是由干细胞增殖分化失调引起,并提出了肿瘤干细胞（cancer stem cell,CSC）这一概念[1].