重组人粒细胞集落刺激因子在Escherichia coli中的表达研究

根据人天然粒细胞集落刺激因子 (G -CSF)基因序列设计出引物 ,通过RT -PCR从人外周血单个核细胞mRNA获得G -CSFcDNA片段 .将该片段与原核表达载体 pT 7构建成重组体 ,导入大肠杆菌后发现天然G -CSFcD NA表达量并不理想 .这可能是由于天然hG -CSF 5’端G +C的比例过高 ,使转录后的mRNA很容易形成二级结构而影响翻译起始 ,因此在大肠杆菌中很难获得高效表达 .根据密码子简并性原则 ,在不改变编码氨基酸顺序的前提下 ,通过重新设计PCR引物 ,将hG -CSF的前 3个氨基酸密码子中的几个GC碱基作了改动 ,获得了新的cDNA突变体 ,将其与pT 7的重组体导入大肠杆菌 。

鸢尾苷元和鸢尾苷的电子结构和光谱性质的含时密度泛函理论研究

采用ab initio的HF和DFT的B3LYP方法,对化合物鸢尾苷元和鸢尾苷基态结构进行优化,分析了前线分子轨道特征和能级分布.用含时密度泛函理论(TD-DFT)和半经验的ZINDO方法,对鸢尾苷元和鸢尾苷的电子光谱进行了研究,发现该物质主要吸收光谱源于分子内的π→π*的电子跃迁.计算结果表明,分子结构改变可影响化合物前线分子轨道分布和吸收光谱,吸电子基使紫外光谱红移.

竹叶中黄酮提取纯化工艺研究

采用正交试验的方法对竹叶中黄酮的乙醇提取条件进行了系统研究,同时采用大孔吸附树脂吸附法对纯化条件进行了研究.结果表明:以30倍体积80%的乙醇水溶液在80℃水浴中浸提3 h为最佳,4种大孔吸附树脂中AB-8树脂为纯化的最适树脂.

麻叶千里光挥发油抗病毒活性及成分分析

利用体外细胞病变效应(CPE)法,发现菊科千里光属植物麻叶千里光(Senecio cannabifoliusLess.)挥发油对呼吸道合胞病毒(RSV)和单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-Ⅰ)致HeLa细胞病变有显著的抑制作用,能不同程度地延缓副流感病毒、柯萨奇病毒B3、腺病毒Ⅲ型和流感病毒致细胞病变作用。为进一步确定麻叶千里光挥发油抗病毒的活性成分,经气相色谱-质谱联用技术对其进行了成分分析。麻叶千里光挥发油得率0.22%(mL/100g),从中初步鉴定了26种化合物,占挥发油总量的88.47%,主要为正十六(烷)酸(27.01%)、胡萝卜次醇(13.73%)、9,12-十八碳二烯酸(9.99%)、α-蒎烯(9.28%)和β-蒎烯(5.58%)。在鉴定出的化合物中,萜烯占47.42%,脂肪酸类占37.61%,其它成分仅占3.44%,故提示麻叶千里光挥发油中高含量的萜烯和脂肪酸类可能与其抗病毒活性有关。

葛花异黄酮对急性心肌梗死小鼠心肌的保护作用

目的通过小鼠急性心肌梗死模型观察葛花异黄酮对缺血心肌的影响,并探讨其作用机制。方法开胸结扎左冠状动脉前降支建立小鼠急性心肌梗死模型,以丹参注射液为阳性对照,观察葛花总黄酮低、高剂量组对心肌梗死面积、血清心肌酶、血清SOD和MDA含量的影响;并通过RT-PCR的方法,检测葛花总黄酮对缺血心肌β-肾上腺受体激酶1(β-adrenergic receptor kinase,β-ARK1)表达的影响。结果葛花总黄酮可明显缩小小鼠心肌梗死面积,降低血清心肌酶和MDA含量,下调心肌β-ARK1 mRNA的表达,并随着剂量的增加其作用加强。结论葛花总黄酮对急性心肌梗死小鼠心肌有明显的保护作用,其作用机制与其抗氧化损伤及下调心肌β-ARK1mRNA的表达有关。

有机-无机杂化纳米材料的制备、表征及性质

利用低温固相反应首次制备了 [(CH3 ) 4 N] 3 PW12 O4 0 ·6H2 O(Ⅰ ) ,[(CH3 ) 4 N] 6P2 Mo18O62 ·9H2 O(Ⅱ ) ,[HMTAH2 ] 2 ·SiW12 O4 0 ·7H2 O(Ⅲ )等纳米粒子 ,并用红外光谱、透射电镜、X射线粉末衍射等手段进行表征 .结果表明 ,粒子大小均一 ,平均粒子直径为 4～ 8nm ,并具有潜在的电荷转移盐性质及非线性光学性质 .

金丝桃素分子结构及其与HIV病毒蛋白酶作用的分子动力学研究

采用用计算化学方法研究金丝桃素分子结构特征,并用分子动力学方法研究其与HIV蛋白酶的相互作用,探讨其可能的抗HIV病毒作用机理.结果表明,金丝桃素分子结构具有刚性特征,与HIV蛋白酶在酶的催化活性位点与ASP-A25 and ASP-B25以氢键作用相结合.

提取高质量人参RNA的方法研究

针对人参组织多酚、多糖类物质含量较高的特点,比较了改良的异硫氰酸胍法、改良的CTAB法和改良的Trizol法等3种不同的RNA提取方法.3种改良的方法均能从人参组织中提取到总RNA.其中改良的Trizol法能有效地抑制酚类物质和多糖对总RNA提取的影响,能从成熟的叶片中获得高质量、完整性好的总RNA,每克新鲜组织RNA产量在90～120!g之间,电泳分析,28SrRNA亮度约为18SrRNA的2倍,A260/A280介于1.8～2.0之间.用改良的Trizol法分离的RNA,已成功进行了RT-PCR及人参叶cDNA文库构建等研究.

苦碟子挥发油化学成分的分析

对我国东北地产苦碟子中挥发油成分进行系统分析,确定挥发油的化学成分,为阐述其生物活性提供依据.采用水蒸汽蒸馏法提取挥发油,气相色谱--质谱联用仪进行分析.结果鉴定出37种化合物.在这些化合物中,脂肪烷烃类占53.21%,酮、醛类占39.05%,烯、烯醇、烯酸类占4.94%,酯类占1.57%.其挥发油的主要成分是6,10,14-三甲基-2-十五烷酮,含量为33.98%.

离子凝聚法制备负载流感疫苗的壳聚糖微球

采用三聚磷酸钠(TPP)作为离子交联剂,应用离子凝聚法制备负载流感疫苗的壳聚糖微球.筛选出壳聚糖起始质量分数为1%.TPP的浓度对壳聚糖微球的制备影响较大,采用低浓度的TPP(200μg/mL)制备的微球放置过夜均出现沉淀现象,高浓度的TPP(800μg/mL)在制备过程中出现絮状沉淀.固化比影响微球的释放行为,固化比为1∶1的微球爆炸式释放率达到90%,固化比为1∶3的微球6 h后逐步释放,12 h后释放率达到95%.固化比为1∶5的微球6 h后没有明显的释放行为.壳聚糖溶液的pH对微球的制备和释放没有显著的影响.通过对负载流感疫苗的壳聚糖微球的制备条件和释放行为的研究结果表明,pH=5.6的壳聚糖溶液,固化比为1∶3,TPP的质量浓度为400μg/mL是较理想的流感疫苗壳聚糖微球的制备条件.

千金子油理化性质及其脂肪酸和挥发油成分分析

对千金子油理化性质进行了系统的分析测试,并利用气相色谱法分析了千金子油脂肪酸及千金子挥发油,结果表明,千金子油中油酸含量最高占78.158%,其次是软脂酸、硬脂酸,分别为8.513%和5.523%;千金子挥发油中油酸、亚油酸和油酸-2-丙三醇酯含量较高,分别为17.747%,15.852%和13.196%.

地锦草总黄酮最佳提取分离工艺的研究

采用四因素三水平的正交实验方法,对地锦草总黄酮的最佳提取工艺进行了探索.采用乙酸乙酯萃取、酸碱沉淀、铅盐沉淀3种方法,对其最佳分离工艺进行了探索.正交实验结果表明:温浸法中四因素对地锦草黄酮的影响顺序为乙醇浓度>样液比>提取温度>提取时间.通过实验得到了地锦草总黄酮的最佳提取工艺:以10倍体积的50%的乙醇水溶液在80℃浸提1 h.地锦草总黄酮的最佳分离方法为酸碱沉淀法.这些数据为中药地锦草的开发和应用提供了科学依据.

决明子中总蒽醌苷元的大孔吸附树脂纯化工艺的研究

目的探索决明子蒽醌苷元的大孔吸附树脂纯化工艺。方法以决明子总蒽醌苷元质量分数和收率为主要考察指标,比较了乙醚和氯仿对蒽醌苷元提取的专属性,考察了大孔吸附树脂S-8、AB-8、X-5、NKA-12、D4020、D-101对决明子蒽醌苷元的吸附和解吸附特性以及纯化能力。结果决明子药粉采用氯仿浸提,上S-8型大孔树脂柱,水洗至中性,乙醇-5%NaOH(4∶1)洗脱,醇碱洗脱液浓缩、酸化处理得到质量分数为42.62%的蒽醌苷元。结论建立了一种蒽醌苷元的纯化工艺,为决明子中蒽醌苷元类成分的工业化生产提供依据。

北五味子中一种新的莽草酸衍生物的分离纯化及其含量测定

从北五味子中提取分离得到一种新的莽草酸衍生物,经一维、二维核磁共振波谱(1D NMR,HMQC,HMBC)等数据解析,鉴定为莽草酸正丁酯.并采用ZORBAX Extend C18柱,以乙腈-0.05%磷酸为流动相进行梯度洗脱,检测波长为215nm,流速1.0mL/min,建立了北五味子中莽草酸正丁酯含量的高效液相色谱分析方法.结果表明,莽草酸正丁酯在2～65μg/mL浓度范围内线性关系良好,相关系数r=0.9999,平均回收率为98.25%,相对标准偏差(RSD)为1.55%,表明本法简单准确,重复性好.

牛天然纤溶酶原Kringles结构域片段的获得及其抑制内皮细胞增殖作用研究

利用猪胰弹性蛋白酶和尿激酶限制性酶切牛纤溶酶原 ,获得了纤溶酶原Kringles结构域片段Kringles1 -3 (K1 -3 )和Kringles1 -4 (K1 -4 ) .研究发现 ,在没有自由巯基供体存在的条件下 ,尿激酶酶切牛纤溶酶原也能够产生K1 -4 ,从而认为存在由尿激酶酶切牛纤溶酶原直接产生K1 -4的途径 .所获得的K1 -3和K1 -4对恒河猴脉络膜

秘灵王对Swiss鼠与裸鼠免疫功能的影响

采用秘灵王（ＭＬＷ）灌喂正常Ｓｗｉｓｓ鼠与先天性免疫缺陷裸鼠，观察ＭＬＷ对两品系小鼠免疫功能的影响，探讨ＭＬＷ的免疫调节效应。结果表明，ＭＬＷ可显著促进Ｓｗｉｓｓ鼠Ｔ、Ｂ细胞对丝裂原的反应性；促进胸腺细胞与骨髓细胞的自发增殖；促进脾细胞产生ＩＬ－１、ＩＬ－６的能力（Ｐ＜０．０１）。ＭＬＷ对裸鼠仅可促进Ｂ细胞对ＧＰＳ的反应性（Ｐ＜０．０５）。裸鼠与Ｓｗｉｓｓ鼠比较，裸鼠Ｂ细胞对ＬＰＳ、ＧＰＳ的反应性、骨髓细胞自发增殖、血清ＣＩＣ水平等指标均高于Ｓｗｉｓｓ鼠（０．０１＜Ｐ＜０．０５），而胸腺细胞自发增殖、血清溶菌酶含量、脾ＭΦ精氨酸酶水平均低于Ｓｗｉｓｓ鼠（Ｐ＜０．０５）。提示ＭＬＷ对正常鼠及免疫缺陷鼠有不同的免疫调节效应。

人参叶全长cDNA文库的构建及部分克隆的序列分析

提取人参叶组织总RNA，用SMART^[TM] cDNA文库构建试剂盒所示方法，以λTriplEx2为载体构建了人参叶cDNA文库．经测定该文库初始滴度为1．2×10^6 pfu／mL，扩增后滴度为7．6×10^10pfu／mL，重组率为86％．插入片段长度为0．3～2．5kb．随机挑取16个cDNA克隆体进行测序分析，结果显示16个克隆体中有8个同GenBank中登录的人参皂苷合成相关基因GBR5，GBR3和GBR1高度同源，8个为新的基因序列．人参cDNA文库的建立为克隆人参中有明确功能的特异基因以及克隆和研究人参中的新基因奠定了必要的物质基础．

东北地区虻类采集报告

虻俗称瞎虻,在分类上隶属于双翅目虻科。虻是体型最大的凶猛叮吸人畜血液的一类昆虫,又是数种人畜间传染病的传播媒介,如罗阿丝虫病、野兔病、非洲锥虫病。

食物对独行菜种子黏粘蚊幼虫的影响观察

实验表明,独行菜种子对蚊类幼虫黏粘数量的多少,与食物密切相关,无食物组的平均黏粘数总是高于有食物组,差异显著。观察中还发现,伊纹幼虫随着龄期的长大,被黏粘数量逐渐减少;库蚊幼虫则相反,黏粘数量并不随着龄期的增长而递减,反而粘着数量保持较高水平。

人参叶cDNA文库构建中的问题与对策

人参是传统中药的典型代表且具有很高的药用价值。作为一种广泛种植的中药材,它的次生代谢产物种类多,但目前关于人参有效成分如人参皂苷的生物合成途径及其调控的基础研究相对缺乏。本文以人参叶组织为材料,总结了构建人参叶cDNA文库过程中存在的一些关键问题和应采取的对策,为今后人参和其它药用植物的RNA提取、构建高质量的cDNA文库来保存珍贵基因资源、克隆和研究与有效成分合成相关的基因及EST文库等,提供技术参考和理论指导。