缺氧对DEC1在肝癌细胞中表达的影响

目的探讨肝癌中分化型胚胎软骨发育基因1(differentiated embryo-chondrocyte expressed gene 1,DEC1)的表达水平,并评价缺氧对其表达的影响。方法选取人正常肝细胞系QSG-7701及肝癌细胞系BEL-7402、SMMC-7721,分别进行正常氧培养和缺氧培养(0、2、4、6、24和48 h),用RT-PCR和western blot检测各组缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)、DEC1 mRNA及蛋白质的水平,并进行相关性分析。结果正常氧培养时,BEL-7402、SMMC-7721细胞DEC1 mRNA和蛋白质表达均明显高于QSG-7701细胞(P均<0.01)。不同时相缺氧时HIF-1αmRNA表达无明显变化(F=1.995,P>0.05),但随缺氧时间延长,HIF-1α蛋白、DEC1 mRNA及DEC1蛋白表达显著增加(F分别为18.950、92.567和15.775,P均<0.01)。HIF-1α蛋白与DEC1 mRNA及DEC1蛋白的表达均呈正相关(r分别为0.885、0.826,P均<0.05)。结论 DEC1在人肝癌细胞中高表达,缺氧可诱导肝癌细胞中DEC1表达升高。

缺氧对人肝癌HepG2细胞HIF-1α、PCNA表达水平的影响

目的：探讨缺氧对人肝癌HepG2细胞中缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）及增殖细胞核抗原（PCNA）表达的影响。方法：体外培养HepG2细胞，通过CoCl2化学模拟缺氧作用，采用实时荧光定量聚合酶链式反应实验（Real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction，PCR）检测基因HIF-1α、PCNA mRNA水平变化，蛋白质印迹（Western Blot，WB）检测HIF1-1α、PCNA蛋白表达水平的变化，细胞化学染色检测HIF-1α、PCNA蛋白表达变化。结果：CoCl2导致的化学缺氧可诱导人肝癌HepG2细胞HIF-1α、PCNA的上调表达。结论：缺氧可提高HIF-1α的表达，可能促进肝癌细胞的进一步增殖。

缺氧对人肝癌SMMC-7721细胞HIF-1α和DEC1表达影响及机制分析

目的:探讨缺氧对人肝癌SMMC-7721细胞中缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)和分化型胚胎软骨发育基因1(differentiated embryo-chondrocyte expressed gene 1,DEC1)表达的影响,并分析其机制,为肝癌的缺氧调节提供理论依据。方法:以肝癌SMMC-7721细胞为实验材料,应用二氯化钴(CoCl2)建立体外缺氧模型,对SMMC-7721细胞进行不同时间的缺氧培养(0、2、4、6、24和48h)。RT-PCR和蛋白质印迹法分别检测缺氧不同时相HIF-1α和DEC1mRNA及蛋白质的表达变化。HIF-1α和DEC1蛋白表达的相关性采用Pearson等级相关性分析。应用HIF-1α蛋白抑制剂YC-1对SMMC-7721细胞进行HIF-1α抑制培养,并设立缺氧对照组和常氧对照组,观察抑制HIF-1α对DEC1表达影响。结果:常氧培养时,肝癌细胞中HIF-1α和DEC1mRNA和蛋白表达明显高于肝细胞。随缺氧时间延长,HIF-1α蛋白、DEC1mRNA及DEC1蛋白表达均明显增加,F值分别为183.13、127.78及84.22,P值均<0.01;但HIF-1αmRNA表达无明显变化,F=0.960,P>0.05。其中HIF-1α蛋白、DEC1mRNA及DEC1蛋白均在缺氧4h达到高峰,相对表达量分别为1.183±0.063、2.182±0.234及0.839±0.051,与常氧对照组相比较,差异均有统计学意义,P值均<0.001。Pearson相关性分析结果显示,HIF-1α蛋白与DEC1蛋白表达呈高度正相关,r=0.826,P<0.05。YC-1抑制培养时,HIF-1α蛋白、DEC1mRNA及DEC1蛋白均较缺氧对照组明显降低,相对表达量分别为0.507±0.028、0.702±0.044及0.676±0.067,F值分别为428.12、730.24和371.69,P值均<0.01;但HIF-1αmRNA表达无明显变化,F=0.757,P>0.05。结论:干扰或抑制肝癌SMMC-7721细胞中HIF-1α蛋白的表达,能够降低缺氧诱导的DEC1高表达,为肝癌的缺氧调节和临床治疗提供理论依据。

TIPE2 mRNA在幽门螺杆菌感染患者外周血中的表达及其意义

目的探讨肿瘤坏死因子α诱导蛋白8样因子2(TIPE2)mRNA在幽门螺杆菌感染患者外周血中的表达及其意义。方法 36例感染幽门螺杆菌的患者作为观察组,30名健康人作为对照组。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)测定两组外周血TIPE2 mRNA表达,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测超敏C反应蛋白(hs-CRP)的表达,并观察胃部的炎症活动情况。结果观察组TIPE2 mRNA表达明显高于对照组(P<0.01),观察组hs-CRP明显高于对照组(P<0.01)。TIPE2 mRNA和hs-CRP有明显正相关关系(r=0.8897,P<0.01)。TIPE2 mRNA与胃部炎症的活动性有明显正相关关系(r=0.7162,P<0.01),并且不同活动性胃炎之间TIPE2 mRNA表达有明显差异(P<0.05)。结论 TIPE2 mRNA在幽门螺杆菌感染患者的外周血中表达明显增高,并且与炎症活动性有关系。