医学形态学实验互动教学改革实践

形态学实验课教学是医学生较早接触的主要基础实验课程,但受传统实验室功能的限制,师生交流效率不高。随着多媒体技术、网络技术的日渐成熟,Motic数码显微互动实验室的建立,创造了一个图文并茂、有声有色、生动逼真的实验教学环境,使医学形态学实验课教学方式发生了巨大的转变。

在胚胎切片中同时检测多种抗原的方法

目的在一张胚胎切片中同时检测多种抗原,从而在同等条件下更加深入地从不同角度连续系统地观察小鼠胚胎发育中所测抗原的时空变化规律。方法将小鼠胚胎连续石蜡切片铺于同一张载玻片上,相邻切片分别滴加三种不同“一抗”,检测不同的抗原。结果应用此法,可同时观察三种蛋白质的表达,还可连续观察这些特异性蛋白质与小鼠胚胎脏器形态建立和功能完善过程中的关系。结论此法可观察不同发育时期小鼠胚胎各部分形态结构变化,还可以了解胚胎发育过程中不同蛋白质的时空表达及调控规律,对科研及医学生的教学工作都非常有意义。

一种简易石蜡包埋块改做电镜标本的方法

一种简易石蜡包埋块改做电镜标本的方法乔从进１王彤１张彰２彭希平１（１山西医学院组织胚胎学教研室太原０３０００１２山西医学院电镜室）关键词病理组织标本组织切片术显微镜检查，电子中图号Ｒ３６１．２当石蜡包埋的标本在光镜下看到有进一步进行电镜观察的必要时，...

神经嵴细胞和胰岛因子1阳性细胞与小鼠胚胎心流出道发育的关系

目的探讨迁移中的细胞视黄酸结合蛋白1(CRABP1)阳性神经嵴细胞、胰岛因子1(ISL-1)、阳性心肌前体细胞与小鼠胚胎心流出道发育的关系。方法 36只胚龄8.5～13d小鼠胚胎心连续石蜡切片,选用抗α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、抗心肌肌球蛋白重链(MHC)、抗转录因子ISL-1、抗CRABP1和抗磷酸化组蛋白H3(PHH3)抗体,进行免疫组织化学及免疫荧光染色。结果胚龄8.5～10d,ISL-1阳性心肌前体细胞相继出现在心背系膜、原始咽两侧、头面部、鳃弓核心间充质和心包腔背侧壁间充质,构成心管流出道发育的第二生心区。胚龄11～13d,ISL-1阳性细胞在咽前方聚集,形成特征性锥体形结构,并向升主动脉、肺动脉干及主肺动脉隔延伸。胚龄9d前,神经嵴细胞散在分布于ISL-1阳性细胞之间,流出道远侧端可见少量CRABP1和ISL-1双阳性细胞。胚龄10d,CRABP1阳性神经嵴细胞分布在ISL-1阳性鳃弓核心间充质周围。随着发育,弓动脉等处的神经嵴细胞逐渐失去CRABP1表达,开始表达α-SMA。结论 ISL-1阳性第二生心区是动态结构,胚龄8.5～10d时,在神经嵴细胞配合下,向心管动脉端添加心肌细胞;胚龄11d后,开始向平滑肌方向分化,参与升主动脉、肺动脉干和主肺动脉隔的发育。

小鼠胚胎呼吸内胚层形态发生与咽前间充质发育及流出道分隔的关系

目的探讨呼吸内胚层与咽前间充质细胞发育的关系及对小鼠胚胎心流出道分隔的影响。方法45只胚龄8—13d小鼠胚胎心连续石蜡切片，用抗胰岛因子1（ISL-1）、抗α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、抗音猬因子（音速波状蛋白，Shh）、抗patched（Ptc1）、抗patched2（Ptc2）、抗smoothened（Smo）及抗心肌肌球蛋白重链（MHC）抗体进行免疫组织化学及免疫荧光染色。结果胚龄8～9d，ISL-1阳性细胞分布在心包腔背侧壁及前肠两侧间充质，并延伸至原始心管动脉端，心管心肌显较强的Ptc1和Ptc2阳性表达。胚龄10～13d，呼吸内胚层向腹侧延伸，Ptc1和Ptc2呈较强表达，ISL-1阳性咽前间充质细胞围绕呼吸内胚层形成对称的特征性锥体形结构，经动脉囊背侧壁伸入动脉囊腔，形成主肺动脉隔。胚龄12d，主肺动脉隔ISL-1阳性表达基本消失，大部分细胞转变为OL-SMA阳性细胞。结论呼吸内胚层的分化发育与咽前ISL-1阳性间充质细胞的发育聚集密切耦联。发育中的呼吸内胚层可能作为组织中心，通过Shh信号通路对ISL-1阳性细胞的聚集提供位置信息。呼吸内胚层的正常腹侧延伸不但可诱导ISL-1阳性细胞的正常迁移和流出道的正常分隔，对流出道的正常形态发生及有效的肺循环建立起重要作用。

肥大细胞在食管癌的特征—组织化学与电镜的观察

对18例食管癌的肥大细胞进行了组织化学与电镜下的观察,发现在癌组织边缘,癌组织内血管附近结缔组织中及癌旁组织的上皮下与粘膜下层都出现了大量肥大细胞.这些肥大细胞在Alcian蓝、藏红染色,其颗粒主要为Alcian蓝阳性.在显示肝素的硫酸小檗碱荧光反应,在癌组织及癌旁组织的肥大细胞大多都是阴性.有极少数的癌旁组织的肥大细胞呈黄色荧光反应.电镜下,肥大细胞颗粒中具有T肥大细胞特征的多个涡卷状结构.有些肥大细胞直接和癌细胞密切接触,有些则和血管内皮紧密接触,在此部位的血管内可见有淋巴细胞贴附填充.肥大细胞多呈活化状态,活化的肥大细胞呈持续地“一点儿一点儿”的脱颗粒现象.

人胃粘膜肥大细胞的分布与超微结构

光镜观察了25例人胃底部组织甲苯胺蓝染色切片的粘膜肥大细胞的分布.电镜观察了5例人胃底活检材料内粘膜肥大细胞的超微结构.结果:人胃粘膜肥大细胞主要分布在粘膜的浅层和中层,与壁细胞的分布有密切的位置关系;人胃粘膜肥大细胞超微结构可分为T型与TC型两种,与啮齿类动物消化道T型和TC型肥大细胞的分布有所不同.结论:人胃粘膜肥大细胞释放的组胺可能刺激邻近的壁细胞分泌胃酸.

小鼠胚胎心流出道的形态发生与呼吸内胚层发育耦联

目的探讨小鼠胚胎心发育过程中前肠呼吸内胚层与第一生心区和第二生心区及胚胎心流出道的形态发生关系。方法胚龄7.5～13d小鼠胚胎心各3个,连续石蜡切片,用抗胰岛素增强子结合蛋白1(ISL-1)、抗心肌肌球蛋白重链(MHC)、抗α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、抗Nkx2.5和抗增殖细胞核抗原(PCNA)抗体进行免疫组织化学或免疫荧光染色。结果胚胎发育7.5d,ISL-1在生心板心肌前体细胞表达并与发育中的第二生心区ISL-1阳性细胞连续。胚胎发育第10～13天,可见ISL-1强阳性的前肠腹侧呼吸内胚层细胞增生,排列不规则,失去极性,细胞间间隙明显,变为间充质样细胞,与周围ISL-1阳性间充质细胞无明确界限。紧邻动脉囊背侧壁,局部增生的内胚层向动脉囊方向生长,形成实心细胞索,ISL-1阳性间充质细胞围绕前肠腹侧呼吸内胚层及细胞索形成特征性锥体样结构。结论第一和第二生心区是连续结构,ISL-1同时是两个生心区心肌前体细胞的标记蛋白。呼吸内胚层和内胚层细胞索可能诱导第二生心区的扩展,并通过上皮-间充质转化,保持第二生心区细胞数量稳定。

超级化激活环核苷酸门控阳离子通道4、连接蛋白43和平足蛋白在小鼠胚胎心的表达与心传导系的发生

目的探讨小鼠胚胎心传导系的发生机制。方法用抗心肌肌球蛋白重链(MHC)、抗超级化激活环核苷酸门控阳离子通道4(HCN4)、抗缝隙连接蛋白43(CX43)和抗平足蛋白(podoplanin)抗体,对40只胚龄9～16d小鼠胚胎心进行连续石蜡切片并免疫组织化学或免疫荧光染色。结果胚龄9d,较强的HCN4阳性表达集中在MHC阴性的静脉窦壁,随心脏发育,HCN4较强阳性表达逐渐向窦房结转移。胚龄11d开始,CX43阴性表达显示部位特异性。CX43阴性染色经窦房结沿右心房背侧壁和左、右静脉瓣向房室管背侧壁延伸。胚龄13d,左、右静脉瓣与房间隔底部融合后,进一步延续为房室管背侧壁发育中的CX43阴性染色的房室结,继而与室间隔顶部CX43阴性的房室束相连。胚龄9～10d,在MHC阳性心肌、心包腔背侧壁脏壁中胚层心肌前体细胞及静脉窦周间充质均显示podoplanin阳性表达。胚龄11～13d,podoplanin阳性间充质细胞沿心脏外表面扩展形成podoplanin阳性间皮样心外膜。结论心脏发育早期,主起搏点位于静脉窦壁,起搏电位的产生早于收缩功能的发生。CX43阴性心肌是发育中的心传导系心肌,在胚龄11d即可观察到心传导系早期雏形。podoplanin参与促进心肌前体细胞向心肌细胞的分化。

α-SCA、α-SMA和结蛋白与小鼠胚胎心肌发育成熟的关系(英文)

目的观察α-横纹肌肌节肌动蛋白(α-SCA)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和中间丝结蛋白在小鼠心脏发育过程中的时空表达特征,以探讨这些蛋白质表达与胚胎及生后小鼠心脏成熟的关系。方法用抗α-SCA、抗α-SMA及抗结蛋白单克隆抗体对胚胎及生后小鼠心脏连续切片进行染色。结果胎龄9 d,心室和流出道α-SCA、α-SMA表达较强,而结蛋白表达较弱。在心房,α-SCA、α-SMA的表达限于背侧壁和腹侧壁,静脉窦仅见少许α-SCA弱阳性细胞。心房和静脉窦则无结蛋白表达。α-SCA、α-SMA和结蛋白的表达于胎龄12 d达高峰。较高水平的α-SCA表达将持续到生后。心脏各部α-SMA和结蛋白表达于胎龄12 d后逐渐下降,但在右心室表达持续时间较长。出生后,结蛋白表达主要集中于明带Z线和闰盘。结论α-SMA和结蛋白在小鼠胚胎心脏表达的时空差异性表明小鼠胚胎心脏不同部位发育成熟的时间有差异,右心室成熟较慢。α-SMA表达可能与早期胚胎心脏的缓慢蠕动收缩有关。肌节的发育成熟需要较高的结蛋白表达。

小鼠胚胎心脏流出道嵴的发育

目的探讨小鼠胚胎心脏流出道嵴内α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)阳性细胞的来源及流出道嵴融合时间充质细胞超微结构的变化。方法用抗α-SMA、抗α-横纹肌肌动蛋白(α-SCA)单克隆抗体、PlexinA2探针,对胚龄10～14d小鼠胚胎心脏切片进行免疫组织化学和原位杂交染色;透射电镜观察胚龄12.5d时小鼠心流出道嵴的融合过程。结果胚龄10～11d,小鼠神经管及其周围、动脉囊和弓动脉壁可见PlexinA2阳性细胞,并沿动脉囊壁迁入流出道嵴内,部分细胞同时表达α-SMA。胚龄12d,PlexinA2阳性细胞分布在脊神经节、咽前间充质、主肺动脉隔以及主、肺动脉壁。主肺动脉隔显α-SMA强阳性,但动脉壁仅见少量α-SMA阳性细胞。胚龄12.5d,流出道嵴内致密间充质细胞团形成并开始融合,PlexinA2表达较弱,α-SMA表达呈强阳性。在流出道嵴融合开始后,嵴表面的内皮细胞带形成继而断裂消失,由含微丝少、排列稀疏的间充质细胞取代。两侧致密细胞团逐渐靠拢、融合。有的间充质细胞内含较多线粒体和微丝,细胞之间形成细胞连接点;有的间充质细胞含微丝少,细胞膜间断融合。结论流出道心内膜垫内α-SMA阳性间充质细胞来自神经嵴;内皮细胞-间充质细胞转化可能参与了流出道嵴融合;致密细胞团内间充质细胞富含微丝束和细胞连接点或发生细胞膜融合有助于流出道嵴的融合。

转录因子Nkx2.5、ISL-1表达与小鼠胚胎心的早期发育

目的：探讨转录因子Nkx2.5和ISL-1的表达与小鼠胚胎早期心发育的关系.方法：胚龄7.5～13d小鼠胚胎连续石蜡切片,用抗α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、抗心肌肌球蛋白重链（MHC）、抗转录因子ISL-1、抗Nkx2.5抗体,进行免疫组织化学显色.结果：转录因子Nkx2.5在胚龄7.5d生心板表达早于心肌特异性蛋白MHC及SMA.随心外形建立,Nkx2.5在心各部表达逐渐增强.胚龄9d, Nkx2.5阳性表达从原始心管动脉端延伸至心包腔背侧脏壁中胚层及咽周围轴旁中胚层.Isl-1开始表达于胚龄8d原始心管心背系膜及前肠腹侧脏壁中胚层间充质,阳性细胞数量在11～12d达顶峰,形成前肠腹侧连接流出道远端和心房背侧壁的ISL-1阳性细胞带.11～12d,流出道远端出现Nkx2.5和MHC阴性,ISL-1、SMA阳性表达区.胚龄13d后,Nkx2.5和ISL-1在心和前肠腹侧间充质的表达强度下降.结论：Nkx2.5是原始生心区心肌前体细胞早期分化的标记蛋白,在第2生心区表达限于胚龄9d、咽周脏壁和轴旁中胚层心肌前体细胞亚群.第2生心区标记蛋白ISL-1主要表达在胚龄8～12d前肠腹侧脏壁中胚层心肌前体细胞,并向心管添加心肌细胞,参与流出道发育及心管成襻.11d后,第2生心区间充质细胞开始分化为升主动脉和肺动脉干平滑肌.

原癌基因pokemon mRNA及其蛋白在非小细胞肺癌中的表达和意义

目的探讨原癌基因PokemonmRNA及其编码蛋白在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织中的表达及其与NSCLC发生的关系。方法应用RT-PCR和原位杂交技术检测pokemon mRNA在NSCLC组织和癌旁正常组织中的相对表达量及细胞定位;利用免疫组织化学染色分析NSCLC组织和癌旁正常组织标本中Pokemon蛋白的表达。结果半定量RT-PCR显示,pokemon mRNA在NSCLC组织中高表达(0.916±0.424),在对应的癌旁正常组织中低表达(0.408±0.307),两组之间具有显著的统计学差异(P<0.05);原位杂交结果显示,pokemon转录本在NSCLC细胞胞质中呈阳性表达,而癌旁正常组织不表达或低表达;免疫组织化学染色分析结果显示,NSCLC组织和对应的癌旁正常组织中Pokemon蛋白阳性表达率分别为87.5%(35/40)和15%(6/40),两组之间具有显著的统计学差异(X2=42.076,P<0.005)。Pokemon蛋白主要定位在癌细胞胞质内,少量定位在胞核中,呈颗粒状分布。结论原癌基因poke-mon mRNA及其编码蛋白在NSCLC中的高表达很可能与NSCLC的发生密切相关。

小鼠胚胎细胞视黄酸结合蛋白1阳性神经嵴细胞的时空分布与功能

目的探讨小鼠胚胎心神经嵴细胞的形成、分布模式及其在心血管系统发育过程中的作用。方法选用抗细胞视黄酸结合蛋白1(CRABP1)、抗α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、抗心肌肌球蛋白重链(MHC)、抗胰岛因子1(Isl-1)抗体,对45只胚龄8～12d小鼠胚胎连续切片进行免疫组织化学染色。结果胚龄8d,CRABP1在神经褶的外胚层未见阳性表达。胚龄8.5～9d,在心管与鳃弓水平,神经褶开始出现CRABP1阳性细胞,且有部分细胞从神经褶背侧分离进入邻近间充质。胚龄10d,神经管两侧间充质内的CRABP1阳性细胞迁移至鳃弓、弓动脉壁内皮周围以及流出道心胶质内。胚龄11～12d,弓动脉内皮周围、流出道心内膜垫内CRABP1表达明显下降,但弓动脉管壁α-SMA阳性平滑肌细胞数量增加。主肺动脉隔及其分隔形成的升主动脉和肺动脉干管壁内均可见Isl-1阳性细胞,但未见CRABP1表达。结论小鼠胚胎CRABP1阳性神经嵴细胞形成的时间窗限定在胚龄8.5～9d。胚龄10d后,CRABP1阳性神经嵴细胞经过迁移,参与弓动脉中膜平滑肌和流出道心内膜垫的形成。CRABP1不能用于标记迁移后的神经嵴细胞。

数码显微互动实验教学在组织学与胚胎学中的应用体会

随着社会的发展,传统的实验教学模式已不能满足组织学与胚胎学的教学要求,新型数码显微互动实验平台逐渐在组织胚胎学实验教学中兴起,并且显示出明显优势。数码显微互动实验平台示教效果良好,有利于提高授课效率和节约实验成本;平台互动性较强,有利于师生间或同学间即时动态交流,激发学习兴趣;数码显微互动实验平台还提供了多种考核方式,有利于学生自主学习模式的尝试和建立。数码显微互动实验平台在应用中也遇到一些问题,如学生显微镜操作能力降低,影响教师实验授课能力,部分硬件易损,软件不够完善等,在以后教学过程中应尽量避免或解决。

生命伦理学融入组织学与胚胎学实验教学初探

组织学与胚胎学是学习其它医学理论知识的基础,但是课程内容抽象、难懂,学生总处于被动机械学习状态。为使学生参与课堂教学、成为实验教学的驱动力,我们充分利用新校区显微数码互动实验室,积极转变教学观念,科学调整教学环节,尝试生命伦理学融入组织学与胚胎学实验教学模式的探索,激发学生的学习兴趣。通过引导性提问,启发学生独立思考,体现以学生为中心的教育理念。在基础课程学习过程中逐步培养医学生临床诊疗思维,帮助每一位医学生及早建立正确的生命伦理价值观,促进医学科学与医学人文的结合。

数码显微互动实验教学在组织学与胚胎学中的应用

数码显微互动实验室在实验教学的逐步应用,加速了形态学实验课从传统教学模式向现代教学模式的转变,把现代信息技术融入高等教育的课堂,为形态学实验课教学提供了高效率的教学和沟通手段。通过多年来对组织学与胚胎学实验课教学方法的摸索,将与传统模式相结合的数码显微互动实验教学运用于组织学与胚胎学,充分发挥了两种教学模式的优势,弥补了各自存在的缺点,相对于传统教学模式来说,教学内容更加丰富,互动式的教学模式使课堂气氛活跃,充分调动了学生的积极性、主动性,教学效果显著提高。

胎儿消化器官发育中的肥大细胞超微结构特点

实验对10例不同胎龄胎儿消化器官的肥大细胞进行了超微结构观察.发现胎儿发育接近成熟时,其肥大细胞根据颗粒的超微结构可分TC肥大细胞和T肥大细胞两型;胎儿发育后期肥大细胞有分泌活动.呈活化状态;胎儿肥大细胞与成纤维细胞、上皮细胞、血管、神经等密切接触.结果说明:在胎儿发育成熟过程中,肥大细胞有异质性变化.肥大细胞与周围组织微环境间有相互作用关系.

α-平滑肌肌动蛋白在人胚心流出道早期发育中的表达

目的探讨人胚早期心流出道心肌和流出道心内膜垫内α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达规律及其意义。方法32例C10-C16期[Carnegie分期法,受精后（22±1-37）d]人胚心连续切片,经抗α-SMA、抗α-横纹肌肌动蛋白（α-SCA）、抗肌球蛋白重链（MHC）抗体免疫组织化学染色,观察流出道重塑过程中α-SMA在心肌与心内膜垫内的表达规律。结果人胚发育C10-C15期,心包腔背侧脏壁上皮不断分化为心肌细胞添加至流出道远端,这些心肌细胞α-SMA的表达早于α-SCA和MHC。C16期,流出道嵴近心肌处出现-αSMA强阳性细胞,相邻的心肌细胞伸出突起与其相连。C12-C15期,α-SMA阳性细胞逐渐迁入流出道心内膜垫内,同时可见流出道内皮转为α-SMA阳性,向间充质细胞分化。不同来源的间充质细胞共同参与形成螺旋状流出道嵴。结论α-SMA可作为心肌细胞早期分化的标志;流出道嵴内α-SMA阳性细胞可能部分来自神经嵴,部分为正在向间充质细胞分化的内皮细胞。

肥大细胞与成纤维细胞功能关系的光镜与电镜研究

通过对正常人体皮肤真皮与胶原纤维大量增生的疾患的真皮组织的光镜与电镜的比较观察,发现在病因不同,而都有胶原纤维大量增生的系统性硬皮病与皮肤纤维瘤的真皮组织中,肥大细胞都比正常时显著增多(P<0.01),而且肥大细胞常与成纤维细胞紧密相靠接,这里的肥大细胞脱颗粒现象也增多。从颗粒的超微结构特征所示,这些肥大细胞以未成熟的T型肥大细胞为主。以上提示:肥大细胞在调节成纤维细胞产生胶原纤维的功能上具有重要意义。