影响蛋鸡产蛋机能的常见病因及防治

南阳市目前拥有蛋鸡养殖场390家,建成了宛城凰台岗禽业和盈胜农牧、内乡河南天健、镇平君和等10多家蛋鸡自动化生产企业,南阳市蛋鸡产业的发展已经走在了河南省家禽业的前列,但在蛋鸡生产中,常常被产蛋机能障碍症所困扰,造成严重的经济损失。

凶险性前置胎盘组织中HMGB1蛋白表达及其与胎盘植入的关系研究

目的:探讨凶险性前置胎盘组织中高迁移族蛋白B1(HMGB1)的表达及其与合并胎盘植入的关系。方法:收集本院凶险性前置胎盘孕妇68例(凶险性前置胎盘组),其中合并胎盘植入组21例,未合并胎盘植入组47例,另选同期非前置胎盘剖宫产孕产妇40例作为对照组。采用免疫组织化学法检测两组胎盘组织中HMGB1和血管内皮生长因子(VEGF)的表达,并计数胎盘中微血管密度(MVD);采用蛋白免疫印迹分析胎盘组织中HMGB1和VEGF蛋白表达量。结果:两组胎盘组织中HMGB1和VEGF蛋白表达均定位于血管内皮细胞。凶险性前置胎盘组HMGB1、VEGF和MVD水平均显著高于对照组,且合并植入组HMGB1、VEGF、MVD均显著高于未合并植入组(P<0.05)。凶险性前置胎盘中HMGB1蛋白表达量与MVD值呈明显正相关(r=0.345,P<0.05),与胎盘VEGF表达量呈明显正相关(r=0.250,P<0.05),且VEGF与MVD值呈明显正相关(r=0.252,P<0.05)。结论:凶险性前置胎盘组织中存在HMGB1高表达,且与胎盘植入发生相关,其机制可能为通过促进VEGF表达参与胎盘的血管生成过程。

载脂蛋白B/A1比值对子痫前期患者妊娠结局的预测价值

目的:探讨载脂蛋白B/载脂蛋白A1(ApoB/A1)比值对子痫前期(PE)患者妊娠结局的预测价值。方法:选取2020年1月至2021年1月郑州大学第二附属医院妇产科收治的112例PE孕妇,根据病情分为轻度PE组(52例)和重度PE组(60例),另选取同期健康孕产妇56例为对照组。根据妊娠结局分为结局良好组(n=62)与结局不良组(n=50)。对比分析3组孕产妇的ApoB、ApoA1及ApoB/A1比值。ROC曲线评估ApoB/A1对PE的诊断价值,logistic回归及ROC曲线分析ApoB/A1对PE妊娠结局的预测价值。结果:与对照组比,轻度及重度PE组的ApoB、ApoB/A1均显著升高(P<0.05),重度PE组的ApoB、ApoB/A1高于轻度PE组(P<0.05),ApoA1水平低于轻度PE组(P<0.05)。ApoA1、ApoB、ApoB/A1诊断PE的曲线下面积(AUC)分别为0.710、0.860和0.882。与妊娠结局良好组相比,妊娠结局不良组的ApoB、ApoB/A1均显著升高,ApoA1降低(P<0.05)。ApoB、ApoB/A1是PE孕妇不良妊娠结局的独立危险因素[OR(95%CI)=2.839(1.096~7.356),P=0.032;OR(95%CI)=3.451(1.363~8.737),P=0.009],其预测妊娠结局的AUC分别为0.750、0.787。结论:ApoB/A1与PE具有一定相关性,对PE孕妇的妊娠结局可能具有预测价值。

微小RNA-101及髓细胞白血病因子-1在子痫前期中的表达及对胎盘滋养层细胞的影响

目的:探讨微小RNA-101(miR-101)和髓细胞白血病因子-1(MCL1)在子痫前期(PE)中的表达及对胎盘滋养层细胞增殖、凋亡及侵袭的影响。方法:收集2018年6月至2020年12月在郑州大学第二附属医院妇产科就诊的56例PE孕妇(PE组)和60例正常孕妇(对照组)的相关资料,采用荧光定量PCR(qRT-PCR)检测其胎盘组织中miR-101的相对表达水平,蛋白免疫印迹法及免疫组织化学法检测MCL1的表达,分析二者表达的相关性;采用双荧光素酶报告基因实验验证人滋养层细胞HTR8/SVneo中miR-101与MCL1的靶向关系;通过转染分别抑制HTR8/SVneo细胞中miR-101和MCL1的表达,并采用CCK8法、流式细胞仪及细胞侵袭实验检测细胞增殖、凋亡及侵袭能力的变化。结果:PE组胎盘组织中miR-101水平明显高于对照组,MCL1蛋白水平明显低于对照组(P<0.05),且二者表达呈负相关(r<0,P<0.05);miR-101与MCL1之间存在靶向关系,体外抑制miR-101后HTR8/SVneo细胞的增殖和侵袭活性升高,凋亡率下降(P<0.05),与单独抑制miR-101相比,共抑制miR-101和MCL1的表达后细胞的增殖和迁移能力降低,凋亡率升高(P<0.05)。结论:miR-101在PE胎盘组织中高表达,并通过靶向MCL1引起滋养层细胞增殖、浸润不足和异常凋亡,参与PE的发生进展。

重组脂联素对自然流产模型小鼠妊娠结局及Th17/Treg平衡的影响

目的探究重组脂联素(APN)对自然流产(SA)模型小鼠妊娠结局及辅助性T细胞17(Th17)/调节性T细胞(Treg)平衡的影响。方法将雌性CBA/J小鼠与雄性BALB/c小鼠交配建立正常妊娠(NP)模型(n=10),雌性CBA/J小鼠与雄性DBA/2小鼠交配建立SA模型(n=20),造模成功后,将20只SA模型小鼠随机分为脂联素组(APN组,n=10)和生理盐水组(NS组,n=10),妊娠第5d,APN组腹腔注射10μg/(kg·d)重组脂联素,1次/d,NP组和NS组腹腔注射等量生理盐水,3组疗程为9 d。疗程结束,眼球取血,检测血清中白细胞介素17(IL-17)、脂联素、转化生长因子β(TGF-β)、IL-17/TGF-β水平;处死孕鼠,计算胚胎吸收率,检测脾脏淋巴细胞中Th17/Treg细胞分群。结果与NP组比较,NS组胚胎吸收率及血清中IL-17、IL-17/TGF-β水平及Th17/CD4+T细胞比例、Th17/Treg比值明显升高(P<0.05),血清中脂联素、TGF-β水平及Treg/CD4+T细胞比例明显下降(P<0.05);与NS组比较,APN组胚胎吸收率及血清中IL-17、IL-17/TGF-β水平及Th17/CD4+T细胞比例、Th17/Treg比值明显下降(P<0.05),血清中脂联素、TGF-β水平及Treg/CD4+T细胞比例明显升高(P<0.05);NP组、APN组胚胎吸收率及血清中脂联素、IL-17、TGF-β、IL-17/TGF-β水平及脾脏淋巴细胞中Th17、Treg细胞分群比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论重组脂联素治疗可能通过纠正Th17/Treg细胞失衡及相关细胞因子水平,改善SA模型小鼠的妊娠结局。

外周血白细胞计数与妊娠期糖尿病的相关性

目的探讨白细胞计数及中性粒细胞与妊娠期糖尿病(GDM)的相关性。方法回顾性选取郑州大学第二附属医院2017年1月至2018年1月期间孕周为37～42周定期行围产保健的316例单胎初产孕妇,将其分为妊娠期糖尿病组(GDM组)158例和正常妊娠组(即对照组)158例。比较两组孕妇中的白细胞计数(WBC×10~9)及中性粒细胞百分比(NEUT%)情况,并对WBC(×10~9)及NEUT(%)进行预测GDM患病的ROC曲线对比分析,探讨妊娠期WBC(×10~9)及NEUT(%)变化情况与GDM发生的相关性。结果对两组孕妇中WBC(×10~9)及NEUT(%)值进行比较得出,GDM组孕妇WBC(×10~9)及NEUT(%)值高于对照组,且WBC(×10~9)及NEUT(%)预测GDM患病的ROC曲线面积为0.677、0.589,均具有统计学意义(P<0.05),而GDM与WBC(×10~9)的相关系数为0.307,呈正相关,GDM与NEUT(%)相关系数为0.153,但因其相关系数<0.3,认为GDM与NEUT(%)无明显相关性。结论 WBC(×10~9)可以作为一项常用检测指标,评估孕妇罹患GDM的风险性,为及早发现围产保健孕妇GDM的发生提供一定参考。

Survivin基因-31C/G多态性与子痫前期的相关性研究

目的:探讨Survivin基因-31C/G多态性和子痫前期的发病及其严重程度的相关性。方法:采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术以96例患有子痫前期的孕妇(其中轻度子痫前期52例,重度子痫前期44例)和110例在郑州大学第二附属医院、郑州市妇幼保健院进行产前检查并分娩的正常孕妇为研究对象,检测Survivin基因-31C/G多态性分布的基因型。结果:G等位基因型频率在子痫前期组高于对照组(P<0.05),G等位基因型频率在重度子痫前期组高于轻度子痫前期组(P<0.05)。结论:Survivin基因-31C/G多态性的G等位基因可能是中原地区汉族妇女发生子痫前期的遗传危险因素,并与病情严重程度有关。

伪狂犬病毒SL株gL基因的克隆、原核表达、抗体制备及亚细胞定位

通过PCR从伪狂犬病毒(PRV)SL株基因组中扩增出gL基因,将产物亚克隆至原核表达载体pET-32a(+)中,测序验证后将重组质粒转化至E.coli Rosseta,进行IPTG诱导表达。SDS-PAGE检测显示诱导表达蛋白约33 000,同预期大小相符,通过Western blot检测可知重组蛋白具有较好的抗原性。使用Ni 2+-Agarose His标签蛋白纯化试剂盒纯化重组蛋白,纯化后的重组蛋白免疫家兔制备多克隆抗体,经琼脂扩散试验测定,效价达1∶8。通过免疫荧光技术进行PRV gL亚细胞定位检测,结果显示最早可在感染后4h的细胞质中检测到特异性荧光,并随着PRV的复制gL表达增加。试验结果为进一步研究gL基因的功能和PRV的致病机理提供了重要依据。

人工感染猪流行性腹泻病毒的哺乳仔猪的病理学观察

为观察猪流行性腹泻病毒(PEDV)感染的哺乳仔猪的病理学变化,选取60头健康的哺乳仔猪,随机均分为A、B两组。A组仔猪经口接种PEDV细胞毒,B组作为空白对照,观察不同发病阶段A组仔猪的临床症状、剖检变化、组织切片的病理学变化。结果显示,A组仔猪潜伏期表现比较正常,仅肠道有轻微的卡他性炎症,肠道上皮细胞肿胀。前驱期仔猪出现呕吐和腹泻,肠道和淋巴结充血严重。典型症状期仔猪出现严重的腹泻、脱水、粪便恶臭等猪流行性腹泻的典型症状,严重的陆续死亡;个别组织器官出现严重病变,如肠上皮细胞脱落、肺泡融合、脾白髓萎缩、肾出现蛋白管型等。耐过仔猪生长缓慢。结果表明,A组仔猪出现典型的猪流行性腹泻的病理学变化,且病理演变过程具有一定的规律性,其致病机理可能与对肠道、肺的组织嗜性和对淋巴结、脾的免疫抑制性有关。

猪嵴病毒和猪星状病毒及猪环曲病毒多重RT-PCR检测方法的建立及临床应用

根据猪嵴病毒(PKV)3D基因、猪星状病毒(PAstV)ORF2基因和猪环曲病毒(PToV)M基因的序列,设计了3对引物,通过反应体系和条件的优化,首次建立了检测猪嵴病毒、猪星状病毒和猪环曲病毒的多重RT-PCR。本研究建立的多重RT-PCR对PKV、PAstV和PToV的最低检出限分别为1.51×104、1.19×103、1.26×104 copies/μL,同时也具有较强的特异性和良好的重复性。用该方法检测了40份来自四川省部分猪场的仔猪腹泻病样。结果显示,PKV、PAstV、PToV的阳性检出率分别为75.0%、30.0%和22.5%。与单一RT-PCR检测结果一致。本方法的建立对PKV、PAstV、PToV的鉴别诊断和混合感染检测具有重要的应用价值。

猪伪狂犬病毒Fa株侵染对PK-15细胞microRNAs表达谱的影响

【目的】分析猪伪狂犬病毒Fa株(PRV-Fa)侵染对猪肾传代细胞PK-15 microRNAs(miRNAs)表达谱的影响。【方法】利用Illumina高通量测序技术,鉴定感染和非感染PRV-Fa的PK-15细胞的miRNAs;筛选并利用实时荧光定量RT-PCR(RT-q PCR)验证差异表达miRNAs;对差异miRNAs进行靶基因预测和Gene ontology(GO)分析。【结果】在感染和未感染PK-15细胞中分别检测到384个和405个miRNAs,其中感染PRV-Fa后差异表达的miRNAs共127个(60个上调,67个下调)。荧光定量结果显示差异miRNAs的表达趋势与高通量测序结果一致。GO分析显示,miRNAs广泛参与信号传导、细胞代谢、免疫反应、基因表达等生物学进程,其中miR-10b、miR-16、miR-18a、miR-19b、miR-20a、miR-145-5p、miR-146a、miR-181a、miR-499-5p等miRNAs与免疫相关。在靶基因调控网络图中,ssc-miR-30a-5p与ssc-miR-30d处于关键位置。研究鉴定出5个新的病毒编码miRNAs,其中PRV-miR-LLT2与PRV-miR-LLT4靶向PRV早期蛋白基因EPO。【结论】伪狂犬病毒Fa株感染对PK-15细胞编码miRNAs有显著影响。

副猪嗜血杆菌毒力菌株和猪支气管败血波氏杆菌毒力菌株双重PCR检测方法的建立及应用

为建立一种能同时检测副猪嗜血杆菌(Hps)毒力菌株和猪支气管败血波氏杆菌(Bb)毒力菌株快速、准确的诊断方法,依据毒力血清型Hps OMP P2和Bb DNT基因序列分别设计合成引物,通过优化反应条件,成功建立了同时检测Hps毒力菌株和Bb毒力菌株的双重PCR方法。本试验建立的双重PCR法特异性强,重复性好,最低可检测核酸质量浓度分别达到1.79×10-3 g/L及8.3×10-3 g/L。使用该方法对来自四川地区部分猪场的36份猪呼吸综合征(PRDC)病料进行检测,结果检出率分别是33.33%和5.56%,与单一PCR结果一致,但高于细菌分离鉴定的准确率。试验结果表明该方法具有临床实用性,为四川地区Hps和Bb的诊断和预防奠定基础。