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烟草新驱动蛋白基因NtTKR原核表达载体的构建、诱导表达及蛋白纯化
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作者 乔慧聪 任向波 +1 位作者 吴秀丽 李芬 《江苏农业科学》 北大核心 2017年第14期24-26,共3页
通过对烟草驱动蛋白家族新成员Nt Tkr尾部的酵母双杂交筛选,得到多个与Nt Tkr互作的候选蛋白。为进一步验证NtTkr与候选蛋白之间的相互作用,以p GBKT7-Nt Tkr质粒为模板,PCR扩增烟草NtTKR全长,将其克隆入原核表达载体pMXB10,重组质粒pMX... 通过对烟草驱动蛋白家族新成员Nt Tkr尾部的酵母双杂交筛选,得到多个与Nt Tkr互作的候选蛋白。为进一步验证NtTkr与候选蛋白之间的相互作用,以p GBKT7-Nt Tkr质粒为模板,PCR扩增烟草NtTKR全长,将其克隆入原核表达载体pMXB10,重组质粒pMXB10-NtTkr-3582经生物公司测序,结果正确。将其转化为BL21(DE3),IPTG诱导其表达目的蛋白,经几丁质法纯化及SDS-PAGE检测,结果表明笔者得到了高纯度的目的蛋白。该试验为进一步运用Pull Down确定Nt Tkr与候选蛋白之间的体外互作及深入研究该蛋白的其他生物学功能奠定了基础。 展开更多
关键词 烟草 新驱动蛋白 NtTkr 诱导表达 纯化
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浅谈基于云存储技术的视频监控系统在油田生产中的应用 被引量:7
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作者 郭向前 乔慧聪 《云南化工》 CAS 2017年第12期33-33,49,共2页
石化企业是支柱产业,对中国经济发展具有重要的现实意义。大型油田管理,通过实现数字网络视频监控系统,智能数字化生产,不仅能大大提高石油生产的效率,而且可以带来巨大的经济效益。
关键词 数字化 视频监控系统 油田生产建设
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烟草H_2A的序列分析、原核表达载体构建及诱导表达 被引量:1
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作者 童文艳 徐林娜 +1 位作者 乔慧聪 李芬 《安徽农业科学》 CAS 2018年第10期94-96,108,共4页
[目的]对H2A进行序列分析及蛋白结构域分析,并将其克隆入p GEX4T-1原核表达载体进行诱导表达。[方法]以p GADT7-Rec-H2A质粒为模板,通过PCR扩增烟草H2A(3~140 Aa),将其插入原核表达载体p GEX-4T-1中,并将重组载体转入BL21(DE3)中,诱导... [目的]对H2A进行序列分析及蛋白结构域分析,并将其克隆入p GEX4T-1原核表达载体进行诱导表达。[方法]以p GADT7-Rec-H2A质粒为模板,通过PCR扩增烟草H2A(3~140 Aa),将其插入原核表达载体p GEX-4T-1中,并将重组载体转入BL21(DE3)中,诱导其表达。[结果]构建了烟草H2A基因全长和p GEX4T-1载体大片段连接的融合表达载体,并成功地诱导其表达。[结论]该研究为运用Pull Down确定Nt Tkr与候选蛋白之间的体外互作进而确定Nt Tkr与蛋白互作的关键结构域奠定了试验基础。 展开更多
关键词 烟草H2A 序列分析 载体构建 诱导表达
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烟草NtTkr尾部T1084缺失和替换突变原核表达载体的构建及诱导表达
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作者 童文艳 胡孟可 +2 位作者 徐林娜 乔慧聪 李芬 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2019年第3期38-42,共5页
已知烟草驱动家族新成员NtTkr尾部第3个卷曲螺旋(Coiled-coil,CC3)第1084位苏氨酸(T1084)对靶蛋白的结合至关重要,通过对NtTkr尾部的酵母双杂交筛选得到多个与Ntkr互作的候选蛋白。为确定T1084缺失(T1084d)或替换(T1084A)突变对NtTkr与... 已知烟草驱动家族新成员NtTkr尾部第3个卷曲螺旋(Coiled-coil,CC3)第1084位苏氨酸(T1084)对靶蛋白的结合至关重要,通过对NtTkr尾部的酵母双杂交筛选得到多个与Ntkr互作的候选蛋白。为确定T1084缺失(T1084d)或替换(T1084A)突变对NtTkr与这些候选蛋白体外互作的重要性,首先以pBI121-NtTkr为模板,通过重叠延伸PCR扩增得到烟草NtTkr尾部T1084d、T1084A片段并将其克隆入质粒pUC19,经蓝白斑筛选、SmaⅠ-BamHⅠ双酶切鉴定后送去测序,获得正确的T1084缺失和替换的NtTkr尾部;然后将重组的pUC19-T1084d、pUC19-T1084A与pMXB10进行NotⅠ-NdeⅠ双酶切,回收目的片段和载体片段并连接,连接产物转化大肠杆菌感受态DH5α,筛选得到重组子,进行NotⅠ-NdeⅠ双酶切鉴定,最终成功构建pMXB10-NtTkr-T1084A和pMXB10-NtTkr-T1084d原核表达载体;最后将原核表达载体pMXB10-T1084d和pMXB10-T1084A转入BL21(DE3)中,分别经0.05,0.06mmol/LIPTG浓度诱导,12%SDS-PAGE电泳检测蛋白质表达情况,结果证明获得了NtTkr-T1084d-1317和NtTkr-T1084A-1320的成功表达,且IPTG浓度大于0.06mmol/L时,均可高效表达约77ku的NtTkr-T1084A-1320和76.2ku的NtTkr-T1084d-1317蛋白量。 展开更多
关键词 烟草 NtTkR 缺失和替换突变 载体构建 诱导表达
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