奶牛乳腺先天防御机理的研究进展

综述了近年来奶牛乳腺先天防御机理的研究进展,分析了奶牛的固有防御机理、诱导型防御机理和细胞征募防御机理,对了解和预防奶牛乳腺炎的发生具有一定的参考和应用价值。

乳汁中RNA提取方法的建立

用牛初乳作为试验材料,进行乳汁体细胞的提取及RNA的提取与扩增。结果显示:牛初乳中含有大量的体细胞(SCC约为20万/ml,活力约为60%),从体细胞中提取RNA,所提取的RNA完整性和纯度可以用来合成cDNA,管家基因GAPDH扩增条带正确,表明可以用合成的cDNA作为模板进行其它基因的扩增,为奶牛在基因工程方面的研究提供分子生物学技术平台。

绵羊Granulysin基因的克隆与序列分析

基于电子延伸序列,设计1对克隆引物,从绵羊回肠黏膜组织中提取总RNA,进行RT-PCR,将PCR产物与pMD19-T载体连接后转化E.coliJM109感受态细胞、检测阳性克隆、测序并进行序列分析。克隆的绵羊Granulysin基因与人、牛该基因的同源性分别为56.2%和87.2%,推导的氨基酸序列信号肽为1～22氨基酸,SapB结构域为64～138氨基酸,结构特征与人、牛的一致。结果提示,绵羊Granulysin基因克隆成功。

绵羊Gastorkine-1基因的克隆与序列分析

基于电子延伸序列，克隆并分析了绵羊Gastorkine—1基因。提取皱胃黏膜组织总RNA，利用设计的引物进行RT-PCR，PCR产物与pMD19-T载体连接后转化E．coli JM109感受态细胞，检测阳性克隆并测序。克隆的绵羊Gastorkine—1基因长619bp，编码185个氨基酸，与人、小鼠、猪、牛的同源性分别为82．0％，48．8％，85．4％，96．9％，推测的氨基酸序列信号肽为1～20aa，BRICHOS结构域为54～150aa，结构特征与人、小鼠、猪、牛的Gastorkine-1相一致。

CCL25/CCR9和CCL28/CCR10在仔猪胃肠道组织中的表达

【研究目的】旨在探讨CCL25/CCR9、CCL28/CCR10在仔猪胃肠道中的表达规律。【方法】通过常规RT-PCR检测CCL25/CCR9、CCL28/CCR10分别在15日龄和30日龄仔猪胃肠道不同部位的表达。【结果】CCL25mRNA主要在小肠表达,而CCR9mRNA在小肠、大肠及胃中均表达,且表达量较高;CCL28mRNA和CCR10mRNA在小肠、大肠及胃中均表达,并以后段肠道的表达量较高。CCL25/CCR9、CCL28/CCR10在30日龄仔猪胃肠道中的表达高于15日龄仔猪。【结论】初步得出CCL25/CCR9、CCL28/CCR10在仔猪胃肠道中的表达规律,并为进一步揭示在其它组织中的表达及它们的生物学作用奠定了基础。

猪链球菌病的诊断与防治

猪链球菌病（Swine Streptococcus）是由多种溶血性链球菌引起的一种急性、发热性人兽共患传染病。主要表现为发热和严重的毒血症状。该病一年四季均可发生，但以夏秋季较为多见。发病时传播迅速，病猪体温骤然升高到41℃以上，病死率较高，对养猪业的发展有较大的威胁。现将一猪链球菌病例诊治情况汇报如下。

绵羊尿鸟苷素基因的克隆与序列分析

克隆并分析了绵羊尿鸟苷素(uroguanylin)基因。根据同源序列克隆原理设计一对克隆引物,对绵羊十二指肠黏膜组织提取的总RNA进行RT-PCR,将PCR产物克隆、测序。绵羊尿鸟苷素基因与人、小鼠和猪的同源性分别为83%,77%和88%,推测的氨基酸构成一个模域。克隆了绵羊尿鸟苷素基因片断,为进一步研究绵羊尿鸟苷素基因的生物学功能提供了理论基础。

绵羊黏膜趋化因子CCL28基因的克隆、序列分析与原核表达

利用同源序列克隆原理设计1对克隆引物,从绵羊结肠黏膜组织提取mRNA,通过RT-PCR获得CCL28基因,将PCR产物克隆、测序,并进行序列分析;再根据克隆的序列设计1对表达引物,用PCR法从重组克隆载体中扩增出含BamHⅠ/XhoⅠ酶切位点的CCL28片段,双酶切后亚克隆至pGEX-4T-1载体,构建重组原核表达载体pGEX-CCL28,转化宿主菌E.coliBL21(DE3),经IPTG诱导进行表达,SDS-PAGE鉴定。克隆的绵羊CCL28基因包含完整的开放阅读框,克隆片段长444 bp,ORF为387 bp,编码129个氨基酸,与人、小鼠、猪、牛该基因的同源性分别为76.4%、61.4%、84.3%和92.9%,推测的氨基酸序列与人、小鼠、猪、牛的同源性分别为76%、63%、84%和93%,表达的融合蛋白分子量约为39 ku,并以包涵体形式存在。为下一步研究绵羊CCL28的生物学功能奠定基础。

绵羊鸟苷素基因的克隆与序列分析

基于电子延伸序列．本试验克隆并分析了绵羊鸟苷素基因．从绵羊十二指肠黏膜组织中提取总RNA·利用设计的引物进行RT-PCR扩增，PCR产物与pMD19-T载体连接后转化到E．coli JM109感受态细胞，检测阳性克隆并测序．结果表明：克隆的绵羊鸟苷素基因长341bp，编码109个氨基酸．与人、豚鼠、小鼠和牛的同源性分别为77％、75％、47％和94％．推测的氨基酸序列信号肽为l～16aa．整个氨基酸构成一个模域．编码鸟苷素前体蛋白．

绵羊regakine-1基因的克隆与序列分析

【研究目的】克隆并分析绵羊regakine-1基因;【方法】肠系膜淋巴结组织提取总RNA,利用设计的引物进行RT-PCR,PCR产物与pMD-19T载体连接后转化JM109感受态细胞,筛选阳性克隆、测序,并进行序列分析;【结果】克隆的绵羊regakine-1基因与牛的同源性为91%,推测的氨基酸序列信号肽为1￣21aa,SCY结构域为29￣87aa,结构特征与牛的相一致。【结论】克隆了绵羊regakine-1基因的ORF,并注册GenBank(AccessionEF617337)。

His6免疫原的制备及免疫小鼠抗体效价检测

采用EDC一步法将His6多肽分别与匙孔血蓝蛋白(KLH)和牛血清白蛋白(BSA)偶联,制备两种人工结合抗原KLH-His6和BSA-His6。将制备的KLH-His6作为免疫原,皮下分5点注射免疫6只健康6周龄雌性Balb/c小鼠;首次免疫取KLH-His6(50μg/只)与氟氏完全佐剂(FCA)充分乳化,每只免疫200μL,以后每间隔两周,同法进行第2,3次免疫,用氟氏不完全佐剂(FIA)乳化。每次免疫8 d后尾部采血,以BSA-His6为包被抗原检测抗His6抗体。结果表明,成功制备了His6免疫原,并免疫了小鼠;间接ELISA检测不同时期小鼠抗体效价最高达到1∶8 000,免疫小鼠的抗体效价水平整体呈上升趋势,为His6单隆抗体的制备奠定了基础。

乳脂肪球膜主要膜蛋白功能的研究进展

嗜乳脂蛋白(butyrophilin,Btn)、黄嘌呤氧化还原酶(XOR)和乳脂肪球表面生长因子8(MFG-E8)是乳脂肪球膜的3种主要膜蛋白。最近的研究发现,Btn和XOR在乳脂肪的分泌阶段是必不可少的。而MFG-E8在乳腺泌乳晚期及衰退期,对清除凋亡的乳腺上皮细胞起着重要作用。

猪FcRn基因及其剪接变体序列的克隆与序列分析

克隆并分析猪FcRn基因;十二指肠组织提取总RNA,利用设计的引物进行RT-PCR,PCR产物与pMD-19T载体连接后转化JM109感受态细胞,筛选阳性克隆并测序;FcRn阳性克隆两条序列在NCBI上比较,显示序列同猪FcRn(AY740682.1)同源性都为99%。克隆了猪FcRn基因的序列和其剪接变体序列,其剪接变体序列已在GenBank上注册(Accession.EU852582)

地高辛标记探针原位杂交组织化学技术及其应用

地高辛标记原位杂交组织化学技术作为一种高效、方便、安全的原位杂交方法被广泛地应用在生物学研究的各个领域,本文论述了地高辛标记原位杂交技术的原理、步骤和应用。

鸡Muslin cDNA克隆与序列分析

基于电子延伸序列,本试验克隆并分析了鸡Muslin基因。肌肉组织提取总RNA,利用设计的引物进行RT-PCR,PCR产物与pMD19-T连接后转化E.coliDH5α,检测阳性克隆并测序;克隆的Musclin基因与人、大鼠、小鼠同源性分别为74%,73%,70%,推测的氨基酸序列同源性分别为58%,54%,50%,氨基酸序列含有"KKKR"结构和与小鼠ANP,BNP,CNP蛋白的同源性区域。试验成功克隆了鸡Musclin基因并注册GenBank(EF551041)。

绵羊Granulysin在大肠杆菌中的表达与鉴定

根据GenBank中公布的绵羊Granulysin基因序列设计引物,用PCR法从重组质粒中扩增出含BamHI/XhoI酶切位点的Granulysin片段,双酶切后克隆至pGEX-4T-1载体,构建重组原核表达质粒pGEX-Granulysin,转化宿主菌大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导进行表达,SDS-PAGE鉴定,表达的融合蛋白分子量约为41 kDa,并以包含体形式存在。

胆囊ERCDC的X线表现及临床应用价值初探

目的 采用胆囊双重造影术 ,初步探讨胆囊黏膜的X线表现及其临床应用价值。方法 在ERCP的基础上 ,6 6例疑胆系疾病组使用阳性 (泛影葡胺 )和阴性 (空气 )两种造影剂 ,进行胆囊双重造影。 5例动物实验组采用泛影葡胺或硫酸钡与空气进行胆囊双重造影。结果 5例动物实验显示正常胆囊黏膜呈平坦型 ,囊壁光滑、均匀 ,壁厚 0 .3～ 0 .5mm。病例组 6 6例中 ,胆囊黏膜表现为平坦状 45例 ,网格状 7例 ,条纹状 5例 ,点状 3例 ,囊壁增厚约 2mm ,且厚薄不均 37例。结论 胆囊双重造影可良好显示胆囊的形态与结构 。