基于OBE理念“临床微生物学与检验”数字化教学改革

信息技术的创新和发展引领了教育教学改革新浪潮。丰富的教学资源、多样的教学形式,已经成为推动教育数字化转型发展、改革创新的重要动力。目前,各高校各学科纷纷对教学模式的数字化转型做出积极的探索。本研究基于OBE理念,开展“两线四点”数字化课程教学改革模式,并在“临床微生物学与检验”课程教学和评价中进行实践研究。研究从人才培养标准和学生学情出发,综合制定课程教学目标和计划,采用雨课堂、小规模限制性在线课程(Small Private Online Course,SPOC)、虚拟仿真实验、无纸化考核等丰富多样的数字化教学方法,同时引入问题式学习(Problem-based Learning,PBL)、课程思政等多种形式的教学改革,让学生尽可能地全方位参与到课程学习中;同时制定相应的评价方案并及时反馈于教学,以推动课程教学的良性运行,努力培养具备扎实的理论知识、实践技能、终生学习及创新意识的应用型医学检验技术人才。

基于免疫信息学的结核分枝杆菌多阶段多表位疫苗构建

目的构建一种包含结核分枝杆菌(MTB)早期分泌蛋白和潜伏感染相关抗原表位的多阶段多表位疫苗。方法运用免疫信息学方法预测12个MTB蛋白的B细胞、细胞毒性T淋巴细胞(CTL)和辅助性T细胞(HTL)表位,从中筛选具有抗原性且无细胞毒性和致敏性的表位构建多表位疫苗,并进行理化性质分析、二级结构预测,3D建模,模型精制、质量验证,与Toll样受体4(TLR4)受体分子对接,最后进行免疫模拟。结果MTB表位疫苗共包含12个B细胞表位、11个CTL表位和12个HTL表位,具有灵活、稳定的球形构象,热稳定性和亲水性好,可与TLR4稳定相互作用。免疫模拟表明该疫苗能够同时激发有效的细胞和体液免疫应答。结论提出了一种基于免疫信息学技术的多阶段多表位MTB疫苗构建策略,该疫苗可能对活动期和潜伏性MTB感染有预防作用。

结核分枝杆菌α晶体蛋白(Rv2031c)的T、B细胞抗原表位在线分析

目的预测结核分枝杆菌潜伏感染相关蛋白α晶体蛋白(Rv2031c)的抗原表位。方法 BLAST在线分析Rv2031c与人类蛋白的同源性;利用DNAStar软件包中的Protean模块预测其B细胞和T细胞抗原表位;RANKPEP和SYPEPITHI在线预测辅助性T(Th)细胞抗原表位;SYFPEPI、BIMAS和Net CTL方法在线预测细胞毒性T淋巴细胞(CTL)表位。结果 Rv2031c与人类蛋白同源性较低,有8个潜在的B细胞抗原表位,7个候选Th细胞抗原表位和3个候选CTL表位。结论 Rv2031c含有较多潜在的人类B细胞、Th细胞和CTL抗原表位,可作为新的结核病疫苗研发的候选靶蛋白。

信息化技术平台在临床检验仪器学教学中的应用

临床检验仪器学是医学检验技术专业的必修课程,涉及多学科领域,加之检验仪器发展迅速,传统的理论和实践教学已无法满足本科教学的需求。将雨课堂和3D虚拟实验平台等信息化技术平台运用到临床检验仪器学的教学实践中,探索其在临床检验仪器学教学中的可行性、优势及存在的问题,并提出相应对策。

临床分离肠球菌耐药性和耐药基因分布及其相关性研究

目的:研究临床分离肠球菌的耐药性、耐药基因分布及其相关性。方法:采用Vitek2 compact全自动细菌鉴定及药敏分析系统进行临床分离肠球菌的鉴定和药敏试验;提取细菌基因组DNA,通过PCR法检测14种肠球菌耐药相关基因;采用SPSS 25.0软件对肠球菌耐药性和耐药基因相关性进行统计学分析。结果:临床分离的89株肠球菌中包括49株屎肠球菌、28株粪肠球菌、8株鹑鸡肠球菌、3株铅黄肠球菌和1株棉子糖肠球菌。药敏结果显示屎肠球菌对多数抗菌药物的耐药性较粪肠球菌高,未对万古霉素耐药的屎肠球菌和粪肠球菌。所有菌株对替加环素、替考拉宁、利奈唑胺均表现为敏感。耐药基因检出率从高到低依次为acc(6′aph 2″)、aph(3′)-Ⅲ、emeA、ermB、ant(4,4″)、ant(2″)-1、ant(6)-1、TEM、tetM、vanC1、vanC2/3、vanB。未检出meA、vanA耐药基因,未检出带有vanB、vanC1、vanC2/3耐药基因的屎肠球菌和粪肠球菌。vanA-x vanB、vanC1、vanC2/3基因与万古霉素耐药以及ermB基因与红霉素耐药有显著相关性。氨基糖苷类耐药相关基因acc(6′)/aph(2″)aph(3)-Ⅲ、ant(6)-1、ant(2″)-1、ant(4,4″)与高水平链霉素、高水平庆大霉素耐药有相关性。结论:万古霉素、替加环素、替考拉宁和利奈唑胺可作为耐药肠球菌的有效治疗药物。万古霉素类、红霉素类、氨基糖苷类耐药相关基因与相应抗生素耐药性之间有相关性。

埃博拉病毒感染的实验室诊断方法研究进展

埃博拉病毒病是由埃博拉病毒引起的一种急性出血性传染病,具有极高的传染性,病死率高达90%,世界卫生组织已将埃博拉病毒列为对人类危害最严重的病毒之一,目前虽有一个被美国食品和药物管理局(FDA)批准用于紧急治疗的实验药物TKM-Ebola,但尚无批准上市的用于预防埃博拉病毒的疫苗。建立快速、准确、简便的实验室检测方法对及时进行临床诊断救治、开展流行病学调查并最终控制其传播流行具有重要意义。本文综述埃博拉病毒实验室检测方法的原理、应用及进展,介绍病毒分离、电子显微镜观察、逆转录聚合酶链反应法、抗原检测试验、抗体酶联免疫吸附试验、血清中和试验及其他检测方法。

结核分枝杆菌基因编辑的研究进展

结核分枝杆菌是结核病的病原菌,利用基因编辑技术研究结核分枝杆菌未知基因功能,对于发现新的抗结核药物靶标、改进卡介苗或开发新疫苗具有重要的研究意义。本文就基因编辑技术在结核分枝杆菌研究中的应用作一综述。

DNA氧化损伤标志物8-OHdG检测方法及其生物学应用

活性氧自由基（ROS）是一类具有强氧化作用的化学活性物质,广泛参与机体的生理与病理过程。机体在细胞正常新陈代谢过程中,在外源性化学致癌物质和辐照（X射线,γ-射线和紫外线）条件下可产生ROS,导致多种形式的DNA损伤：如碱基修饰、链内/间交联、链断裂、碱基丢失等。通常情况下,机体内一定数量自由基的存在是生物体维持正常生理功能所必需的.

基于免疫信息学技术的结核分枝杆菌多表位疫苗构建

目的筛选具有抗原表位可能性的结核分枝杆菌高活性结合肽(HABPs),构建基于HABPs的多表位疫苗。方法通过免疫信息学方法预测HABPs的保护性抗原可能性、细胞毒性、致敏性及潜在B细胞和T细胞表位;将筛选出的HABPs与佐剂霍乱毒素B亚单位连接,构建多表位疫苗,并对其二级结构和理化性质进行分析;采用I-TASSER服务器进行多表位疫苗三级结构同源建模,优化的模型质量通过PROCHECK、ERRAT及ProSA-web软件进行验证;使用PatchDock软件进行多表位疫苗与TLR-4的分子对接;对疫苗进行密码子优化、在线克隆和免疫模拟。结果共筛选出32条HABPs序列,构建的多表位疫苗包含881个氨基酸残基,二级结构由43.93%的α螺旋、13.62%的β折叠和42.45%的无规则卷曲组成,不稳定性指数(Ⅱ)、脂肪族指数和亲水性平均值分别为45.34、84.09和-0.009,表明该疫苗具有灵活、稳定的球形构象和亲水结构。Ramachandran图中位于核心区域和允许区的氨基酸比例大于90%,ERRAT评估整体质量因子值为74.39,Z值为-5.94,表明3D模型的质量整体较好。分子对接结果表明疫苗可与TLR-4稳定相互作用。经过密码子优化的疫苗可在大肠埃希菌中高效表达。免疫模拟显示,当反复暴露于多表位疫苗抗原时,机体的B细胞和T细胞免疫反应均得到增强。此外,多表位疫苗还可诱导高水平细胞因子的分泌。结论利用免疫信息学工具构建的基于HABPs的多表位疫苗含有B、T细胞表位,有望同时激发机体体液免疫和细胞免疫,具有良好应用前景,但其实际免疫效果还需进一步证实。

抗MRSA-PBP2a卵黄抗体的制备及酶联寡聚核苷酸吸附试验的建立

目的制备耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)青霉素结合蛋白2a(PBP2a)抗原的卵黄抗体IgY,建立检测MRSA的酶联寡聚核苷酸吸附试验(ELONA)方法。方法用大肠埃希菌原核表达并纯化PBP2a,采用胸部肌肉多点注射方式免疫产蛋母鸡,水稀释法粗提IgY,BCA法测定蛋白浓度,Western blot分析其特异性;以IgY抗体为捕获分子,以生物素标记的PBP2a特异性适配体为检测分子,建立检测MRSA的ELONA方法;对IgY包被量、生物素标记适配体用量及HRP标记链霉亲和素稀释度进行优化,测定该方法的灵敏度、特异性和重复性。结果成功表达和纯化PBP2a蛋白,Western blot显示IgY抗体能特异识别PBP2a蛋白。建立了检测MRSA的ELONA方法,其最佳包被用IgY稀释度为1∶1 600,生物素标记适配体用量为400nmol/L,HRP标记链霉亲和素稀释度为1∶2 000。优化的ELO-NA对MRSA的检测限为2.87×10~2 CFU/ml;重复性试验的变异系数为4.7%。用该方法检测34株临床分离的金黄色葡萄球菌,与梅里埃VITEK2Compact全自动细菌鉴定及药敏分析系统分析结果一致性为100%。结论制备的抗MRSA PBP2a卵黄抗体具有较高特异性,基于该抗体建立的ELONA方法灵敏、特异、重复性好,可用于MRSA PBP2a的检测。

结核分枝杆菌Rv2029c蛋白抗原表位预测及氨基酸变异分析

目的预测结核分枝杆菌潜伏感染相关蛋白Rv2029c的B/T细胞抗原表位,分析抗原位点的氨基酸变异。方法 BLAST在线分析Rv2029c与人类蛋白同源性,利用DNAstar软件包中的Protean软件预测Rv2029c潜在B/T细胞抗原表位,通过BioEdit软件比对NCBI数据库中所有结核分枝杆菌复合群Rv2029c氨基酸序列,找出变异位点。结果 Rv2029c与人类蛋白同源性较低。预测该蛋白共含有12个潜在B细胞抗原表位,分别位于5-13、32-49、85-88、97-102、106-113、147-161、165-172、178-183、220-227、262-264、318-326、334-339位氨基酸;含有6个T细胞表位数,分别位于23-36、53-66、135-170、207-223、271-289、307-318位氨基酸。除136和221位氨基酸外,不同地区来源的结核杆菌分离株Rv2029c蛋白氨基酸序列较少发生变异。结论结核分枝杆菌Rv2029c是一个B细胞抗原表位占优势的蛋白抗原,T细胞表位略少,且氨基酸序列较为保守,可作为结核监测、治疗、预防的新靶点。