不同配比基质对草莓扦插苗生长的影响

为筛选适合培育草莓扦插苗的基质配方,本研究以草莓品种天使8号为试验材料,通过测定不同配比基质的理化指标及草莓扦插苗的生长指标,分析不同基质对草莓扦插苗生长的影响。结果表明,不同配比基质的总孔隙度、持水孔隙度、通气孔隙度存在差异,并且不同配比基质对草莓扦插苗生长的影响不同。其中椰糠∶草炭∶珍珠岩=4∶1∶1(重量比)为最佳基质配比,该配比基质的容重、总孔隙度、持水孔隙度较高。使用该基质培育的草莓扦插苗的叶柄粗、株高、茎粗、叶柄长、叶长和叶宽较大,地下部鲜重和地下部干重较大,同时草莓扦插苗气孔导度、胞间CO 2浓度、蒸腾速率较高。本研究结果为草莓穴盘扦插育苗的基质配置提供了参考。

绿色草莓再生体系的建立

建立高效、稳定的绿色草莓再生体系是构建其遗传转化体系的基础。本研究以绿色草莓匍匐茎茎尖为外植体,置于不同培养基中进行初代培养获得试管苗。在含有不同配比植物生长调节剂的培养基中对叶龄为30 d的试管苗叶盘进行脱分化处理。以叶盘诱导产生的愈伤组织为试验材料,探究不同植物生长调节剂对愈伤组织产生不定芽的影响。结果表明,最适用于绿色草莓初代培养的培养基是MS+0.2 mg/L 6-苄氨基嘌呤(6-BA)+0.2 mg/L赤霉素(GA 3),在此培养基中绿色草莓离体茎尖成活率最高,生长状况最好;诱导叶盘脱分化、愈伤组织再分化和诱导不定芽生根的适宜培养基分别是MS+1.5 mg/L 2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)+2.0 mg/L噻苯隆(TDZ)、1/2 MS+1.5 mg/L 6-BA+0.1 mg/L吲哚丁酸(IBA)和1/2 MS+0.2 mg/L IBA+0.1 mg/L吲哚乙酸(IAA),其出愈率、再分化率和生根率分别为100%、91.0%、100%。本研究建立了以绿色草莓匍匐茎茎尖为试验材料获得试管苗的组织快繁体系和以叶盘为外植体经脱分化、愈伤组织再分化2个阶段的再生体系,为建立其遗传转化体系奠定了技术基础。

李种质资源ISSR反应体系的建立

以5′-(AC)_9 A-3′为引物对牛心李(Prunus salicina cv.Niuxinli)ISSR(inter-simple sequence repeats)反应体系的优化研究表明,25μL ISSR反应体系中,Taq酶、Mg^(2+)、引物、模板DNA和dNTPs5种主要成分的最适浓度分别是:0.3U、1.5mmol/L、0.2μmol/L、20ng和0.16mmol/L。利用该优化体系,以5′-(AC)_9 T-3′为引物,构建了中国李18个品种的ISSR指纹图谱,该引物可将这些品种完全区别开来;以5′-(AC)_9 C-3′为引物,构建了李属6类种质资源的ISSR指纹图谱,该引物区分率为100％。

中国李RAPD的优化反应体系及其在品种鉴定中的应用

以5'-GACCGCTTGT-3'为随机引物,以奉化李(Prunussalicinacv.Fenghuali)为试材,对中国李RAPD反应体系进行了优化研究,结果表明:25μL反应体系中,TaqDNA聚合酶、Mg2+、引物、模板DNA和dNTPs5种主要成分的适宜浓度或用量分别是:1.0U、2.5mmol/L、20ng、40ng和0.2mmol/L。利用该优化反应体系,用10个随机引物,构建了5个中国李品种的RAPD指纹图谱;并以共有谱带率对这些品种遗传关系进行了分析,5个中国李品种的共有谱带率平均为33.2%,变异幅度为20.1%～44.9%。

中国李简单重复序列(SSR)反应体系的建立

探讨中国李品种美丽李(Prunus salicina ‘Beauty’)简单重复序列(simple sequence repeat，SSR)反应体系中5种主要成分浓度对反应产物的影响。结果表明，引物对中国李有通用性，25μ LSSR反应体系中，Taq DNA酶、Mg^2+、每个引物、模板DNA和dNTPs等5种成分的适宜浓度分别是：1．5U、2．0mmol·L^-1、0．8μmol·L^-1、30～40ng和0．16～0．24mmol·L^-1。

中国李基因组DNA提取方法的优化

3种常用的植物基因组DNA提取方法在中国李上的实验,结果表明:改良陈大明法提取的DNA纯度高,产率高。为满足植物样品较少时提取DNA的需要,将该法进一步优化的结果表明,不使用液氮研磨而是在低温条件下将组织捣碎的微量法同样提取出了产率高、纯度高的DNA,完全满足RAPD扩增的需要。裂解缓冲液中NaCl的浓度以1.1mol/L提取DNA的产率最高,且DNA的质量与其他浓度之间没有明显差异。

果树农艺性状基因的分子标记及其应用

总结了果树农艺性状基因标记策略和已获得的分子标记及其在果树上的应用。集团混合分离分析法(BSA)、平行芽变分析法(PSA)和已知信息捕捉法(KIH)是果树农艺性状基因标记筛选的主要方法。目前已获得了大量果树农艺性状基因的分子标记,这些标记是果树基因作图、图位克隆、分子辅助选择和种质资源鉴定等遗传研究与育种实践的有用工具。

砂梨果实ACC氧化酶cDNA克隆及其反义表达载体构建

利用RT-PCR和RACE技术从‘早生新水’砂梨成熟果实cDNA中克隆出ACC氧化酶基因保守片段及其5′和3′端,拼接后获得砂梨果实ACC氧化酶cDNA全长。该cDNA全长1225bp,将其命名为Pyp-ACO,GenBank登录号为EF451060。Pyp-ACO核苷酸序列有一个945bp的开放读码框,5′端非翻译区为63bp,3′端非翻译区为217bp,与西洋梨和苹果的编码区核苷酸序列有较高的同源性,分别为98.3%和98.1%。Pyp-ACO推导编码314个氨基酸,该序列具备非血红素二价铁离子依赖型的氧化/加氧酶类的12个保守氨基酸和催化活性所需的3个氨基酸。将Pyp-ACO编码区序列反向插入pYPX145载体,构建了由双35S启动子所控制的双元表达载体,同时已成功将表达载体导入根癌农杆菌菌株LBA4404,为耐贮藏转基因梨选育奠定了基础。

CO_2气肥对日光温室油桃光合作用和果实品质的影响

以早红宝石为试验材料研究了施用CO2 气肥对日光温室油桃光合作用和果实品质的影响 ,结果表明 :施用CO2 气肥 ,油桃的光饱和点由 12 0 0 μmol/ (m2 ·s)下降到 6 0 0 μmol/ (m2 ·s) ,对弱光 [PAR <6 0 0 μmol/ (m2 ·s) ]的光能利用率提高 ,羧化效率也明显提高。施用CO2 气肥后日平均净光合速率为 5 .35 μmol/ (m2 ·s) ,比对照提高7.4 % ;叶片叶绿素a和叶绿素b含量分别比对照提高 2 5 .7%和 19.4 % ,平均单果重比对照提高 10 .8% ,可溶性固形物和维生素C的含量也有不同程度的改善。

氮、磷、钾对银杏叶黄酮含量与营养生长的效应

通过正交试验 ,利用营养液盆栽法研究了N ,P ,K 3种大量元素对银杏叶黄酮含量和营养生长的影响。结果表明 ,处理间叶黄酮含量差异极显著 ,3种元素对黄酮含量效应大小依次为N ,K ,P。营养液中N ,K ,P的质量浓度分别以 0 2 1,0 18,0 0 7g/L对提高叶黄酮含量的效果最优。银杏新梢的增粗生长 ,3种元素不同配比间存在极显著差异 ;N ,P对新梢粗生长的主效明显 ,营养液中N和P的质量浓度以 0 2 8g/L和 0

砂梨ACC合酶cDNA全长克隆及其反义与正义表达载体构建

为构建干扰砂梨(Pyrus pyrifolia Nakai)ACC合酶基因表达的遗传转化载体,利用RACE技术从'早生新水'成熟果实cDNA中克隆了ACC合酶的cDNA,该cDNA全长为1939bp,命名为Pyp-ACS,GenBank登录号为EF566865。Pyp-ACS核苷酸序列含有5′末端非翻译区109bp、1488bp完整的开放阅读框和3′末端非翻译区342bp(含25bp的Ploy+(A))。Pyp-ACS编码495个氨基酸,与白梨(Pyrus×bretschneideri Rehd.)、西洋梨(Pyrus communisL.)、中国李(Prunus salicina Lindl.)、桃(Prunus persica(L.)Batsch)、梅(Prunus mume Seib.et Zucc.)、苹果(Malus×domestica Borkh.)和柿(Diospyros kaki Thunb.)有较高的同源性。该氨基酸序列具备ACC合酶7个保守区和组成该酶活性中心的12个氨基酸残基,即SLSKDMGFPGLR,进一步验证了克隆的正确性。以pYPX145载体为基础,分别将Pyp-ACS编码区序列反向和正向插入相应位点构建反义和正义表达载体,并分别命名为pPyp-ACS(-)和pPyp-ACS(+),目的基因由双35S启动子所控制。分别将这2个表达载体导入根癌农杆菌菌株(Agrobacterium tumefaciens)EHA105,为耐贮藏转基因梨的遗传转化提供载体。

我国南方沙梨的栽培现状及其发展建议

本文在论述我国南方沙梨的栽培现状、分析沙梨在我国的生态适应性和比较部分产区气候因子的基础上，提出了在我国南方地区发展优良的早中熟沙梨品种，并采用简易式棚架栽培技术可以获得较好的经济效益，同时阐述了棚架式栽培的配套技术措施。

果梅幼树光合特性的研究

本文以细叶青为试材研究了光照强度、CO2浓度对果梅盆栽幼树净光合速率的影响和日变化规律，并比较了细叶青、软条红梅和南红三个主栽品种光合能力。结果表明：细叶青梅的光补偿点和光饱和点约为700umol·m^-2·s^-1和l0lumol·m^-2s^-1,CO2补偿点为1100uL·L^-1，CO2饱和点约为100uL·L^-1。正午12：00细叶青的Pn最强，“午休”现象不明显。三个品种中软条红梅的光合能力最强。同时分析了气孔导度、蒸腾作用、CO2浓度、温度等对果梅光合特性的影响。

梨EST-SSR标记的开发及其在梨品种遗传多样性分析中的应用评价

【目的】分析梨EST中SSR位点分布规律,开发梨EST-SSR引物,探讨EST-SSR用于梨品种遗传差异研究的可行性。【方法】从NCBI公共数据库中下载梨表达序列标签(expressed sequence tag,EST)1293条,利用MISA软件对其进行SSR位点查找,将符合条件的序列选出,利用Primer3.0Plus软件设计48对引物,通过非变性聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)研究这些SSR引物的PCR扩增特点,并对部分扩增产物克隆与测序,以验证其真实性。【结果】1293条梨的EST序列中含有SSR位点的序列为82条,SSR位点92个。二核苷酸、三核苷酸和六核苷酸重复是最主要的SSR类型,分别占48.91%、17.39%和17.39%。48对引物中有31对引物能扩增出理想的PCR产物,其中27对引物扩增条带具有多态性。同时发现11对引物中,有83.87%的片段具有相应的SSR位点。聚类结果表明,梨被明显地区分成东方梨和西方梨两大群,分类效果明显。【结论】梨EST-SSR标记开发效率较高,是梨SSR标记开发的重要措施,对于梨品种的鉴定与遗传多样性分析具有重要应用价值。

通过玻璃化超低温处理脱除草莓轻型黄边病毒(SMYEV)研究

以草莓品种明宝为材料,取茎尖做初代培养,继代扩繁5次后,取2mm左右的茎尖,利用玻璃化超低温技术对SMYEV进行脱除,并利用结合内标的多重RT-PCR技术对再生植株进行病毒检测。结果表明,在病毒脱除过程中,预培养蔗糖浓度为0.5mol/L,处理3d;装载处理为25℃,60min;玻璃化处理为0℃,120min;液氮处理60min后,进行40℃水浴2min,草莓茎尖的存活率为76%,而草莓轻型黄边病毒的脱除率为95%。只有通过液氮处理才可以脱除该病毒,液氮处理前的玻璃化处理脱毒率为0。利用超低温脱毒法可以简便有效地脱除SMYEV。

苹果基因组SSR位点分析与应用

【目的】通过对‘金冠’苹果基因组SSR位点的统计分析,为蔷薇科果树应用SSR分子标记进行高通量的遗传分析提供理论与实践基础。【方法】运用NCBI数据库中‘金冠’苹果基因组数据,分析其SSR位点分布情况,并根据SSR位点的搜索结果,设计68对引物(每条染色体设计4对),利用苹果品种对所设计引物进行应用性验证并利用梨杂交群体进行通用性检测。【结果】苹果基因组中SSR序列主要是完全重复型,17条染色体共存在163 426个SSR位点,平均每隔3.22 kb存在1个。单核苷酸至三核苷酸重复基序在染色体水平上分布较均匀,而四核苷酸至六核苷酸重复基序的分布差异较大。单核苷酸与二核苷酸重复基序所占比例最大,两者占基因组内SSR位点总数的91.67%,单核苷酸重复基序主要以A/T重复为主,二核苷酸的重复基序主要以AT/TA重复为主。在苹果品种中验证所设计的68对引物,有62对可以扩增出预期目的片段,37对存在扩增多态性。在梨杂交群体上应用所设计的68对引物,有40对具扩增目的片段,其中16对具扩增多态性。【结论】苹果基因组内SSR分布呈现一定的规律性,初步验证SSR位点在亲缘关系较近的物种间高度保守并可以通用,基于基因组数据发掘SSR位点用于后续的相关遗传研究具有可行性。