利用创新课题锻炼医学生科研思维和实践能力

为摸索适合新一代医学本科生的大学生科学创新课题及其引导方法,以自身指导的一项创新课题为平台进行研究。通过从实际生活密切相关的内容选题,查阅大量文献并设计实验方案,在实验过程中严格操作、启发多方位思维,到真实可靠地记录实验结果并引导学生进行分析推导结论,整个过程中力求从创新出发,让学生充分了解并实践科研工作的基本流程,掌握一定的实验技能,并通过该研究课题锻炼学生的科研思维和实践能力。

提高学习医学细胞生物学的主观能动性初探

医学细胞生物学由于内容偏重基础理论,信息量较大,增强学生学习兴趣有一定难度。因此,尝试在教学过程中提高学生的主观能动性以提高教学质量。文章将教学过程中的几点体会进行归纳,以便在后续教学实践中加以改进和完善。

特异性抑制伪狂犬病毒EP0基因表达的siRNA分子的合成与筛选

EP0基因是伪狂犬病毒(Pseudorabiesvirus,PRV)的早期基因,可能与病毒复制及潜伏感染等有关。为了筛选特异性抑制EP0基因表达的siRNA序列,本研究按照Ambion公司公布的siRNA分子设计原则,设计并合成了3个针对PRVEa株EP0基因的siRNA模板EP04、EP08和EP12,分别克隆到以CMV启动子的siRNA表达载体pSilencer4.1-CMVneo中,构建相应的重组表达质粒p4.1-EP04、p4.1-EP08和p4.1-EP12。同时,将EP0基因的编码区克隆到真核表达载体pEGFP-N3中,按照读码框架与EGFP基因的5’端融合,获得重组表达质粒pEP0-EGFP。将p4.1-EP04、p4.1-EP08、p4.1-EP12和阴性对照质粒p4.1-NK分别与pEP0-EGFP共转染IBRS-2细胞,荧光显微镜观察、流式细胞仪和半定量RT-PCR检测结果表明,三个siRNA分子均能不同程度地抑制EP0基因的表达,抑制效率从高到低依次为EP08、EP12和EP04;在进一步的病毒感染实验中也得到了与细胞转染模型一致的结论。这为深入研究EP0基因在PRV复制和潜伏感染中的作用奠定了基础。

特异性抑制伪狂犬病毒EPO基因表达的siRNA分子的合成与筛选

EPO基因是伪狂犬病毒(Pseudorabiesvirus,PRV)的早期基因,可能与病毒复制及潜伏感染等有关。为了筛选特异性抑制EPO基因表达的siRNA序列,本研究按照Ambion公司公布的siRNA分子设计原则,设计并合成了3个针对PRVEa株EPO基因的siRNA模板EP04、EP08和EP12,分别克隆到以CMV启动子的siRNA表达载体pSilencer4.1-CMVneo中,构建相应的重组表达质粒p4.1-EP04、p4.1-EP08和p4.1-EP12。同时,将EPO基因的编码区克隆到真核表达载体pEGFP-N3中,按照读码框架与EGFP基因的5'端融合,获得重组表达质粒pEPO-EGFP。将p4.1-EP04、p4.1-EP08、p4.1-EP12和阴性对照质粒p4.1-NK分别与pEPO-EGFP共转染IBRS-2细胞,荧光显微镜观察、流式细胞仪和半定量RT-PCR检测结果表明,三个siRNA分子均能不同程度地抑制EPO基因的表达,抑制效率从高到低依次为EP08、EP12和EP04;在进一步的病毒感染实验中也得到了与细胞转染模型一致的结论。这为深入研究EPO基因在PRV复制和潜伏感染中的作用奠定了基础。

伪狂犬病毒在潜伏感染猪体内的组织分布

潜伏感染是猪伪狂犬病防治和净化工作中的重要障碍之一。本研究用伪狂犬病毒(PRV)gG-/LacZ+标记毒株感染经过PRV灭活疫苗免疫的PRV阴性仔猪,建立了猪伪狂犬病毒潜伏感染动物模型,再用地塞米松激活PRV在猪体内的潜伏感染。运用免疫组织化学SABC染色法研究了PRV在潜伏感染猪和潜伏感染激活猪体内部分组织的分布情况。结果显示,阳性细胞主要分布在神经系统的大脑、小脑、脑干、三叉神经和视神经以及非神经系统的扁桃体、肺和肾等部位。阳性细胞数量随着攻毒后时间的发展呈现减少的趋势,而注射地塞米松后,阳性细胞数量在上述组织中显著增加。

实验动物屏障环境系统的构建与维护

为更好地服务于地方综合院校的教学科研,对三峡大学实验动物中心实验动物屏障环境系统的构建和维护情况进行了初步研究。从屏障系统设计、屏障环境和物品的消毒、屏障系统设施维护等几个方面总结了实验动物屏障系统的建立及运营管理经验。结果表明,三峡大学实验动物中心已初步建立了屏障系统内SPF级实验动物实验区及SPF级实验动物生产区的环境技术平台,为屏障系统内的动物实验及实验动物规模化生产奠定了基础。

文拉法辛缓释剂与阿米替林治疗老年抑郁症的随访研究

目的比较文拉法辛缓释剂(博乐欣)与阿米替林对老年抑郁症的治疗效果。方法将80例老年抑郁症患者按住院顺序分为两组,分别给予博乐欣和阿米替林进行为期8周的治疗,治疗结束后进行1年的随访。用汉密尔顿抑郁量表(HAM D)、抗抑郁药副反应量表(SERS)于治疗前、治疗中和出院后1年对患者进行疗效评估。结果治疗结束后两组显效率分别为75%和68.4%、有效率分别为97.5%和94.7%,两组比较P>0.05;治疗2周后博乐欣组和阿米替林组的HAM D分分别为22.4±2.8和26.7±3.2,P<0.05;治疗结束时两组SERS分分别为1.7±0.3和4.5±1.9,P<0.01;出院1年后博乐欣组8例复发,阿米替林组15例复发,两者有显著差异(χ2=5.5,P<0.05)。结论博乐欣是一种安全、有效的抗抑郁剂,比较适用于老年抑郁症患者。

microRNA-122可调节线粒体的生物发生

目的探讨microRNA-122在代谢中的作用机制。方法首先通过生物信息学预测和双荧光素酶报告基因实验去验证14个代谢相关的microRNA-122靶基因,接着分别利用瞬时转染microRNA-122前体的293A细胞、HeLa细胞和HepG2细胞去检测维持线粒体形态功能的3种标志蛋白Immt、AIF、Cox IV的含量以及通过NRF-1/2及ERR-α途径直接调控线粒体生物生成的PGC-1α的表达,并同时采用线粒体DNA定量实验和活体细胞线粒体损伤/氧化(NAO)荧光测定实验检测这些相应的细胞稳定克隆中线粒体的拷贝数。结果发现其中一些预测的线粒体生物发生相关的靶基因能被microRNA-122显著影响,并且在过表达了microRNA-122前体的不同种类的细胞中Immt、AIF和Cox IV的蛋白水平,PGC-1α的RNA水平和线粒体的拷贝数都呈现较为显著的下降。结论 mi-croRNA-122可通过调节线粒体的生物发生来影响代谢。

人类miRNA上游转录因子及下游靶基因的基因本体分析

目的研究人类miRNA转录因子及靶基因之间的相关关系。方法利用生物信息学方法预测miR-NA的上游转录因子和下游靶基因,并对预测结果做基因本体分析,得到参与各生物学过程及分子功能的比例,用统计学软件PASW做相关性分析。结果人类382个miRNA参与应激、代谢、发育等10个生物学过程和行使转录调控、翻译调控、催化活性等12个分子功能,miRNA上游转录因子之间、下游靶基因之间以及上下游之间存在着广泛的正负相关关系。结论基因在参与生物学过程及行使分子功能的过程中,通过miRNA实现协同作用或隔离效应。