高分辨率熔解曲线快速检测结核分枝杆菌对链霉素耐药情况的研究

探讨高分辨率熔解曲线(HRM)技术检测结核分枝杆菌对链霉素耐药性的可行性。用传统药物敏感性试验进行结核分枝杆菌链霉素耐药性检测;以Rpsl和rrs的耐药决定区为靶点设计引物进行HRM分析,判断菌株是否对链霉素耐药;以药敏结果为标准,应用SPSS17.0分析两种检测结果之间的符合率;Kappa检验分析两种结果的一致性。药敏结果显示,84株菌株中有20株对链霉素耐药,64株为敏感株;HRM检测结果显示,24株菌株对链霉素耐药,60株为敏感株;以药敏结果为参照,HRM检测结核分枝杆菌对链霉素耐药性的敏感性为75%,特异性为85.9%,经Kappa检验显示,两种方法检测结果具有中度一致性。本研究结果表明HRM可快速检测结核分枝杆菌对链霉素的耐药性,具有较好的灵敏度,在耐药结核病的早期辅助诊断方面具有一定的应用价值。

新疆喀什地区1307例肺结核患者行利福平和异烟肼耐药性检测的结果分析

目的分析新疆维吾尔自治区喀什地区结核病患者行利福平和异烟肼耐药性检测的结果。方法搜集2019年1月1日至6月30日喀什地区11个市(县)根据《WS 288—2017肺结核诊断》确诊的1307例患者的痰培养标本及患者信息,利用结核分枝杆菌利福平耐药突变检测试剂盒和结核分枝杆菌异烟肼耐药突变检测试剂盒对利福平和异烟肼进行耐药性检测,对不同年龄组、不同性别、不同治疗史、不同地区患者对两种药品的耐药情况进行统计分析。计数资料组间比较采用χ^2检验,以P<0.05为差异有统计学意义。结果在1307例患者中,利福平耐药198例,耐药率为15.15%;异烟肼耐药151例,耐药率为11.55%;耐多药63例,耐多药率为4.82%。男性与女性患者利福平耐药率[15.71%(110/700)和14.57%(88/604)]、异烟肼耐药率[10.71%(75/700)和12.42%(75/604)]和耐多药率[4.57%(32/700)和5.13%(31/604)]差异均无统计学意义(χ^2=0.330,P=0.566;χ^2=0.924,P=0.337;χ^2=0.222,P=0.638)。初治和复治患者利福平耐药率[15.46%(160/1035)和16.32%(31/190)]、异烟肼耐药率[11.30%(117/1035)和14.74%(28/190)]和耐多药率[4.73%(49/1035)和6.32%(12/190)]差异均无统计学意义(χ^2=0.090,P=0.765;χ^2=1.812,P=0.178;χ^2=0.849,P=0.357)。60~70岁年龄组耐多药率最高(6.12%,21/343);30~40岁年龄组对利福平和异烟肼耐药率均最高,分别为21.32%(29/136)和14.71%(20/136)。喀什地区11个市(县)中,喀什市耐多药率(10.59%,9/85)、利福平耐药率(25.88%,22/85)和异烟肼耐药率(28.24%,24/85)均为最高。结论喀什地区耐药结核病状况较为严重,应加强耐药性筛查力度,及时发现耐药结核病患者,并制订有效的化疗方案。

喀什地区分枝杆菌分布特征及耐药性分析

目的了解新疆喀什地区分枝杆菌分布特征与耐药情况,为喀什地区结核病防治工作提供参考依据。方法收集2018—2020年喀什地区肺科医院分离培养的分枝杆菌,开展菌种鉴定和微孔板滴定法药物敏感试验,分析结核分枝杆菌(MTB)和非结核分枝杆菌(NTM)分布状况以及MTB对13种抗结核病药物的耐药性。结果1906株分枝杆菌中,MTB 1708株、占89.61%,其他菌种140株、占7.35%,NTM 58株、占3.04%。NTM种群15种,位居前4位的分别是灰尘分枝杆菌(占31.03%)、博尼克分枝杆菌酸杆形菌(占15.52%)、龟拟分枝杆菌(占8.62%)和乌分枝杆菌乌亚种(占8.62%);耐药谱共有30个,总耐药率为13.56%,耐多药率为2.35%;异烟肼单耐药率最高(5.33%);贝达喹啉、德拉马尼、氯法齐明、利奈唑胺新药物的耐药率分别为0.37%、0.81%、1.25%和0.00%。结论喀什地区分枝杆菌以MTB为主,对13种抗结核药物普遍耐药,其中异烟肼耐药率最高,应提高重视。临床上应加强对分枝杆菌的分离鉴定并密切监测相关菌株的耐药性。

2010-2019年新疆喀什地区巴楚县肺结核病流行特征分析

目的分析新疆喀什地区巴楚县2010—2019年肺结核病流行特征,为本地肺结核病防控提供科学依据。方法收集汇总巴楚县2010—2019年肺结核病发病数据,采用描述性流行病学方法,初步分析该病在当地的流行病学特点。结果2010—2019年巴楚县累计报告肺结核患者12487例,其中病原学阳性患者2523例,占20.21%;农民占78.95%,>55岁患者占65.38%;年平均报告发病率为342.14/10万,2018年报告发病率最高(535.57/10万),2019年下降至275.87/10万。结论2010—2019年巴楚县肺结核患者以农民和>55岁人群为主,需重点关注该人群的结核病防控工作,同时加强冬季防控工作以应对结核病高发期。

结核分枝杆菌利福平耐药突变位点分析及耐药性快速检测

目的检测结核分枝杆菌的利福平耐药情况,分析耐药突变位点及比率,评估高分辨率熔解曲线法对利福平耐药性检测的效能。方法采用比例法药敏试验对菌株的利福平耐药性进行检测。提取结核分枝杆菌基因组DNA,对RpoB基因进行PCR扩增,将PCR扩增产物测序,应用DNAman软件分析菌株的利福平耐药突变位点;采用高分辨率熔解曲线(HRM)分析技术对结核分枝杆菌利福平耐药性进行敏感性检测。结果药敏试验显示,84株结核分枝杆菌中利福平耐药24株,敏感60株;对目的基因PCR产物测序分析,显示84株菌株RpoB基因RRDR区共存在7个突变位点,分别为511、513、516、526、531、533、535位密码子,突变形式分为单位点突变、双位点联合突变和三位点联合突变。耐药株突变率为95.83%,且以531位密码子单位点突变为主,占耐药菌株的62.5%。HRM检测结果显示有23株峰型与对照组不一致,判断为耐药株,敏感株61株。以药敏结果为参照,DNA测序法检测菌株利福平耐药性的敏感性为95.83%、特异性为100%,具有高度一致性(Kapaa=0.97);以药敏结果为参照,HRM检测菌株利福平耐药性的敏感性为83.33%、特异性为95%,具有高度一致性(Kapaa=0.793);以DNA测序结果为参照,HRM检测出基因突变的敏感性为86.96%,特异性为95.09%,具有高度一致性(Kapaa=0.82)。结论RpoB基因突变是导致结核分枝杆菌利福平耐药的主要原因,采用HRM分析法对结核分枝杆菌利福平耐药性进行快速检测具有较高的灵敏性和特异性,可为耐药结核病早期诊断及时合理用药提供理论基础。