小鼠羊膜干细胞的分离与培养

目的探索小鼠羊膜细胞(mAMCs)分离、培养方法及其体外增殖分化的特性。方法应用不同浓度胰蛋白酶及与胶原酶按不同的先后顺序作用小鼠羊膜,并采用不同的细胞接种浓度培养细胞,分别考核最佳的分离及体外培养方案。免疫荧光及免疫组化法鉴定mAMCs的干细胞标志。结果胰蛋白酶消化及与胶原酶合用顺序不同,导致收获上皮细胞与间质细胞的数量和比例明显不同,先用胰蛋白酶消化将得到较多的上皮细胞,反之先用胶原酶消化将得到较多的间质细胞。以不同浓度接种上皮和间质细胞,原代培养2 w后生长曲线可见原代培养的mAMCs在y轴为对数坐标时呈长尾s型曲线。原代培养的上皮和间质细胞有较长的停滞期(2～4 d),指数增长期的细胞倍增时间间质细胞相对上皮细胞短,因此融合期时间间质细胞明显较短。接种浓度对间质细胞的生长曲线影响不大,但对上皮细胞有较大影响。在Chang medium C营养液中原代附壁培养mAMCs OCT3/4及SSEA-1阳性。结论应用0.25%胰蛋白酶及与0.075%胶原酶作用小鼠羊膜,可获得分离的mAMCs,原代培养mAMCs干细胞标志OCT3/4及SSEA-1阳性。