非洲马瘟VP7蛋白多克隆抗体的制备及IgM捕获ELISA检测方法的建立

为建立早期快速检测非洲马瘟抗体的IgM捕获ELISA(MAC-ELISA)方法,本试验利用大肠杆菌表达出具有良好抗原性的VP7蛋白,并制备该蛋白的多克隆抗体,通过优化抗原浓度、血清稀释度及酶标抗体稀释度等,建立了检测非洲马瘟的MAC-ELISA方法,并进行了初步应用。结果表明,利用重组表达的VP7蛋白成功建立了检测非洲马瘟的MAC-ELISA方法。

普氏野马物种的PCR鉴定

为建立鉴定普氏野马的PCR方法,根据线粒体D-Loop区序列,设计了针对普氏野马的特异性扩增引物,通过优化反应体系和扩增条件,建立了能够鉴定普氏野马的PCR方法。该方法检测灵敏度较高,可扩增10-3ng的DNA,与蒙古马、伊犁马、哈萨克马、阿拉伯马、驴、骡、牛和羊等动物均不发生交叉反应,具有很好的特异性。结果表明,建立的普氏野马物种鉴定的PCR方法特异性好,灵敏度较高,简单可靠,可作为普氏野马的一种有效鉴定方法,对普氏野马的保护起到重要的作用。

OIE疫病名录的修订趋向分析

自2010年起,OIE不断修订疫病录入标准和疫病名录,新增流行性出血病,删除了牛恶性卡他热、钩端螺旋体病、马立克氏病和禽霍乱;将马脑脊髓炎(东部型)、苏拉病(伊氏锥虫病)从马病调整为多种动物共患疫病;将马鼻肺炎的名称变更为马疱疹病毒1型感染。2014年,OIE又删除了疫病名录中的水泡性口炎和猪水泡病。关于疫病名称,除普遍接受的外,OIE建议用"病原名称加感染或侵染"字样。通过分析OIE疫病名录的修订过程,发现OIE在逐步缩减疫病名录的同时,也在增加一些病种。

马媾疫锥虫PCR检测方法的研究

根据GenBank中公布的马媾疫锥虫大环kDNA基因序列,设计合成一对特异性引物,通过对PCR扩增条件的优化,建立了检测马媾疫锥虫的PCR方法。用建立的PCR方法检测马媾疫锥虫、马伊氏锥虫和马焦虫,仅马媾疫锥虫扩增出与实验设计相符的395bp的条带,其余病原体检测均为阴性。灵敏性试验表明:建立的PCR方法最低能检出0.2 pg/μL的马媾疫锥虫DNA。研究建立的马媾疫锥虫PCR方法,具有快速、敏感、特异等优点,可用于临床上马媾疫锥虫感染的检测。

H3N8亚型马流感病毒RT-LAMP检测方法的建立

为了建立检测H3N8亚型马流感病毒的RT-LAMP方法,根据H3N8亚型马流感病毒HA基因序列,设计了2对LAMP引物,经过优化反应条件,建立了RT-LAMP检测H3N8亚型马流感病毒方法。结果表明,RT-LAMP方法能够在63℃恒温条件下、75min内实现目的基因片段的大量特异性扩增,通过荧光显色就可直接用肉眼判断结果。对H7N7亚型马流感病毒、马动脉炎病毒、马鼻肺炎病毒的核酸无交叉反应,具有较好的特异性;方法的灵敏度比常规RT-PCR的高10倍;该方法操作简便快速、省时省力,而且灵敏度高、特异性强,对H3N8亚型马流感病毒的检测具有实际的应用价值。

马病毒性动脉炎和马鼻肺炎抗体时间分辨荧光免疫分析检测方法的建立

以基因重组抗原包被96孔板,Eu3+标记兔抗马IgG,建立了马病毒性动脉炎和鼻肺炎抗体的时间分辨荧光免疫分析检测方法,对其特异性、灵敏性、稳定性进行了分析,并与进口ELISA试剂盒和微量血清中和试验进行了比较。结果显示,该方法交叉反应不明显,特异性好,灵敏度高于ELISA方法;该方法的批内和批间变异系数分别为2.68%～4.43%和4.21%～7.25%,Eu3+标记物可稳定保存5个月以上。证实,建立的马病毒性动脉炎和马鼻肺炎抗体的时间分辨荧光免疫分析检测技术灵敏度高,特异性和稳定性好,具有很好的应用前景。

牛病毒性腹泻病毒抗体液相芯片高效检测方法的建立

为建立一种牛病毒性腹泻病毒(BVDV)血清抗体快速检测的方法,本研究选取BVDV-E2蛋白与荧光微球偶联,建立液相芯片检测技术。首先将BVDV-E2蛋白与已经羧基化处理的荧光微球偶联后与无特定病原血清样本反应,添加检测抗体并利用分析系统检测微球荧光信号建立方法,通过测定无特定病原血清样本确定检测阈值。同时,本试验对液相芯片的最佳蛋白浓度、重复性、一致性等进行了检测。结果显示,本试验建立的液相芯片技术中值荧光强度(MFI)阈值为9347.5,最佳蛋白结合浓度为11μg/1.25×10^(6)个微球,批间和批内变异系数均小于10%,表明该检测方法重复性较好。经过比对发现,本试验建立的方法灵敏度要高于ELISA方法。采用这两种方法对不同血清进行检测,发现两方法的检测一致性为91.6%,且重复性良好。上述研究结果表明,该液相芯片检测技术的建立为BVDV的口岸快速检测探索出一种新的方法。