牛冠状病毒S基因的序列分析及原核表达

为了解牛冠状病毒(bovine coronavirus,BCoV)的S基因变异情况并建立ELISA检测方法,本研究对采自不同牛场的新生犊牛腹泻(CD)和成年牛冬痢(WD)腹泻样本提取总RNA,反转录合成cDNA,利用PCR扩增S全基因和S1基因。将S1基因目的片段连接表达载体pET-32a(+),并转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经PCR、双酶切及测序验证正确后,进行IPTG诱导表达。结果显示,CD与WD分离株S基因核苷酸为98.4%,CD和WD分离株与参考毒株BCoV-ENT株核苷酸同源性最高,分别为98.4%和98.5%,CD分离株与参考毒株SUN5株的同源性最低,为97.5%,WD分离株与FRA/EPI/Caen/2003/13同源性最低,为97.3%。通过比对可知,分离株与已知毒株之间存在较大差异,为疫苗候选毒株筛选提供依据。本试验同时构建了pET-32a-S1表达载体,在0.2mmol/L IPTG诱导5h时,重组菌能在大肠杆菌BL21感受态细胞中产生大量的S1融合蛋白,获得约58ku表达产物。本试验成功表达了S1蛋白,并对BCoV进行了核苷酸进化分析,为疫苗免疫效果评价方法的建立奠定了基础。

内蒙古某肉牛场呼吸道疾病病原的分离鉴定

2017年5月,内蒙古某肉牛场暴发呼吸道疾病,为了确诊该次疾病的病原,无菌采集牛鼻汁接种于鲜血琼脂培养基进行细菌的分离鉴定,同时对牛鼻汁中的病原进行PCR检测,并针对分离菌进行药物敏感性试验。根据细菌分离结果将该分离菌初步鉴定为链球菌;药敏结果显示,该分离菌对阿米卡星、壮观霉素、强力霉素和阿奇霉素高度敏感。PCR检测结果显示,病料中的牛呼吸道合胞体病毒和支原体PCR检测结果为阳性。由以上结果可以得出引起该肉牛场肉牛发病的病原为牛呼吸道合胞体病毒、支原体和链球菌。

多杀性巴氏杆菌与牛呼吸道合胞体病毒混合感染的诊断

牛呼吸疾病道综合征(BRDC)给全球养牛业的健康发展带来了严重威胁。安达市某牛场爆发呼吸道疾病,为了确诊此次疾病的病因,本文通过细菌分离鉴定、呼吸道病毒PCR检测及药物敏感性试验,检测结果显示为多杀性巴氏杆菌与牛呼吸道合胞体病毒混合感染,药敏结果显示,此菌对恩诺沙星等药物高度敏感,为今后临床处理此类疾病提供理论依据。

猪气喘病与仔猪副伤寒混合感染的诊治

2017年6月,黑龙江某规模化猪场发生严重呼吸道与消化道疾病。为了探究其发病原因,试验采用病原菌分离及PCR方法对病原进行了鉴定,并针对其进行了药敏试验。结果由发病猪体内分离到沙门氏菌,PCR结果显示该猪场猪气喘病为阳性,药敏试验显示该猪场沙门氏菌对磷霉素、卡那霉素及庆大霉素敏感性较高。该猪场发病病因为猪支原体和沙门氏菌混合感染。本试验结果对临床诊断和治疗提供了参考。