高效液相色谱法同时测定牡蒿叶中4个绿原酸类成分含量

[目的]通过响应面法优化提取工艺,并结合高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)法测定牡蒿叶中4个绿原酸类成分的含量,探究其开发利用价值。[方法]采用Thermo Scientific Syncronis Amino色谱柱(4.6mm×250mm,5μm)色谱条件为流动相乙腈:0.1%甲酸水(40:60,V/V),流速1mL·min^(-1),柱温25℃检测波长325nm;以绿原酸、异绿原酸A、异绿原酸B和异绿原酸C的总含量为响应值乙醇浓度、液料比、超声功率为主要因素采用Box-Behnken响应面法对牡蒿叶中4个绿原酸类成分进行优化提取,并测定其含量。[结果]以乙腈:0.1%甲酸水(40:60,V/V)等度洗脱,流速1mL·min^(-1),柱温25℃检测波长325nm,牡蒿叶中绿原酸、异绿原酸A、异绿原酸B和异绿原酸C分离度良好,在6.25~200.00μg·mL^(-1)浓度范围内线性关系良好加样回收、精密度、稳定性和重复性均符合要求。优化得到的最佳提取工艺为:乙醇浓度60%,液料比40:1(单位mL·g^(-1))超声功率250W频率53kHz室温超声20min。通过HPLC法测得绿原酸、异绿原酸A、异绿原酸B和异绿原酸C含量分别为14.3170mg·g^(-1)、27.9452mg·g^(-1)、1.2304mg·g^(-1)和5.0665mg·g^(-1),合计总量达48.5590mg·g^(-1)。[结论]HPLC法测得牡蒿叶中绿原酸类成分含量较为丰富。采用响应面法优化提取工艺,能够显著提高牡蒿叶中4个绿原酸类成分提取率具有较好潜在开发应用价值。

牡蒿叶中绿原酸类成分富集工艺优化

建立牡蒿叶中绿原酸类成分富集工艺。方法:以绿原酸、异绿原酸A、异绿原酸B和异绿原酸C为主要指标,利用静态及动态吸附解吸附实验考察6种不同型号树脂对牡蒿叶绿原酸类成分的吸附及解吸附能力,优选出合适的树脂,并确定其最佳分离富集条件。结果:D101型大孔树脂对牡蒿叶绿原酸类成分具有较好的吸附和解吸附率,最佳分离纯化工艺为:牡蒿醇提物上样浓度为8 mg/mL,pH3,上样量500 mg/g树脂,上样流速2 BV/h,水洗10 BV,60 %乙醇以2 BV/h洗脱5 BV。结论:D101型大孔树脂在上述工艺条件下对牡蒿叶绿原酸类成分具有较好分离富集效果,可用于其绿原酸类药效成分的分离纯化,为其后续药理学研究奠定了良好基础。