利用基因表达芯片筛选与无功能垂体腺瘤侵袭性相关基因的研究

目的探寻与无功能垂体腺瘤(NFPA)侵袭性相关基因。方法选择7例NFPA和3例正常垂体组织进行基因表达芯片分析。通过生物信息学和统计生物软件,筛选出与NFPA侵袭性相关的基因。进一步利用43例NFPA标本,通过QPCR和免疫组织化学方法验证筛选出的ENC1基因与侵袭性NFPA的相关性。结果在侵袭性NFPA、非侵袭NFPA和正常垂体组织三组之间,筛选出共表达发生变化的基因56个,其中在侵袭性NFPA中35个基因上调和21个基因下调。QPCR结果显示:ENC1在侵袭性NFPA表达低于非侵袭性NFPA表达(P=0.010)。免疫组化结果显示:ENC1在正常垂体组织呈强阳性,而在侵袭性NFPA呈弱阳性。结论 ENC1可能是侵袭性NFPA的一个重要生物标记。

嗜酸性细胞瘤线粒体功能异常相关蛋白的研究

目的探寻垂体嗜酸性细胞瘤线粒体功能异常相关蛋白。方法本研究样本取材于行手术治疗的14例垂体嗜酸性细胞瘤,正常垂体组织取材于8例交通意外后尸体捐献者。采用超高效液相色谱和蛋白质质谱分析垂体嗜酸性细胞瘤和正常垂体之间的差异蛋白质。进一步通过生物信息学分析方法,识别与垂体嗜酸性细胞瘤线粒体功能异常相关的蛋白及蛋白信号通路。采用实时定量PCR方法验证线粒体功能异常相关的蛋白VDAC1、VDAC2、VDAC3、SLC25A4、SLC25A5和PGC-1β在垂体嗜酸性细胞瘤和正常垂体的表达情况。结果蛋白质质谱分析结果显示:598个蛋白质在垂体嗜酸性细胞瘤和正常垂体的表达差异有统计学意义(均P <0.05);其中331个蛋白质在垂体嗜酸性细胞瘤中上调,267个蛋白质在垂体嗜酸性细胞瘤中下调。IPA生物信息学分析结果显示:最显著富集的经典通路是线粒体功能异常通路。选择该信号通路中的蛋白质VDAC1、VDAC2、VDAC3、 SLC25A4、SLC25A5和PGC-1β进行进一步验证。QPCR结果显示:VDAC2、VDAC3和PGC-1β在垂体嗜酸性细胞瘤表达显著高于正常垂体(P分别为0.0011,0.045,0.0003)。结论在垂体嗜酸性细胞瘤中,与线粒体功能异常相关蛋白表达升高,且线粒体合成蛋白PGC-1β表达升高。

HIF-1α及相关基因与无功能垂体腺瘤侵袭性的相关性研究

目的探讨HIF-1α及其下游相关基因与垂体裸细胞瘤和嗜酸性细胞瘤侵袭性的相关性。方法选择46例裸细胞瘤(侵袭性28例,非侵袭性18例),46例嗜酸细胞瘤(侵袭性11例,非侵袭性35例)和3例正常垂体组织。采用q RT-PCR检测HIF-1α基因及其下游相关基因MMP9、ECAD和NCAD在正常垂体组织和肿瘤组织的m RNA表达情况。结果 HIF-1α基因表达在侵袭性裸细胞瘤高于非侵袭性裸细胞瘤(P=0.026);而HIF-1α基因表达在侵袭性嗜酸性细胞瘤和非侵袭性嗜酸性细胞瘤之间,无明显统计学差异。MMP9基因表达在侵袭性裸细胞瘤高于非侵袭性裸细胞瘤(P=0.023)。NCAD和ECAD基因表达在侵袭性裸细胞瘤和非侵袭性裸细胞瘤之间,无明显统计学差异。结论 HIF-1α基因与裸细胞瘤侵袭性相关,其可能通过上调MMP9参与裸细胞瘤侵袭生长。HIF-1α可作为侵袭性裸细胞瘤的特异性标记物。

ENC1与无功能垂体腺瘤侵袭性的相关性实验研究

目的 探讨ENC1基因与无功能垂体腺瘤（NFPAs）的发生及侵袭性的相关性,并比较其在裸细胞瘤和瘤样细胞瘤这两种NFPAs亚型中表达是否存在差异.方法 选择23例裸细胞瘤、20例瘤样细胞瘤和3例正常垂体组织.采用QPCR和Western blot检测ENC1在正常垂体组织和肿瘤组织中的mRNA和蛋白表达情况;采用免疫组化检测ENC1蛋白在肿瘤中的表达情况.结果 QPCR和Western blot结果显示在裸细胞瘤和瘤样细胞瘤中ENC1的表达明显低于正常垂体组织,且ENC1在侵袭性裸细胞瘤的表达明显低于非侵袭性裸细胞瘤的表达（P＜0.0001和P＜0.005）,而ENC1在侵袭性和非侵袭性瘤样细胞瘤中的表达差异无统计学意义（P＞0.05）.免疫组化结果显示ENC1蛋白在正常垂体组织表达呈强阳性,在非侵袭性裸细胞瘤为中等表达,而在侵袭性裸细胞瘤中呈弱阳性.结论 ENC1与裸细胞瘤的侵袭性相关,而与瘤样细胞瘤的侵袭性不相关,其可能是与裸细胞瘤侵袭性特异相关的一个重要基因.

CLDN9基因与垂体瘤样细胞瘤侵袭相关性的实验研究

目的研究CLDN9在无功能性垂体腺瘤亚型瘤样细胞瘤中的表达及其与瘤样细胞瘤的发生和侵袭性的相关性。方法收集20例来源于首都医科大学附属北京天坛医院神经外科的瘤样细胞瘤标本（侵袭性和非侵袭性瘤样细胞瘤各10例）和3例正常垂体组织标本。通过实时定量PCR和Westernblot检测CLDN9在正常垂体组织与瘤样细胞瘤之间，以及侵袭性与非侵袭性瘤样细胞瘤之间的表达差异。通过免疫组织化学方法检测Ki-67在瘤样细胞瘤标本中的表达。采用Logistic回归分析检验Ki-67与瘤样细胞瘤侵袭性的相关性。结果实时定量PCR结果显示，在瘤样细胞瘤中CLDN9基因的表达明显高于正常垂体组织（P〈0．01），且在侵袭性瘤样细胞瘤中的表达（6．54±0．32）高于非侵袭性瘤样细胞瘤（2．47±0．12）（P〈0．01）；Westernblot检测结果显示，CLDN9蛋白在侵袭性瘤样细胞瘤中的表达明显高于非侵袭性瘤样细胞瘤（3．331±0．165比2．497±0．125，P〈0．01）。Ki-67〉3％的瘤样细胞瘤标本中，侵袭性4例，非侵袭性3例，统计结果显示Ki-57与瘤样细胞瘤的侵袭性无相关胜（P=0．946）。结论CLDN9可能是与瘤样细胞瘤的侵袭性特异相关的一个重要基因。

基于蛋白质组学的IL-6R/STAT3信号通路与垂体裸细胞瘤侵袭性的相关性研究

目的 基于垂体腺瘤蛋白质组学研究,探讨IL-6 R/STAT3信号通路与垂体裸细胞瘤侵袭性的相关性.方法 本研究取材于首都医科大学附属北京天坛医院神经外科行手术治疗的45例垂体裸细胞瘤患者,正常垂体组织取材于3例交通意外后尸体捐献者.采用超高效液相色谱和蛋白质质谱分析侵袭性和非侵袭性垂体裸细胞瘤组织之间的差异蛋白质,进一步通过生物信息分析方法识别与垂体裸细胞瘤侵袭相关的信号通路,之后采用实时定量PCR（qPCR）和免疫组化方法验证该信号通路在侵袭性和非侵袭性垂体裸细胞瘤组织中的表达情况.结果 蛋白质质谱分析结果显示：283个蛋白质在侵袭性和非侵袭性垂体裸细胞瘤中的表达差异有统计学意义（均P ＜0.05）.在侵袭性垂体裸细胞瘤中,表达上调的蛋白质有182个,下调的有101个.生物信息分析结果显示：8个经典通路存在共上调或共下调,其中IL-6R/STAT3信号通路与垂体裸细胞瘤侵袭性相关.qPCR结果显示：IL-6R、JAK2和STAT3基因在侵袭性垂体裸细胞瘤中的表达量（分别为2.2、2.8、4.3）显著高于非侵袭性裸细胞瘤（分别为1.7、1.7、2.9,均P＜0.05）.免疫组化结果显示：IL-6R、JAK2、STAT3、p-STAT3和MMP9在侵袭性裸细胞瘤中的染色强度评分（分别为9.2分、8.6分、9.7分、10.5分和9.8分）较非侵袭性裸细胞瘤（分别为5.8分、5.3分、5.7分、5.2分和4.1分）高（均P＜0.05）.结论 IL-6R/STAT33信号通路与垂体裸细胞瘤侵袭性相关,且IL-6R/STAT3信号通路可能通过上调MMP9的表达在垂体裸细胞瘤的侵袭中发挥重要作用.

基于质谱技术对垂体嗜酸性细胞瘤异常代谢通路的研究

目的基于质谱技术探寻垂体嗜酸性细胞瘤的异常代谢通路。方法本研究取材于首都医科大学附属北京天坛医院神经外科行手术治疗的25例垂体嗜酸性细胞瘤患者,正常垂体组织取材于18例交通意外后尸体捐献者。采用超高效液相色谱和蛋白质质谱分析垂体嗜酸性细胞瘤与正常垂体之间的差异蛋白质。采用代谢组学分析垂体嗜酸性细胞瘤与正常垂体之间的差异代谢物。进一步通过生物信息学分析方法识别与垂体嗜酸性细胞瘤相关的信号通路。采用免疫印迹法验证c-Myc蛋白在垂体嗜酸性细胞瘤和正常垂体组织中的表达情况。结果蛋白质质谱分析结果显示,598个蛋白质在垂体嗜酸性细胞瘤和正常垂体中的表达差异均有统计学意义(均P<0.05)。代谢组学分析结果显示,95个代谢物在垂体嗜酸性细胞瘤和正常垂体中的表达差异均有统计学意义(均P<0.05)。整合通路生物信息学方法分析结果显示,10个最明显的富集通路包括代谢通路、免疫系统通路、固有免疫系统通路、蛋白质代谢通路、中性粒细胞脱颗粒通路、翻译后蛋白修饰通路、囊泡介导的转运通路、膜运输通路、止血通路及EGFR1通路。生物信息学方法分析结果显示,10个最明显的富集通路包括氧化磷酸化通路、c-Myc靶点通路1、脂肪酸代谢通路、脂肪酸合成通路、mTORC1信号通路、上皮间质转化通路、缺氧通路、糖酵解通路、外源性物质代谢通路和血红蛋白代谢通路。免疫印迹法分析结果显示,c-Myc蛋白在垂体嗜酸性细胞瘤中的相对表达量(1.58)显著高于在正常垂体中的相对表达量(0.56)(P<0.05)。结论垂体嗜酸性细胞瘤中存在异常代谢通路,且调节异常代谢的重要蛋白c-Myc表达升高。