不同干燥与提取方式处理的人源胎盘防治贫血活性差异研究

目的评价经不同干燥与提取方式处理后的人源胎盘样品对斑马鱼贫血模型的影响。方法取健康产妇新鲜胎盘,经−40℃冷却后于真空冷冻干燥机中冷冻干燥,研磨成粉,制成胎盘冻干粉;取健康产妇的新鲜胎盘,于90℃热风循环烘箱中烘干,研磨成粉,制成胎盘烘干粉。胎盘冻干粉或烘干粉分别经胰蛋白酶酶解提取、梯度溶剂(依次为水、50%乙醇水、无水乙醇、二氯甲烷)提取。发育至56 h(56 hpf)的健康野生型AB系斑马鱼分为对照组、模型组、给药组,对照组给予斑马鱼养殖水,模型组给予0.1μg·mL^(−1)苯肼溶液制备贫血模型,给药组给予苯肼与胎盘冻干粉或烘干粉各提取样品,样品质量浓度分别为10、20、50、100μg·mL^(−1),培养至3 dpf,采用O-dianisidine染色法对斑马鱼进行红细胞染色。结果与对照组比较,模型组红细胞染色积分吸光度显著下降(P<0.001)。与模型组比较,胎盘冻干粉酶解样品100μg·mL^(−1)组,水提样品10、20、50、100μg·mL^(−1)组,醇提样品20、100μg·mL^(−1)组,50%醇提样品10、20μg·mL^(−1)组,二氯甲烷提取样品10、20、50、100μg·mL^(−1)组红细胞染色积分吸光度显著增加(P<0.05、0.001);胎盘冻干粉酶解样品20μg·mL^(−1)组,水提样品10、20μg·mL^(−1)组,醇提样品20、50、100μg·mL^(−1)组,二氯甲烷提取样品50、100μg·mL^(−1)组红细胞染色积分吸光度显著增加(P<0.05、0.01、0.001)。经酶解、水提取及二氯甲烷提取的胎盘冻干粉样品和经水提取、醇提取及二氯甲烷提取的胎盘烘干粉样品作用呈浓度相关性,其中冻干粉水提取样品100μg·mL^(−1)效果最佳,染色后的红细胞积分吸光度达到对照组的94.77%。结论人源胎盘样品处理方式可优先选择冻干技术结合水提取方式。