不同猪繁殖与呼吸综合征疫苗组合体液免疫效果评估

为了比较不同猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)疫苗不同免疫程序对体液免疫效果的影响,本试验选择新引进猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗原和抗体均为阴性后备母猪的3个猪场,将各场内猪只按体重分为3个阶段:7~20、20~35和35~50 kg,各场分别从中选取20头猪,共180头猪。每场选用1种免疫方案,第1组混合疫苗组,为首次免疫PRRS弱毒疫苗(CH-1R株),28 d后加强免疫PRRS灭活疫苗(CH-1a株);第2组弱毒疫苗组,为2次均免疫PRRS弱毒疫苗;第3组灭活疫苗组,为2次均免疫PRRS灭活疫苗。疫苗首次免疫后14、28、42和56 d采集猪血清,进行特异性PRRSV ELISA(N蛋白)检测和中和抗体评价;首次免疫后14和28 d采集猪血液,进行PRRSV实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测血液内是否存在PRRSV;统计试验猪分娩后头胎的活仔数、断奶仔猪数和窝均总仔数,进行临床数据比较分析。结果显示,35~50 kg体重阶段猪只接种疫苗后ELISA检测抗体水平增高较其他2个阶段更明显。混合疫苗组在免疫56 d时血清ELISA阳性率为100%,且ELISA结果极显著高于弱毒疫苗组和灭活疫苗组(P<0.01)。尽管各组没有产生特异性抗NADC30-like毒株的中和抗体,但针对PRRSV经典和高致病性毒株的中和抗体保护效价结果显示,混合疫苗组在免疫56 d时中和抗体效价极显著高于弱毒疫苗组和灭活疫苗组(P<0.01);RT-qPCR检测未发现阳性猪;各组试验猪分娩后头胎的活仔数、断奶仔猪数和窝均总仔数之间差异不显著(P>0.05)。结果表明,混合疫苗组对体液免疫的促进效果显著优于弱毒疫苗组和灭活疫苗组。该试验为临床正确选择PRRS疫苗免疫方案提供了科学数据。

猪圆环病毒3型的分离及致病性分析

猪圆环病毒3型(porcine circovirus type 3,PCV3)是2016年由美国首次报道引起母猪繁殖障碍的一种新型猪圆环病毒,该病毒的致病性尚不完全清楚。为研究PCV3对断奶仔猪的致病性,本研究用PK-15细胞自临床病料分离到1株PCV3毒株,命名为PCV3/CH/HB/XY/2018,全基因组测序分析表明,该毒株属于PCV3a-IM基因亚型。分别用PCV3阳性病料初始匀浆液和第8代细胞培养物采用滴鼻和肌肉注射2种方式感染28日龄断奶仔猪,每组试验猪5头,并设置空白对照组。通过观察和分析试验猪的临床表现、体温、增重、病毒血症、各组织的病毒载量和病理变化等方面评价仔猪感染试验结果。结果显示:PCV3阳性病料初始匀浆液和细胞培养物在感染断奶仔猪后均会引起仔猪出现体温上升、消瘦、皮炎和生长缓慢等现象;病毒血症时间超过14 d,但21 d消失,病毒的组织分布结果表明,PCV3主要感染扁桃体、淋巴结等免疫器官,在脾、肺和扁桃体等组织中的病毒载量最高;感染猪可出现间质性肺炎、淋巴小结增生和嗜酸性粒细胞增多等病理变化。本研究表明PCV3/CH/HB/XY/2018毒株对断奶仔猪有致病性,为PCV3的致病机制研究奠定了基础。

非平衡正负氧离子消毒机的消毒效果及对仔猪的安全性

为评价一种应用非平衡正负氧离子释放技术消毒机的消毒净化效果及对家畜的安全性,采用空气消毒模拟现场试验、TCID50法和荧光定量PCR检测消毒前后样品中病毒的滴度和核酸含量,并通过观察或检测消毒机连续消毒情况下仔猪的精神状态、采食情况、体温和体重,探究消毒机的消毒净化效果及对家畜的安全性。结果显示,消毒组与对照组相比,消毒4 h样品中猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪轮状病毒(PoRV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪瘟病毒(CSFV)、猪蓝耳病毒(PRRSV)及猪伪狂犬病毒(PRV)的TCID50和核酸含量均极显著降低;消毒24 h,消毒组检测不到病毒的TCID50和核酸,而对照组可以检测到;将消毒机安装在仔猪舍中消毒7 d,消毒组仔猪与对照组仔猪相比,精神状态、采食情况和体温无明显差异,平均日增重也无显著差异。结果表明,非平衡正负氧离子释放技术的消毒机对畜舍中的常见病毒具有良好的消毒效果,且可在有动物存在的情况下进行连续消毒。

基于16S rDNA高通量测序技术分析受水灾影响猪场水样的菌群特征

2021年7月,河南省部分地区突发特大水灾,致使受灾区域内的猪场损失惨重,本研究旨在探究水灾发生后猪场水样中存在的病原菌,为猪场防控可能出现的疾病提供技术支撑。通过实地采样和委托采样的方式,获得了26个受灾猪场中的48份水样,包括19份猪饮用水、22份场内积雨水和7份废弃污水,采用菌落计数和高通量测序技术,对样品的细菌总数和菌群丰度进行分析研究,同时对采集的水样开展消毒剂杀菌试验。结果发现:饮用水、积雨水和污水中的平均含菌量分别为1.55×10^(5)、1.88×10^(8)和3.70×10^(9)CFU·mL^(-1),其中污水中的细菌总数最多,其次为积雨水,饮用水中的细菌总数最少,但远超国家饮用水的安全标准。本研究在不同种类的水样中均检测到了链球菌属、埃希氏杆菌属、弓形杆菌属、不动杆菌属和假单胞菌属等潜在的致病菌属,以及嗜低温弓形杆菌、猪链球菌、大肠杆菌、鲍曼不动杆菌和豚鼠气单胞菌等致病菌。杀菌试验显示,氯制剂终浓度达到2500mg·L^(-1),作用30 min即可杀灭积雨水和污水中所有的细菌。本研究发现,水灾后养猪场内的水样中含有多种致病菌,规模化猪场可选用含氯消毒剂对场内污染的水体进行消杀,以确保人和猪群的健康安全。

非洲猪瘟病毒无标签p30-ELISA抗体检测方法的建立及应用

非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)引起猪的一种急性、热性、出血性、高度接触性传染病,临床症状以败血症、皮炎和关节炎为特征,高发病率和高死亡率。为建立临床检测ASFV抗体的间接ELISA检测方法,本研究扩增了ASFV-CP204L基因,通过pET-30a原核表达系统表达p30蛋白,使用Ni-NTA纯化表达产物,通过肠激酶切除外源性蛋白,得到无His-组氨酸标签的p30蛋白,以此为诊断抗原,建立间接ELISA方法。结果显示:表达的无标签p30重组蛋白大小约为30 ku,与ASF阳性猪血清具有较好的反应原性;确定ELISA抗原包被浓度为1μg·mL^(-1),根据ROC曲线下面积确定S/P值>0.398判定为阳性,批内、批间变异系数均<10%;与PCV2、CSFV、PRV-gE、PRRSV阳性血清无交叉反应与INGENASA商品化试剂盒总符合率为97.78%。用该方法分别检测标准阳性血清、动物感染试验血清和收集的区域性临床血清644份,该方法最低可检测到1∶512倍稀释的标准阳性血清样品;检测感染动物血清,其中80%(4/5)的试验动物在第10天抗体为阳性。644份临床猪血清样品中抗体阳性率为7.61%,其中,母猪、后备母猪、仔猪、保育猪和育肥猪抗体阳性率分别为3.03%、0%、4.94%、7.55%和28.7%。本试验建立的ASFV-p30间接ELISA方法具有良好的特异性、灵敏度和重复性,可应用于ASFV的抗体检测,为ASF的诊断和流行病学调查提供了技术手段。

基于雾化技术的三醋酸甘油酯自动喷雾系统的设计与实现

KDF2型滤棒成型机组的增塑剂上胶系统,采用毛刷旋转甩涂三醋酸甘油酯控制滤棒硬度,存在三醋酸甘油酯喷涂不均匀、丝束与三醋酸甘油酯浪费严重等问题,为提高滤棒质量,设计了基于雾化技术的三醋酸甘油酯自动喷雾系统。该系统采用"PLC+触摸屏"作为主控制器,增压泵将加热的三醋酸甘油酯高压泵入集油器,通过喷嘴均匀喷雾到运行丝束上;利用PLC内置定位功能和伺服定位模块,实时跟踪丝束速度,精确控制活门位置,调节三醋酸甘油酯流量;通过检测三醋酸甘油酯箱内三醋酸甘油酯温度和液位,完成三醋酸甘油酯自动加热和施加。测试结果表明,滤棒硬度达到88%±1.8%,硬度过程能力指数达到1.4以上;三醋酸甘油酯喷涂均匀,系统运行稳定可靠,平均跑条量由原来的38 g减少到5.8 g,平均剔除量由原来的1282 g减少到32 g,有效减少了三醋酸甘油酯和丝束损耗。

IFN-γ-ELISpot方法用于评价猪伪狂犬病疫苗免疫效果

鉴于常用的抗体检测方法不能完整反映免疫猪获得针对猪伪狂犬病毒的保护力,有必要建立猪伪狂犬病病毒(PRV)特异性IFN-γ的酶联免疫斑点检测(ELISpot)方法,并评估伪狂犬病疫苗细胞免疫的免疫效果。依照ELISpot基本操作流程,摸索PRV作为刺激原的最适浓度、外周血单个核细胞(PBMC)密度和作用时间以建立并优化该方法。将20头gB抗体检测阴性猪,随机分为单独弱毒疫苗免疫组、单独灭活疫苗免疫组、弱毒疫苗-灭活疫苗联合组及对照组,免疫后攻毒。利用所建方法,结合gB-ELISA、中和试验及攻毒保护试验,评价上述三种免疫程序的效果。试验结果表明:IFN-γ-ELISpot最佳条件为刺激原浓度2μg·孔^(-1)、外周血单核细胞(PBMC)浓度106·孔^(-1),培养时间36h。一免弱毒疫苗二免灭活疫苗组二免后2周,试验猪中和抗体效价可达1∶14.48,ELISpot斑点数可达(151.8±26.61)个·孔^(-1),且该免疫程序下,试验猪攻毒后体温、鼻拭子排毒及临床症状均低于其余试验组,攻毒8d后仅表现呼吸道症状;单独灭活疫苗免疫组二免后2周,试验猪的中和抗体效价可达1∶32.36,而ELISpot斑点数仅为(40.4±9.07)个·孔^(-1);单独弱毒疫苗免疫组二免后2周,试验猪的中和抗体效价仅为1∶1.36,但ELISpot斑点数可达(189.6±27.36)个·孔^(-1)。综合分析攻毒试验结果和ELISpot斑点数之间的相关性,本试验所建立的IFN-γ-ELISpot可用于猪伪狂犬病疫苗的细胞免疫评估,为免疫程序的评价和选择提供有效手段。

番茄疫霉根腐病的识别及防治

番茄疫霉根腐病是番茄生产上的重要病害之一，近年来在寿光地区的发生日趋严重，造成了极大危害。发病初期叶片皱缩并向上卷曲，似病毒病，但根部及维管束均为深褐色，经病原菌的分离镜检为疫霉，且在喷施了防治疫霉根腐病的药后，病症明显减轻。因病害常导致植株地上部萎蔫，其症状易与枯萎病及青枯病混淆，广大菜农往往不能准确诊断病害而盲目用药，同时用多种药剂防治病害，既增大了用药成本，

伪狂犬病病毒野毒感染猪场的gE抗体阳性头胎母猪生产成绩调查

伪狂犬病(Pseudorabies,PR)是由伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)感染多种野生动物及家畜引起的急性、热性的高度接触性传染病。为掌握PRV隐性感染对头胎母猪生产成绩的影响,本研究跟踪调查某一PRV野毒阳性稳定万头母猪场中野毒gE抗体阴性和阳性的头胎母猪总产仔数、健仔数、弱仔数、死胎数、木乃伊胎数、仔猪初生窝重以及断奶活仔数、断奶合格仔数、仔猪断奶重等不同生产成绩指标,探索相同饲养条件下伪狂犬病对头胎母猪各生产指标的影响。结果发现,每头PRV野毒gE抗体阴性头胎母猪每窝平均可产11.96头活仔猪,比gE抗体阳性母猪每胎次多产活仔0.63头,以及每胎次可多提供0.18头断奶活仔,每胎次多提供0.28头断奶合格仔。虽然PRV野毒gE抗体阳性母猪所产仔猪初生均重及断奶均重均高于gE抗体阴性母猪所产仔猪,但gE抗体阴性母猪所产仔猪断奶合格率高于gE抗体阳性母猪,表明其断奶活仔整齐度更高。综上,PRV野毒gE抗体阳性的头胎母猪生产成绩低于gE抗体阴性母猪,伪狂犬病的净化可为猪场带来更高的经济效益,表明伪狂犬病的净化至关重要。

利用棉绳采集口腔液监测猪伪狂犬病方法的应用分析

为分析使用棉绳采集口腔液监测猪场伪狂犬病(PR)方法的科学性,本研究拟通过实验室水平、动物试验及临床应用3个方面对使用棉绳采集口腔液监测猪场PR这一方法开展应用分析。首先对采样条件进行优化,并通过模拟试验测定棉绳对伪狂犬病病毒(PRV)的释放能力,通过动物试验测定病毒感染后检出时间,最后对临床样品进行检测分析。结果表明:使用直径为1.0 cm的棉绳,在早上喂料前采集口腔液样品,采样时间为20~30 min,可采集到更能满足试验要求的口腔液。病毒释放能力测定显示,棉绳对PRV的释放能力为50%左右,使用棉绳采集口腔液可检测到1个TCID50/0.1 mL的病毒含量。动物试验检测发现,猪群在感染后28 d中除第5天外,口腔液中病原含量均高于鼻拭子中病原含量,口腔液检测效果优于鼻拭子,且口腔液中病毒的检出时间(感染后第1天)早于血液中抗体转阳时间(感染后第7天)。临床样品检测分析结果表明,PRV疫苗免疫后也可通过口腔液检测到疫苗毒,并且存在无法通过口腔液检测感染PRV野毒后稳定猪中带毒的情况,因此口腔液检测方法应结合gE抗体检测,才可综合判断猪群是否为感染群体。综上,本研究优化了口腔液采集方法,并测定了棉绳对口腔液的释放能力和感染后检出时间,表明口腔液可作为较好的监测猪群PR的手段;口腔液监测方法需结合gE抗体检测来综合判断猪群是否为感染群体。

黄瓜靶斑病及蔓枯病的识别与防治

黄瓜靶斑病与蔓枯病是黄瓜生产上的两种重要病害，近几年在寿光地区发病严重，造成了极大损失，尤其是黄瓜靶斑病，因为发病流行的时间不长，广大菜农常不能准确诊断病害，导致发病后菜农盲目配药，同时用多种药剂防治病害，既增加了用药成本，又不利于无公害蔬菜生产的健康发展，因此笔者根据近几年的调查，将两种病害的田间症状、病原、发病规律及防治措施介绍如下，以期对菜农有所帮助。

高速烟支切割支撑装置动力学仿真研究

基于机械系统动力学仿真原理 ,提出了一种集计算机辅助设计、有限元分析、机构运动仿真于一体的新方法。在ADAMS软件环境下 ,建立了ADAMS与ANSYS之间的双向数据传输 ,并对高速卷烟机烟支切割装置虚拟模型系统进行了动力学分析 。

1例猪圆环病毒与巴氏杆菌混合感染的诊断

2016年8月湖北省武汉市某规模化猪场出现保育猪生长不良、咳喘、消瘦、呼吸困难等症状,偶有猪只急性死亡,为明确发病原因,笔者现场了解发病情况,剖检发病猪,采集样品实验室检测,结合临床症状综合分析,诊断为猪圆环病毒与多杀性巴氏杆菌混合感染。猪群紧急免疫高抗原含量和基因型相符的圆环病毒灭活疫苗,调整猪场免疫程序,结合巴氏杆菌药敏试验选用敏感抗生素阿莫西林和氨苄西林钠进行全群保健和个体治疗,快速控制了疫情,降低猪群的死亡率,为猪场挽回损失,同时也为开展猪圆环病毒和多杀性巴氏杆菌混合感染的防控提供参考。

Bartha K61株活疫苗对猪伪狂犬变异毒株和传统毒株的免疫保护效力分析

为了分析猪伪狂犬病活疫苗Bartha K61株预防流行变异毒株的效力。以经典PRV-EA株和变异PRV-XT株为攻毒毒株,评价Bartha K61活疫苗免疫仔猪对伪狂犬病病毒变异株的保护效力。用Bartha K61株活疫苗免疫4~5周龄断奶仔猪,免疫28 d后,分别用PRV-EA株和流行变异PRV-XT株攻毒,观察仔猪的临床症状和病理变化,检测鼻腔排毒情况。结果显示,Bartha K61株活疫苗可对经典PRV-EA株攻毒提供良好的免疫保护,但对变异毒株PRV-XT仅能提供部分保护。PRV-EA株攻毒组所有猪只未出现明显临床症状,而PRV-XT攻毒组出现较为明显的临床症状。表明Bartha K61株活疫苗对传统毒株有良好保护效果,而对流行变异毒株不能提供完全保护。

一例猪蓝耳病病毒、猪圆环病毒2型和猪链球菌血清2型混合感染的诊断及防控

2019年11月底湖北某商品猪场育肥猪只出现咳嗽、喘气、呼吸困难等症状,为了查找病因、控制疫情、减少损失,采用流行病学调查、临床检查、病理剖检和实验室检测方法进行综合诊断,并根据诊断结果及猪场具体问题提出了防控建议。结果表明:该猪场育肥猪感染了猪蓝耳病病毒NADC30-like毒株、猪圆环病毒2型,同时混合感染了血清2型猪链球菌,分离菌对头孢类药物(头孢曲松、头孢喹肟、头孢他啶)、大观霉素及氨苄西林高敏,通过实施综合防控措施后病情得到了有效控制。说明该猪场育肥猪只发病的主要原因为猪蓝耳病病毒NADC30-like毒株和猪圆环病毒2型及猪链球菌血清2型混合感染,应加强防控。

猪多杀性巴氏杆菌和链球菌混合感染的诊治及防控

为了确定湖北省某规模化猪场病死猪的发病原因,试验调查了猪场大体概况,解剖发病猪采集肺脏、气管等病料,并进行细菌分离、纯化,采用分子生物学方法进行核酸检测及血清型鉴定,利用药敏试验分析分离菌对常用抗菌药物的耐药性并提出防治方案。结果表明:从样品中未检测到病毒核酸,仅检测到细菌核酸,经测定该猪场病死猪混合感染了猪多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm)和猪链球菌(Streptococcus suis,SS),其中Pm的荚膜多糖基因型为D型,SS为血清9型;分离株Pm-D和SS-9对氧氟沙星、强力霉素、恩诺沙星、头孢拉定较敏感。根据药敏试验结果并结合该猪场情况提出综合防控意见,采用后发病猪病情得到有效控制。说明毒力较强的细菌原发致病可造成较大危害,药敏试验对于细菌性疾病的快速治疗和预防起到了至关重要的作用。

一例育肥猪猪呼吸道疾病综合征的诊断

猪呼吸道疾病综合征(porcine respiratory disease complex,PRDC)是由多种病原及环境条件等多种因素引起的猪呼吸系统疾病。2019年4月份,湖北省某猪场育肥阶段猪只出现明显的呼吸道症状,且发病率高达60%,死亡率约为8%,造成了严重的经济损失。为了对该病进行诊断,试验采用剖检病变、实验室检测进行诊断,对分离菌进行药敏试验,并根据诊断结果进行防控。结果表明:根据病猪临床症状、剖检病变及实验室检测结果,最后确定该场PRDC是由细菌、病毒混合感染所致。推断可能是猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)与猪圆环病毒2型(PCV-2)混合感染引起免疫抑制后继发多杀性巴氏杆菌(Pm)和副猪嗜血杆菌(Hps)、猪链球菌(SS)感染所致。可采取改善饲养环境、药物治疗及对猪群进行群体保健等防控措施。说明猪场应重视PRDC的实验室诊断及防控。

猪圆环病毒2型和3型混合感染引起的母猪繁殖障碍诊治

【目的】寻找引起某猪场母猪屡次配种不孕的原因。【方法】采集母猪饲料槽中正在食用的饲料检测黄曲霉素B含量;采集返情母猪的口鼻腔拭子、肛门拭子及血清,使用PCR、RT-PCR方法检测猪圆环病毒2型(Porcine circovirus 2,PCV2)、PCV3、猪伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)、猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)、猪瘟病毒(Classic swine fever virus,CSFV);随机剖检13头返情母猪,采集脾脏、淋巴结、脊髓、子宫、卵巢组织检测繁殖障碍性病毒的感染情况;对检测到的PCV2和PCV3部分阳性样品进行ORF2基因序列分析;观察母猪卵巢病理变化情况,汇总分析结果,诊断该场母猪受胎率低、持续返情的原因。【结果】该猪场饲料中黄曲霉素B含量为4.5~9.0μg/kg,均在GB 13078-2017规定的饲料中黄曲霉素B允许范围内(<20μg/kg)。PCR、RT-PCR结果显示,口鼻腔拭子、肛门拭子和血清的PCV2、PCV3、PRV、PPV、PRRSV、CSFV检测结果均为阴性;13头母猪的PCV2阳性率为69.23%(9/13),PCV3阳性率为38.46%(5/13),PCV2和PCV3混合感染率为30.76%(4/13)。实时荧光定量PCR检测结果显示,PCV2在脊髓中的病毒载量最高,脾脏次之,淋巴结中最少;PCV3在脾脏中病毒载量最高,脊髓次之,卵巢中病毒载量最少。ORF2基因序列分析发现,PCV2为2d亚型,PCV3为3a亚型。卵巢病理切片观察发现,卵泡细胞数量减少,卵泡腔形状不规则、塌陷扁平。【结论】经过诊断确定该场母猪持续返情、屡配不孕的原因是PCV2和PCV3混合感染,进而引起繁殖障碍。根据诊断结果和该场情况,采取全群接种PCV2疫苗,配合全场消毒,加强生物安全防控,成功解决该场母猪繁殖障碍问题,恢复正常生产。

一例猪巴氏杆菌病的诊断与防控

猪巴氏杆菌病(Swine pasteurellosis)是由多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida, Pm)引起猪的一种散发性、热性传染病,常以败血症和炎性出血过程为主要特征。巴氏杆菌病的暴发和流行给养猪业造成了巨大的经济损失。研究对湖北某黑猪场一例巴氏杆菌病进行诊断,通过猪场实地调查、临床检查、病理剖检和实验室检测,最终确诊该场为A型多杀性巴氏杆菌感染所致发病。并通过药敏试验,筛选敏感药物,改善猪舍环境等一系列针对性措施,效果显著。该案例可为猪场巴氏杆菌病的诊断和防控提供参考。