抗菌肽AD与haFGF融合基因的合成及其表达

通过PCR技术和体外DNA重组技术将CecropinAD连接在haFGF改构体的 5′端 ,构建成融合基因CADAF。将其克隆到表达载体pET3c上 ,然后转化到BL2 1 (DE3)中经IPTG诱导表达。经DNA序列分析 ,合成的CADAF基因序列与设计序列一致。构建的CADAF基因在BL2 1 (DE3)

复方板蓝根含片的抗菌作用及对免疫功能的影响

目的:研究复方板蓝根含片的抗菌作用及对免疫功能的影响。方法:采用体内和体外两种方法观察复方板蓝根含片对通常引起感冒的几种细菌的抑制作用。结果:复方板蓝根含片在体外对肺炎克雷伯菌、肺炎链球菌、乙型溶血性链球菌有一定的抑制作用,对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌的抑制作用较弱,但抑菌作用强于原剂型复方板蓝根颗粒。而体内实验表明,复方板蓝根含片对肺炎链球菌所致小鼠感染有明显的保护作用。此外,其能增加单核-巨噬细胞系统的吞噬功能,促进T、B淋巴细胞增殖。结论:复方板蓝根含片有抗菌作用。

肝阳上亢型高血压模型及评价初探

为更好的应用于疾病实验研究,预期达到病症结合的目的,对肝阳上亢型高血压模型的建立方法进行总结并对其评价指标予以归纳和探索。

人内皮细胞抑制生长素在毕赤酵母中的高效表达

根据人胶原蛋白ⅩⅧNC结构域C末端编码内皮细胞抑制生长素 (Endostatin)的成熟多肽序列 ,人工合成了由毕赤酵母 (Pichiapastoris)中偏爱密码子组成的内皮细胞抑制生长素基因序列。该基因以N端融合的方式正确插入毕赤酵母诱导型表达载体pPICZαA中。通过电激将线性化的重组质粒转化到毕赤酵母SMD1 1 68细胞中 ,筛选获得表达具有生物活性的内皮细胞生长抑制素的高产菌株。在摇瓶发酵水平上 ,产量达到 80mg L。而利用生物反应器进行高密度发酵 ,Endostatin的产量可达 1 2 5mg L。

基因芯片技术在中药研究中的应用

基因芯片技术作为现代分子生物学研究的重要手段之一,在中药机制研究、不良反应研究、有效成分筛选及质量控制方面有着广泛的应用前景。本文针对近年基因芯片技术在中药研究方面的应用作一综述。

瘦素与绿色荧光蛋白融合基因的合成及其高效表达

目的 :为了便于追踪瘦素 (Leptin)在体内的去向 ,对其进行体内定位 ,设计合成Leptin荧光分子蛋白探针。方法 :用PCR技术将LeptincDNA与绿色荧光蛋白cDNA构建成融合基因LG ,然后将其克隆进原核表达载体pET3c中 ,构建成原核表达工程菌BL2 1(DE3) /pET3c LG。用Western blot杂交检测重组蛋白的免疫原性 ,用荧光显微镜观察融合蛋白及其诱导菌休的发光活性。结果 :DNA测序结果证实设计合成的融合基因与预期一致 ;构建的工程菌BL2 1(DE3) /pET3c LG获得了表达 ,融合蛋白的表达量占菌体总蛋白的 4 0 %以上 ;Western blot杂交检测表明重组蛋白具有Leptin的免疫原性 ;经IPTG诱导后的菌体及蛋白粗提液在荧光显微镜下可观察到其能发射出强烈的绿色荧光。结论 :融合基因在大肠杆菌中实现了高效表达 ,表达的融合蛋白具Leptin的免疫原性和GFP的发光特性。为利用绿色荧光蛋白标记Leptin在动物体内的药物治疗的研究提供了一种新的途径。

黄连解毒汤主要成分的体外抗炎作用研究

目的研究黄连解毒汤主要成分(黄连素、汉黄芩素)的体外抗炎作用及机制。方法以小鼠J774A.1巨噬细胞为研究对象,分别设对照组,脂多糖(LPS)处理组,药物(不同剂量的黄连解毒汤主要成分)处理组;加入药物2 h后再加入LPS继续培养24 h,分别采用ELISA法检测关键炎症因子TNF--、IL-6表达;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞中COX-2mRNA的水平;Western blot法测定细胞中COX-2蛋白的表达。结果黄连解毒汤主要成分黄连素、汉黄芩素能显著抑制LPS诱导的小鼠巨噬细胞中TNF--、IL-6的表达以及COX-2 mRNA和COX-2蛋白的表达。结论黄连解毒汤的抗炎作用可能与其主要成分黄连素和汉黄芩素抑制TNF--、IL-6等炎症因子的活性及下调COX-2的表达有关。

紫外分光光度法检测溶氧对bFGF发酵的影响

探索溶氧对碱性成纤维细胞生长因子(basic Fibroblast growth factor,bFGF)发酵过程的影响及其控制方法。采用补料分批发酵,在不同溶氧控制方式下,紫外分光光度法测定bFGF蛋白质浓度和发酵液中菌体的产量,考察发酵过程中溶氧对bFGF表达的影响。结果表明控制溶氧为50%,30L罐发酵20h,产菌达34.54g/L,bFGF为18mg/L,与其他溶氧组比较产量显著增高,由此建立了最佳溶氧条件。溶氧对bFGF发酵表达有重要影响,优化溶氧条件有利于改进生产工艺从而节约成本和提高产量。