不同物种输卵管上皮细胞培养、纯度检测及支持小鼠胚胎发育的能力

针对不同物种采用不同方法培养小鼠、山羊和鸡输卵管上皮细胞(OECs)并检测上皮细胞纯度,在此基础上比较了它们支持小鼠胚胎发育的能力。结果表明,3种细胞都能很好地生长,培养的细胞几乎全为上皮细胞(Vi-mentin单克隆抗体检测显示,小鼠、山羊和鸡OECs的阳性细胞率分别为2.4±0.3、1.3±0.3和1.8±0.4)。昆明白小鼠原核胚与小鼠、山羊和鸡OECs共培养,发育到囊胚的比例分别为61.7%、57.2%和56.2%,差异不显著(P>0.05)。说明鸡和山羊OECs能很好地支持小鼠胚胎发育。

世界石油炼制技术现状及未来发展趋势

进入21世纪,世界范围内石油资源的重质化、劣质化程度的加深,对清洁、超清洁车用燃料及化工原料需求的日益增加,正使世界炼油技术经历着重大的调整与变革.本工作在分析世界炼油工业和技术发展现状的基础上,指出世界炼油技术的未来发展将集中在重质/劣质原油的加工、清洁燃料的生产和炼油-化工一体化等几个方面.在重质/劣质原油的加工方面,加氢裂化和加氢处理工艺将是21世纪炼油技术的主要发展方向,新型催化裂化(FCC)工艺和焦化工艺也将得到进一步的发展;清洁燃料生产技术的发展方向主要集中在汽柴油的脱硫上,以加氢脱硫为主的各种脱硫技术将得到极大的发展;在炼油-化工一体化发展方面,基于传统FCC工艺改进的最大限度生产低碳烯烃的技术将得到广泛关注,加氢裂化由于其较高的灵活性,既能生产优质中间馏分油(航空燃料和柴油),又能为乙烯厂和芳烃厂提供优质原料,是21世纪炼油-化工一体化发展的核心技术.

GDF9和FST调控猪卵母细胞成熟和胚胎早期发育

为探讨生长分化因子9(Growth differentiation factor 9,GDF9)和卵泡抑素(Follistatin,FST)如何影响猪卵母细胞成熟及胚胎早期发育能力,在猪卵母细胞体外成熟(IVM)培养过程中添加不同浓度的GDF9和抗GDF9抗体,或同时添加GDF9和FST或抗FST抗体,测定猪卵母细胞的细胞核成熟率、卵裂率、囊胚率及囊胚总细胞数。结果显示,添加GDF9显著提高孤雌胚囊胚率,抗GDF9抗体则显著抑制卵裂率和囊胚率。添加FST显著降低孤雌胚囊胚率和囊胚总细胞数,添加抗FST抗体显著提高了囊胚率。共同添加GDF9与抗FST抗体则使囊胚率达到最高。表明猪卵母细胞IVM期添加GDF9能一定程度上提高卵母细胞及胚胎的发育能力,共同添加GDF9和抗FST抗体对胚胎发育的促进作用具有加性效应。

影响小鼠体细胞脂质体法转染效率的因素

本实验主要研究脂质体量、质粒量、细胞在脂质体-质粒复合物中暴露时间、细胞传代次数以及细胞种类对转基因效率的影响.首先研究了脂质体量、质粒量和细胞在脂质体-质粒复合物中暴露时间对小鼠胎儿成纤维细胞(MFFC)的绿色荧光蛋白(GFP)转染效率的影响.结果表明,在本实验条件下,用传至3代的MFFC,24孔培养板中每孔接种4-10×104个细胞,70%-90%贴满程度,当脂质体(LipofectAMINE)4μg、质粒(pEGFP-N1)0.3μg,复合物作用时间为6h时获得的转染效率最高,为30.7%.用此方案比较不同传代次数的MFFC转染效率结果表明,原代细胞的转染效率为10.0%,3代为28.9%,到15代降到7.2%.说明随着传代次数的增加,转染效率逐渐降低.将MFFC、小鼠输卵管上皮细胞(MOEC)和小鼠颗粒细胞(MGC)分别传至3代,采用上述方案进行转染,转染效率分别是27.8%、13.7%和14.2%.可见不同种类细胞的转染效率不同.细胞周期检测表明,无论是不同代次的细胞还是不同种类的细胞,其转染效率高低与M期所占比例的多少有关.这为如何提高转染效率提供了有利的依据.

阳离子型改性淀粉絮凝剂的制备及絮凝性能研究

合成了3种具有不同阳离子化度的阳离子型改性淀粉接枝共聚物絮凝剂ZHYC-n(n=15,40,70),当丙烯酰胺与淀粉的质量比大于2.0以后,再提高接枝单体对淀粉的比例,不能明显提高接枝频率,但能提高接枝侧链相对分子质量。考察了这3种絮凝剂的絮凝性能并与市售阳离子型聚丙烯酰胺絮凝剂CPAM进行了对比。结果表明,絮凝剂ZHYC-n具有优良的絮凝脱浊效果,随阳离子化度增加絮凝效果显著增加;絮凝剂ZHYC-70的絮凝效率比CPAM的高约30倍。阳离子型絮凝剂分子链上的阳离子电荷密度不是影响絮凝效果的惟一主要因素;阳离子型改性淀粉接枝共聚物具有的多支链型结构可以明显提高絮凝剂的絮凝效果。

山羊卵泡颗粒细胞和输卵管上皮细胞共培养对山羊体外受精胚胎发育的影响

试验共分 3组 :对照组为单独培养液 ;第 2组为单层颗粒细胞 ;第 3组为输卵管上皮细胞 ,将山羊体外受精胚胎随机放入以上 3组处理中。结果显示山羊体外受精胚胎在卵泡颗粒细胞中发育到囊胚的比率为 4 1.0 % ,在输卵管上皮细胞中发育到囊胚的比率为 5 8.1% ,而在M199培养液中为 5 .6 %。山羊体外受精胚胎分别与山羊卵泡颗粒细胞和输卵管上皮细胞共同培养时 ,均可提高山羊体外受精胚胎的发育进程。且输卵管上皮细胞比颗粒细胞能显著提高山羊体外受精胚胎的发育进程 (P <0 .0 5 )。

AMH及其相关基因在鸭不同等级卵泡中的表达

本研究旨在分析AMH及其相关基因在鸭不同等级卵泡中的表达特征,为水禽卵泡发育的分子机制研究积累基础资料。以连城白鸭为研究对象,通过定量PCR技术分别检测了卵巢不同等级卵泡中AMH基因及其相关调控基因的表达情况。结果表明,随着卵泡的发育,AMH及其相关基因AMHR2、BMP6、SF1、GATA4和WT1的表达量逐渐降低,而CYP19A1基因的表达量逐渐升高,SOX9和FSHR基因的表达量保持不变。我们推测AMH基因在鸭等级前卵泡中的高表达量可能有助于维持颗粒细胞未分化的状态,且可能是通过抑制FSHR信号通路来实现的。

不同处理方法对徐淮白山羊同期发情的效果

以徐淮白山羊为对象,设计了3种不同的短期同期发情处理方法,对同期发情率、发情后卵巢状态观察及情期受胎率进行了统计分析与评价。结果表明:组1(CIDR+PG+PMSG)和组3(PG+PMSG)的同期发情率分别为82.5%、82%,显著高于组2(PG+三合激素)(P<0.05);组1处理后发情羊的卵巢状态明显优于其他2组;而且组1的情期受胎率也显著高于组2和组3(P<0.05)。综上可见,CIDR+PG+PMSG是徐淮白山羊最有效的短期同期发情处理方法。

猪UCP3基因第4内含子BccⅠ多态性检测及其与胴体和肉质性状的关联分析

为研究UCP3基因与猪胴体和肉质性状的相关性,采用测序结合PCR-RFLP技术检测UCP3基因内含子4内单核苷酸多态性(SNP),并分析SNP在6个国内外猪种内的多态性分布。结果表明,首次发现一处由A→G突变导致的BccⅠ多态位点。该多态位点基因频率和基因型频率在国内外猪种的分布存在较大差异,在国外猪种中,G等位基因频率较高,地方猪种的A等位基因频率较高。相关性分析结果表明,在长白猪群中,UCP3基因与6～7肋背膘厚有极显著相关性(P<0.01)。在商品猪群内,UCP3基因与6～7肋背膘厚和肌内脂肪含量极显著相关(P<0.01),而且在腰荐结合处,AG基因型个体背膘厚显著高于GG型个体(P<0.05)。因此推测,UCP3基因可能是影响猪脂肪性状的分子育种标记。

乳酸乳球菌电转化方法的优化

乳酸菌转化效率不高是制约其广泛应用的关键因素。为建立乳酸乳球菌的高效电转化方法,主要从电压、电阻、细菌生长时期及电击缓冲液等影响电转化的因素入手,根据每微克DNA获得的转化子的多少,评价乳酸乳球菌的电转化效率。结果显示:当电压为2.0 kV、电阻为400Ω、细菌处于对数生长中期、电击缓冲液为磷酸缓冲液时,电击乳酸乳球菌MG1363的转化效率最高,为1 300个/μg。表明通过优化电转化参数,可以提高乳酸乳球菌的转化效率,为拓展乳酸乳球菌的应用范围奠定基础。

小鼠原始生殖细胞迁移过程中H2A.Z的表达

小鼠原始生殖细胞(PGCs)迁移、增殖、性别分化都受着基因组和DNA表观遗传修饰的调控,H2A.Z与转录激活有关,可能与表观遗传修饰存在联系,通过PGCs单细胞及组织石蜡切片的免疫荧光方法进行研究。结果表明,PGCs在迁移过程中,8.5 dpc时PGCs中不存在H2A.Z;迁移至生殖嵴时H2A.Z主要集中于细胞核,11.5dpc整个PGCs细胞核和细胞质都存在;13.5 dpc雌性的卵母细胞中H2A.Z主要集中于细胞质,而精原细胞中H2A.Z偏向集中于细胞核。综合基因组和DNA表观遗传修饰分析,H2A.Z的表达与其有密不可分的联系。

排卵后老化卵母细胞的染色体形态变化

小鼠排卵后的卵母细胞停滞在MⅡ期,如果此时的卵母细胞未能及时受精,随着在输卵管中停留时间的延长,卵母细胞会逐渐发生老化。这种卵母细胞的老化会导致包括人在内的哺乳动物的胚胎发育异常,所以很有必要研究排卵后卵母细胞的老化机理。本实验主要研究小鼠排卵后的卵母细胞在体内老化过程中的染色体形态变化,发现随着老化时间的延长,有更高比例(65%,hCG后34h)的卵母细胞的染色体呈不对称和松散的状态,进一步研究表明,这种染色体的变化可能与H3K14、H4K16的乙酰化升高,及H3K9的甲基化降低有关。

5-脱氧杂氮胞苷抑制小鼠附植前的胚胎发育(英文)

DNA甲基化在哺乳动物发育过程中有关键作用.在小鼠附植前胚胎发育过程中,DNA甲基化一直处于动态变化过程中.通过将体外受精胚在5-AZA-CdR中持续培养,研究5-AZA-CdR对小鼠附植前胚胎发育的影响,为附植前胚胎发育机理的研究及5-AZA-CdR的毒副作用研究提供试验基础.从原核期加入不同浓度的5-AZA-CdR时,胚胎不能发育到桑椹胚(0.2和1.0μmol/L)和4-细胞胚(5.0μmol/L);从2-细胞期加入时,胚胎阻滞于未致密化的8-细胞(0.2和1.0μmol/L)和3/4-细胞期(5.0μmol/L);而当从4-细胞加入时,虽然胚胎能够发育到早期桑椹胚,但发育比例同对照相比显著降低(P<0.05).进一步检测凋亡、基因组DNA甲基化和整体转录活性,结果显示,高浓度的5-AZA-CdR导致8-细胞和早期桑椹胚发生早期凋亡,而低浓度的5-AZA-CdR引起8-细胞和早期桑椹胚基因组DNA甲基化的降低和转录活性的降低,并且这种降低呈浓度依赖性.所以加入低浓度的5-AZA-CdR时,胚胎的DNA甲基化降低,引起转录活性的降低,进而导致胚胎发育的停滞.

鹅MyoG基因启动子活性及转录调控元件分析

旨在分析鹅MyoG基因启动子活性区域和转录因子,探究该基因的转录调控机制。本研究首先通过PCR扩增泰州鹅MyoG基因5′侧翼区序列1245 bp并对其进行测序和生物信息学分析,其次,构建4个不同缺失片段的双荧光素酶报告载体,转染C2C12细胞系。进一步利用在线软件预测核心启动子区关键转录因子,对转录因子结合位点HNF4(-521~-503 bp)、USF(-379~-370 bp)和E2(-296~-281 bp)进行定点突变并构建突变报告基因载体,在C2C12细胞系内初步鉴定MyoG基因核心转录调控因子。最后,采集70日龄泰州鹅胸肌、腿肌、心、肝、脾、肺、肾和下丘脑组织样,利用荧光定量PCR检测MyoG基因和核心转录调控因子的组织表达谱。结果表明,扩增得到的鹅MyoG基因5′侧翼区序列包含启动子元件;利用双荧光素酶报告载体检测到鹅MyoG基因启动子区-624~-154 bp区域存在关键顺式调控元件;结合定点突变技术初步鉴定USF是鹅MyoG基因核心转录调控元件。组织表达谱研究进一步表明,MyoG和USF基因在鹅8个不同组织中均有表达,且在胸肌、腿肌和心组织中共同高表达(P<0.01)。鹅MyoG基因5′侧翼区具有启动子转录活性,-624~+37 bp是核心启动子区,USF是MyoG核心转录调控因子。试验结果为探究MyoG基因在鹅肌肉发育过程的调控机制提供理论依据。

猪RELMβ基因启动子区克隆及序列分析

本研究旨在分析猪RELMβ基因启动子结构,初步探索RELMβ基因表达调控机制。通过PCR方法扩增RELMβ基因的系列启动子缺失片段并分别克隆到荧光素酶报告基因表达载体p GL3-Enhancer中,经酶切、测序和生物信息学分析,构建包含RELMβ启动子系列截短的荧光素酶报告基因重组质粒,脂质体转染至HT29和293T细胞,应用双荧光素酶活性检测系统检测启动子活性。试验获得了猪RELMβ基因约1 kb的启动子序列,序列比对发现猪和人物种间相似性仅34.9%,猪和小鼠的同源性是82.4%。生物信息学分析预测猪RELMβ基因转录起始位点在-556 bp处,猪和人RELMβ基因启动子存在系列保守的转录因子结合位点,包括Cdx2、SRY、NFKB、NKX-2、c-Myb、GATA-1、GATA-3、C/EBP、MZF1等。细胞检测结果显示,p GL-RELMβ(-574^+215)活性最强,推测在-574^-182 bp位点之间存在RELMβ基因启动子的关键顺式调控元件,这一区域发现SRY、Cdx2、GATA-1和MZF1等关键转录因子结合位点。

猪第一极体核物质参与卵母细胞受精及其胚胎发育的研究

旨在探索猪卵母细胞第一极体核物质能否参与体外受精及其进一步的胚胎正常发育。第一极体(FPB)获自猪卵巢卵泡中卵丘卵母细胞复合体(COCs)体外成熟培养的MⅡ期卵母细胞。存活极体从成熟卵母细胞内分离后采用显微操作术注入去核卵母细胞胞质中。第一极体重组卵母细胞分别采用常规体外受精和单精子胞浆注射法进行受精,来自极体核重组的受精卵进行体外培养,观察和分析其进一步体外卵裂发育的能力。结果显示:极体显微操作重组的成功率约为80%,20%左右的重组卵母细胞于重组后的受精和发育培养过程中退化、崩解;常规体外受精和单精子注射后2-细胞卵裂率分别达到12.9%和29.8%。结论:猪第一极体核物质具有参与卵母细胞受精和进一步胚胎发育的能力。据此推测利用第一极体将有可能繁殖正常仔猪后代。

单色光红光影响家禽繁殖性能的研究进展

光照是种禽生产中重要的环境条件之一,不同波长的光照对家禽的繁殖性能影响不同。文章综述了单色光红光对家禽性腺发育、产蛋性能、产蛋周期的影响,探讨了红光照明在生产中的使用模式,重点论述多巴胺、促性腺激素释放激素和甲状腺激素在介导红光刺激和改善家禽繁殖性能中的作用,为单色光红光在家禽生产中的应用提供理论依据。

免疫抑制素/卵泡抑素对家畜胚胎体外生产效率的提高

在家畜卵母细胞体外成熟培养过程中添加不同浓度的抗抑制素抗体或抗卵泡抑素抗体，通过观察卵母细胞的成熟率、激活后的卵裂率及囊胚发育率，研究免疫抑制素与卵泡抑素对家畜卵母细胞体外发育能力的影响。结果显示：就水牛、奶牛及猪而言，在卵母细胞成熟过程中分别单独添加抗抑制素抗体与抗卵泡抑素抗体均能显著提高卵母细胞的体外成熟与卵裂率，添加的适宜浓度为50-100μg/ml。而添加抗卵泡抑素抗体还能显著提高水牛和猪的囊胚发育率。卵母细胞体外成熟期添加抗抑制素抗体与抗卵泡抑素抗体能显著提高卵母细胞的发育能力，提高早期胚胎的发育数量和质量，为改善家畜胚胎体外发育和生产提供了新方法。

PPARγ2基因外显子1多态性对猪胴体性状的影响

利用PCR-SSCP技术,对约克夏、杜洛克、长白猪、金华猪、碧湖猪和嵊县花猪共6个品种258头猪的PPARγ2基因外显子1进行多态性分析,并采用SPSS程序中GLM模型分析该位点与胴体性状的相关性。研究结果发现编码区175 bp处存在A175G单核苷酸多态。国内外猪种的基因型频率间存在较大差异,在国外种猪中,AA基因型频率较高,国内猪种中AG基因型频率较高。相关性分析结果表明,在长白猪群中,PPARγ2基因与肩部背膘厚、腰荐结合部背膘厚均存在极显著相关性(P<0.01),与6/7th肋背膘厚和眼肌面积均存在显著相关性(P<0.05)。在金华猪群内,PPARγ2基因与肩部背膘厚显著相关(P<0.05)。因此推测PPARγ2基因可能是影响猪胴体性状的潜在分子育种标记。

GDF9/BMP15对卵泡发育的调控

卵母细胞及其紧密连接的卵泡细胞之间的精细调节,促使卵母细胞成熟、受精和胚胎发育。在卵泡发育过程中,除了下丘脑-垂体-性腺轴间的内分泌调节外,卵母细胞源旁分泌或自分泌因子维持发育卵泡内微环境稳态,调节卵母细胞成熟和颗粒细胞增殖。目前发现,这些关键的调控因子主要是TGFβ超家族成员中的生长分化因子-9(GDF9)和骨形态发生蛋白(BMP15)。GDF9/BMP15主要表达于卵母细胞,是卵泡发育必需的细胞因子。论文综述了GDF9/BMP15的结构特点、表达特性、信号通路及其在卵巢中的生物学作用等研究进展。