犬瘟热病毒与犬冠状病毒双重TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立及初步应用

为建立鉴别检测犬瘟热病毒(CDV)和犬冠状病毒(CCoV)的方法,本研究采用PCR方法分别扩增CDV N基因和CCoV S基因,并克隆至pMD18-T载体中构建重组质粒pCDV-N、pCCoV-S,均经PCR和测序鉴定后测定浓度作为质粒标准品。同时针对CDV N基因和CCoV S基因设计特异性引物和TaqMan探针,采用方阵试验对各反应条件的优化,建立了同时检测这两种病毒的双重TaqMan荧光定量RT-PCR方法。利用10倍倍比稀释的质粒标准品按照该方法检测,建立标准曲线,结果显示,两个重组质粒标准品均与各自的Ct值具有良好的线性关系。采用该方法分别检测CDV、CCoV、犬细小病毒、犬传染性喉气管炎病毒2型、犬副流感病毒,评估该方法的特异性;将两种质粒标准品分别10倍倍比稀释并等体积混合后,取108~101稀释度的质粒混合物作为模板,采用该方法检测,评估该方法的敏感性;将两种质粒标准品10倍倍比稀释并等体积混合后,分别取107、105、103稀释度的质粒标准品混合物采用该方法检测,评估该方法的重复性。结果显示,该方法仅能特异性扩增CDV和CCoV,与犬的其他病毒均无交叉反应,特异性较强;对CDV质粒标准品的检测限为5.0×103拷贝/μL,对CCoV质粒标准品的检测限为4.93×103拷贝/μL,敏感性较高;组内和组间的变异系数均小于3%,重复性较好。利用本实验建立的双重TaqMan荧光定量RT-PCR方法和已报道的CCoV RT-PCR及国标规定的CDV RT-PCR方法同时检测采集的100份临床腹泻犬样品,结果显示,共检出35份阳性样品,其中,CDV的阳性检出率为16%(16/100),CCoV的阳性检出率为19%(19/100),阴性样品65份,与CCoV和CDV参考方法的检测结果均一致。本研究建立的CDV和CCoV双重TaqMan荧光定量RT-PCR方法可在40 min内完成检测,且准确、快速、敏感,为CDV和CCoV临床大量样品的快速和特异性鉴别检测提供了有效技术手段。

浅议林业企业文化建设

企业文化是企业生存与持续发展的灵魂和内在动力，林业企业正处在传统林业向生态林业转型、实施二期“天保”工程和《大小兴安岭林区生态保护与经济转型规划》的关键时期，所以，林业企业必须自觉培育和建设具有本企业特色的企业文化，不断提高企业的文化竞争力。这既是建设高素质职工队伍、提高企业管理水平、增强企业凝聚力和市场核心竞争力的需要，又是落实以人为本的科学发展观的需要，也是企业实现“十二五”规划目标的需要。

工厂变压器运行维护及故障处理

近年来,我国电力行业取得了较快的发展,电力变压器作为电力系统中非常重要的设备,其承担着电压转换的重要任务,能够更好地满足不同企业以及工厂对电压的需求.所以需要确保电力变压器运行的安全性,这就需要做好电力变压器的运行维护工作,降低其故障发生率,确保电力变压器使用寿命的提高.文中从电力变压器运行维护的必要性和内容入手,对电力变压器的故障和处理进行了分析,并进一步对电力变压器的检修方法进行了具体的阐述.

深基坑支护结构变形有限元模拟分析

基坑开挖产生的支护结构变形具有空间效应,本文通过 Midas 有限元模拟软件对辽宁营口某深基坑工程进行数值计算。通过分析位移数据,总结在空间效应影响下深基坑支护结构的变形规律。

水貂源高产蛋白酶枯草芽孢杆菌的分离筛选及酶学性质

【背景】开发、筛选优良益生菌菌种是当下畜牧业的研究热点,益生菌的潜在功能也被广为挖掘。【目的】分离、筛选具有良好耐受性且高产胞外蛋白酶的菌株,研究其生物学特性和酶学性质,为后续微生物蛋白酶的制备和微生态制剂的开发提供菌种资源。【方法】采集健康水貂新鲜粪便,配制酪蛋白培养基初筛和优化Folin-酚法复筛,对筛选菌进行生物学特性研究,获得产蛋白酶能力较强、耐受性较优的菌株,并进行常规鉴定和分子生物学鉴定,最后对蛋白酶酶学性质进行研究。【结果】筛选得到一株高产蛋白酶、耐受性较优的芽孢杆菌,经鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),编号为3。在初始发酵培养基条件下,酶学性质研究结果表明,该蛋白酶的最适反应温度为70℃,最适反应pH值为9.0,最佳金属离子激活剂为K^(+),Cu^(2+)和Fe^(2+)对酶活力有明显的抑制作用,在20%浓度的有机溶剂作用时蛋白酶未变性失活。【结论】从水貂粪便中分离获得一株具有良好的生物学特性、酶学性质和碱性蛋白酶活性的枯草芽孢杆菌,为该菌株在实际生产应用中提供了基础保障。

带滴状纵向涡发生器的矩形微通道内流动与传热性能的数值研究

新型滴状纵向涡流发生器(DLVG)结合了矩形和椭圆形结构的优点,在微通道强化传热方面具有重要意义。该文数值模拟了雷诺数(Re)为400~1200范围内带有DLVG的三维微通道模型的流动和传热性能,并与带有矩形小翼纵向涡发生器(RWVG)的通道进行了对比。结果表明,DLVG比RWVG具有更好的局部传热强化能力。并讨论了Re、前端半径(R_(1))、攻角(β)和渐变纵向间距(d_(1)和d_(2))对强化传热的影响。结果表明,不同Re下,综合换热性能(PEC)最佳的前端半径R_(1)不同,R_(1)=0.04 mm的通道在Re=1200时PEC最佳,可达到1.41。与光滑微通道相比,努塞尔数Nu提高了55.15%;与RWVG通道相比,Nu最大增加了7.6%,PEC最大增加了5.2%。随着Re的增大,β越大,Nu越高,f越小,PEC越好,攻角75°时的PEC最高为1.47。纵向涡流发生器前后间距相同时的换热性能最差,d_(1)和d_(2)为5.4 mm和4.5 mm的通道Nu最大以及PEC最佳,在不同Re下,比等纵向间距通道的PEC增加了1.41%~4.55%。变量Re和β的改变对PEC增长率平均值的影响更敏感。