胃癌细胞MKN-45中肿瘤转移相关基因1的泛素化修饰及对其表达的影响

目的 观察胃癌细胞中转移相关基因1（MTA1）是否可被泛素化修饰及其对MTA1表达的影响.方法 将未转染的胃癌MKN-45细胞[Myc-MTA1（-）、HA-Ub（-）]设为对照组,3个实验组MKN-45细胞分别转染入带Myc标记的MTA1质粒[Myc-MTA1（＋）、HA-Ub（-）]和带HA标记的泛素质粒[Myc-MTA1（-）、HA-U（＋）]以及共同转染入该两种质粒的胃癌MKN-45细胞[Myc-MTA1（＋）、HA-Ub（＋）].向每个培养皿内转染2μg质粒,培养24h后即可收获转染细胞,以蛋白酶体抑制剂MG-132处理实验组胃癌细胞MKN-45,以免疫沉淀法、Western blot法等检测MTA1表达水平,并将带Myc标记的MTA1质粒和带HA标记的泛素（HA-Ub）质粒分别转入胃癌细胞MKN-45,设为实验组,未转染的胃癌细胞MKN-45为对照组,检测各组细胞中Myc-MTA1的表达.同时采用流式细胞仪法检测MG-132诱导各组胃癌MKN-45细胞的凋亡.结果 （1）以蛋白酶体抑制剂MG-132处理胃癌细胞MKN-45后,MTA1表达水平显著增加;2、6h分别为（0.78 ±0.15） μg/ml和（1.37±0.33）μg/ml,与对照组比较[（0.28 ±0.09） μg/ml],差异有统计学意义（t=2.134,5.562,P ＜0.05）.（2）免疫共沉淀实验结果显示,6h后,实验组泛素化程度为（77.28±9.38）％,与对照组的（15.41±2.14）％比较,实验组泛素化程度明显增加（P＜0.05）.（3）在胃癌MKN-45细胞[Myc-MTA1（＋）、HA-Ub（＋）]中,可检测到Myc-MTA1可被强烈泛素化,泛素化程度为（64.59±7.61）％,与另外两组比较,差异有统计学意义（P＜0.05）.（3）将MKN-45细胞以siMTA1处理封闭MTA1的表达后,将Myc-MTA1质粒以及HA-Ub质粒转入该细胞,可见当后者存在时Myc-MTA1可被强烈泛素化.转染两种质粒的胃癌MKN-45细胞[Myc-MTA1（＋）、HA-Ub（＋）]凋亡数量显著多于对照组MKN-45 细胞（t =2.436,3.537,P＜0.05）.（4）c-聚腺苷二磷酸核糖聚合酶（PARP）的水平显示MKN-45细胞[Myc-MTA1（＋）、HA-Ub（＋）]凋亡程度显著高于对照组MKN-45细胞（t=1.845,2.374,P＜0.05）.结论 在胃癌细胞中,MTA1是可被泛素化途径修饰的蛋白,其泛素化途径在胃癌的发展与转移中发挥重要作用.