木薯氰苷合成关键酶基因MeCYP79D2的克隆及表达分析

氰苷含量是木薯改良的重要靶标性状,MeCYP79D2是木薯氰苷合成的限速酶基因之一。本研究以食用木薯品种SC9为材料,克隆木薯细胞色素P450酶家族中的MeCYP79D2基因,通过生物信息学软件对其进行分析,利用实时荧光定量PCR检测其在不同木薯种质块根中的表达特性,采用高效液相色谱仪测定氰化物的含量,并分析其与MeCYP79D2基因表达量的相关性。研究结果显示:MeCYP79D2基因编码区序列长度为1625 bp,编码528个氨基酸,属于不稳定脂溶性亲水蛋白,具有38个磷酸化位点;序列比对表明该基因保守性较高;系统进化分析显示MeCYP79D2与橡胶及麻风树关系较近;氰苷含量不同的木薯种质资源块根中MeCYP79D2基因表达量与氰苷含量存在极显著正相关;茉莉酸甲酯处理后,根中MeCYP79D2基因的表达显著上调且氰苷含量显著升高。本研究结果表明MeCYP79D2参与氰苷合成,为解析木薯氰苷生物合成的分子机制研究提供理论基础。

一种新型血液透析导管固定带的临床效果评估

目的 评估新型血液透析导管固定带在临床血液透析中的应用效果。方法 选取2023年5—7月安徽医科大学第二附属医院收治的199例血液透析患者为研究对象。采用自身对照法,2023年5月20日—6月20日给予患者常规胶带(A固定法)固定透析管路,2023年6月21日—7月21日给予患者新型血液透析导管固定带(B固定法)固定透析管路。比较2种固定法的穿刺针/中心静脉导管移位或滑脱情况、固定稳定性以及护士、患者满意度。结果 B固定法的穿刺针/中心静脉导管移位率低于A固定法,差异有统计学意义(P<0.001);2种固定法的穿刺针/中心静脉导管滑脱率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。B固定法的固定稳定性高于A固定法,差异有统计学意义(P<0.001)。患者对B固定法的满意度(有利于活动、舒适度)高于A固定法,差异有统计学意义(P<0.001);护士对B固定法的满意度(有利于清洁、便捷操作)高于A固定法,差异具有统计学意义(P<0.001)。结论 相较于传统胶带固定法,新型血液透析导管固定带能有效固定导管,且安全性较好,可有效提高护士、患者的满意度。

木薯SAP11基因的功能分析

[目的]木薯Manihot esculenta Crantz是全球热带地区重要的粮食作物和经济作物,在生长发育过程中极易遭受低温、干旱、盐碱等非生物胁迫而导致减产。胁迫相关蛋白(Stress-associated protein,SAP)是一类新型的A20/AN1锌指蛋白,在模式作物应对多种非生物胁迫过程中发挥重要作用。目前,SAP基因在木薯应对非生物胁迫中的生物学功能尚不明确。本研究旨在分析木薯SAP家族成员的蛋白结构特征和表达模式,以及MeSAP11的互作蛋白,为进一步解析该家族基因在木薯抗逆中的功能提供理论支撑。[方法]利用生物信息学技术对木薯SAP家族成员的进化关系、蛋白基序信息以及时空表达模式开展系统分析。同时,通过qRT-PCR研究各基因成员在不同组织中的特异表达以及对不同非生物胁迫的响应。进一步运用酵母双杂交结合高通量测序技术获得与MeSAP11相互作用的蛋白及对应生物学通路。[结果]木薯SAP基因家族共6个大类16个成员,该家族成员在木薯根部和叶片中表达量较高,部分家族成员的表达在低温和盐胁迫中显著上调,在干旱、钾饥饿和氮饥饿显著下调。MeSAP11的表达受不同胁迫条件的显著调控,亚细胞定位结果表明MeSAP11蛋白主要定位在细胞核。利用酵母双杂交筛库技术筛选到256个与MeSAP11互作的蛋白,KEGG分析表明这些互作基因主要参与蛋白泛素化降解、内质网蛋白质加工通路等途径,暗示MeSAP11可能通过上述通路发挥功能。[结论]木薯SAP家族大部分成员显著响应低温、干旱、高盐以及缺氮、缺钾胁迫,研究结果为进一步研究MeSAP11在木薯响应非生物胁迫过程中的功能并解析其调控网络奠定了基础。下一步将把MeSAP11基因列为调控非生物逆境变化的候选基因开展深入研究。

CPS及CCI灰阶超声造影成像技术诊断肝脏局灶性病变应用价值

目的 探讨灰阶超声造影成像 (CE GUS)诊断肝占位性病变的应用价值。方法 应用CPS及AD CCI成像技术检查 3 9个肝脏局灶性病变 ,3 2个病灶同期检查基波彩色多普勒增强超声 (CE CDFI)。结果 CE GUS病灶内部血流信号显示率 97.44 % ,高于CE CDFI(P <0 .0 5 )。CE GUS诊断符合率为 92 .3 % (3 6/ 3 9) ,明显高于常规超声检查 (2 3 .1% )及CE CDFI(5 0 % ) ,P <0 .0 5。结论 CPS及CCI灰阶超声造影成像技术能清楚显示肝脏及肝肿瘤血液灌注 ,对肝脏局灶性病变的鉴别诊断有实用价值。

实时超声造影技术诊断肝脏微小局灶性病变的价值

目的：探讨肝脏微小局灶性病变（最大径≤2cm）的实时超声造影诊断价值.材料和方法：对205个≤2cm肝脏局灶性病变分别进行实时超声造影及常规超声检查,将诊断结果分为良性、恶性和不能确定,最终诊断经病理学、同期其他影像及实验室检查证实,并随访10～30个月.结果：恶性肿瘤65个病灶,良性病灶140个.与病理诊断比较,超声造影诊断的敏感性、特异性及准确性分别为85.0%、90.5%及88.5%,常规超声分别为40.0%、47.6%及42.6%.病灶动脉期高增强及门静脉期或延迟期低增强为诊断恶性的重要指标.结论：实时超声造影技术对鉴别诊断肝脏微小（≤2cm）局灶性病变具有重要的临床应用价值.

基因枪转化法在棉纤维细胞中瞬时表达外源基因的研究

试验运用了0 d,1 d的棉胚珠为受体,GUS基因为报告基因,用基因枪直接对胚珠表皮细胞进行轰击。整个表达载体包括两个部分,第一部分是由CaMV35S调控的GUS基因,第二部分是由棉纤维特异表达启动子(RDL1)调控的目标基因,因此目标基因与GUS报告基因能在同一个单纤维细胞中同时表达,从而提供了一个直观的在单纤维细胞中验证目标基因的表达与纤维发育关系的方法。研究中对受体棉花胚珠的发育时间、基因枪的轰击压力、轰击距离及轰击次数等影响转化效率的因素进行了分析优化。结果表明,最佳的转化组合条件是:以开花一天的棉花胚珠为受体,当轰击压力为1100 psi,轰击距离为9cm,轰击次数为2次时可达到最高的转化率,并能观察到稳定的GUS表达。

超声造影诊断胰腺局灶性病变的诊断价值

目的:探讨超声造影诊断胰腺局灶性病变的价值。材料和方法:对140个胰腺局灶性病变进行常规超声及超声造影检查,所有病例均经病理诊断。结果:恶性肿瘤80个病灶,良性病灶60个。超声造影诊断的敏感性、特异性及准确性分别为85.0%、85.0%及85.0%,常规超声诊断分别为62.50%、46.67%及55.71%,超声造影诊断的阳性预测值为93.15%,阴性预测值为87.93%。结论:实时超声造影技术对鉴别诊断胰腺局灶性病变具有较高的临床应用价值。

水分胁迫对不同木薯品种叶片生理生化的影响

木薯作为一种重要的亚热带粮食/能源作物,备受重视。为了探索水分胁迫对不同木薯品种的影响,对3个木薯栽培品种进行了不同梯度的干旱处理,利用相关及判别分析方法研究其相关生理生化指标与木薯抗旱性的关系。结果表明,随着水分胁迫强度的增加,不同木薯品种Fv/Fm有不同程度的降低,测试品种中SC124降低幅度最大,SC5变化最小;ABA含量则有所增强,变化幅度因供试品种而异,SC124变化最为显著,SC5增强幅度最小。本次测试的木薯3个品种的抗旱能力显示,SC5相对较耐干旱,SC124相对不耐干旱。

植物原生质体技术及其应用

原生质体技术是在原生质体分离基础上,进行一系列技术操作,包括原生质体融合、遗传转化、植株再生等。原生质体技术为细胞杂交,新品种培育,及其与有关的细胞、分子和遗传等学科的交叉渗透,提供一种使用范围广、可行性强的技术体系。阐述了植物原生质体的分离培养、遗传转化等关键技术及其应用,认为原生质体技术在高等植物遗传性状的改良及生产实践中有着广阔的应用前景。

UMC-I-C/D型经皮穿刺肝癌凝固治疗用微波天线性能实验研究

目的：探讨国产ＵＭＣＩＣ／Ｄ 型经皮穿刺肝癌凝固治疗用微波天线性能特点。材料与方法：应用该国产天线及同类进口ＴＭＤ１４ＣＢ１０ 天线行离、在体肝实验。结果：国产天线离、在体肝组织凝固形态呈水滴状，凝固长径明显小于进口天线且短轴径线较大，６０ Ｗ３００ｓ 辐射肝组织中心区温度低于进口天线，天线杆温度较进口天线低２０ ℃且不粘连组织。结论：ＵＭＣＩＣ／ Ｄ 型天线对肝组织凝固形态好，凝固效果确切，天线温度低，抗粘性能强。

影响检验分析前血标本质量的因素

近年来,检验结果对临床诊断的影响不断增强,检验结果的准确性也成为医学检验越来越重视的问题。检验分析前质量管理为目前检验全面质量管理最薄弱的环节,涉及人员较多,环节较复杂,较多的细节问题仍需进一步进行探讨、改进。文中从医生、患者、护士、送检人员4个方面进行分析,总结检验分析前血标本质量的影响因素,为今后加强检验分析前质量管理提供参考和借鉴。

香菇ras和gpd启动子的克隆与功能鉴定

以香菇基因组DNA为模板,利用PCR技术克隆了香菇1个ras启动子Lras,2个gpd启动子Lgpd1和Lgpd2。这3个启动子的大小分别为715bp、1056bp和611bp,与已报道的ras和gpd启动子的同源性很强。对这3个启动子的分析结果表明,它们都含有丰富的启动子顺式作用元件。将这些启动子片段分别与GUS基因连接构建了表达载体,并将这些表达载体导入草菇菌丝体中,检测其活性,最终显示3个片段都有启动GUS基因表达的能力,其中Lgpd1启动子活性最强,Lras启动子次之,Lgpd2最弱。

棉花GbGAI2启动子克隆及表达分析

通过染色体步移方法获得棉花GbGAI2基因的上游2378bp启动子序列,并对其进行生物信息学分析。将启动子序列与GUS基因连接,转化拟南芥,并对转化植株进行组织化学分析。结果表明,启动子区域内含有丰富的与光信号途径、激素信号途径(GA/IAA)、逆境胁迫相关等的顺式作用元件。在外施GA条件下,启动子活性增强。通过对启动子表达模式的分析表明,棉花GbGAI2基因在GA信号途径中起很大作用。

低机械指数实时超声造影评价恶性肿瘤治疗后肝内复发转移的临床研究

目的：探讨低机械指数超声造影成像技术定性诊断恶性肿瘤治疗后肝内可疑复发转移病灶的价值.材料和方法：78个肝脏局灶性病变，同期行实时超声造影、CT增强检查，最终诊断经穿刺活检病理证实62个结节，另13个局部治疗后坏死结节及3个增生结节经综合影像及12～34个月随访证实.结果：超声造影诊断的敏感性96.2%，特异性92.3%，准确性94.9%，阳性预测值92.3%，阴性预测值96.2%.70个结节同期CT增强诊断，结果与最终诊断及超声造影诊断的一致性比较无统计学差别.结论：实时超声造影是定性诊断肝局灶性病变的有效方法，尤其对经肝动脉栓塞后碘油沉积病灶残存血流灌注的评判较CT具有优势.

逆境信号下木薯MeMYC2转录因子表达及功能分析

MYC2是茉莉酸信号途径中的关键节点基因,在植物生长发育及逆境信号响应过程中发挥重要作用。本研究基于木薯基因组数据库序列,以木薯‘cv.60444’品种为材料,采用RT-PCR方法同源克隆得到MYC2基因(数据库No.Manes.17G016000),命名为MeMYC2.1。MeMYC2.1基因开放阅读框(ORF)全长2055 bp,无内含子,氨基酸序列中包含典型的bHLH保守结构域;序列比对分析发现MeMYC2与蓖麻MYC2具有较高同源性。外源施加植物激素水杨酸(SA)、茉莉酸甲酯(MeJA)、过氧化氢(H2O2)以及低温胁迫下,木薯叶片中MeMYC2.1的表达被显著诱导。进一步克隆获得MeMYC2.1基因上游1500 bp启动子序列,利用在线数据库PlantCare分析发现,MeMYC2.1启动子序列中不仅含有响应茉莉酸的顺式元件CGTCA/TGACG,还含有低温响应元件LTR及ABA响应元件ABRE。以上研究结果表明,MeMYC2.1可能是植物激素茉莉酸(JA)、脱落酸(ABA)响应低温物胁迫分子网络中的一个节点基因,对其功能的深入研究将有助于探讨JAs在植物低温胁迫应答中的作用机制。

木薯转录因子基因MeHDZ14的克隆与分析

HD-Zip家族基因在植物生长发育和逆境胁迫中起重要作用。为了研究MeHDZ14基因在非生物胁迫(尤其是干旱)应答中的作用,选用对干旱信号反应灵敏、相对耐旱的木薯品种"SC124"作为实验材料,利用RT-PCR克隆了MeHDZ14基因。生物信息学分析发现,MeHDZ14基因编码的蛋白具有典型的HD-Zip保守结构域。将该基因编码的蛋白与GFP融合,亚细胞MeHDZ14:GFP重组蛋白定位于细胞核。同时,酵母Y187中的转录自激活试验结果也表明,MeHDZ14蛋白具有明显转录自激活功能。推断MeHDZ14是一个典型的HD-Zip I转录因子。MeHDZ14启动子区具有多个ABA响应元件ABRE(ABA response element)。基因差异表达分析结果表明,MeHDZ14基因在叶片和根中的表达受干旱胁迫的诱导,并对外源ABA具有明显的响应。因此,认为MeHDZ14基因通过ABA依赖信号传导途径参与调控木薯干旱响应。此外,还发现MeHDZ14基因的编码区虽然存在数个SNP,但表现出高度保守性,且在不同木薯品种中的表达对干旱胁迫均有明显的响应,为进一步研究该基因的功能奠定了基础。

动脉粥样硬化实验兔血脂异常对非对称性二甲基精氨酸和C反应蛋白的影响

目的观察高脂饮食复制实验性兔动脉粥样硬化(AS)模型过程中血脂异常对血清非对称性二甲基精氨酸(ADMA)、C反应蛋白(CRP)水平的影响,探讨高脂血症引起AS的可能机制。方法 20只日本大耳白兔给予普通颗粒饲料喂饲1周后,随机分为对照组(普通颗粒饲料喂饲12周)、模型组[高脂饲料(1%胆固醇+8%猪油+普通颗粒饲料)喂饲12周]。实验第4、8、12周末取血行生化检测,实验结束后取主动脉全长标本行病理分析。结果与对照组比较,模型组血清TC、TG、LDL-C、CRP、ADMA、内皮素水平增高,NO、HDL-C浓度降低(P<0.01)。模型组主动脉内膜有不同程度的脂质斑块形成。结论血脂异常可通过炎症反应损伤内皮功能,从而引起AS的形成。

阿司匹林对兔动脉粥样硬化形成的影响

24只日本大耳白兔普通颗粒饲料喂饲1周后,随机分为正常组(普通饲料喂养)、高脂组(高脂饲料喂养)、阿司匹林组(高脂饲料喂养同时口服阿司匹林),共12周。实验结束时取血测定血脂、一氧化氮(NO)、内皮素(ET)、非对称二甲基精氨酸(ADMA)、C反应蛋白(CRP),取主动脉全长标本作病理分析。发现与正常组比较,高脂组动脉壁弥漫性隆起,内膜含大量泡沫细胞,主动脉斑块/内膜面积比显著增加;TC、TG、LDL-C、ADMA、ET、CRP含量升高,HDL-C降低,NO水平显著降低。阿司匹林组除血脂水平外,其他变化明显轻于高脂组。提示阿司匹林可能通过改善内皮功能和抗炎,抑制动脉粥样硬化形成。

橡胶树原生质体的分离及红色荧光蛋白的瞬时表达研究

分离巴西橡胶树松散愈伤组织原生质体,建立目标基因在橡胶原生质体的瞬时表达系统。以巴西橡胶树松散愈伤组织为材料,酶解分离得到高纯度原生质体,通过电击介导的转化方法,将编码红色荧光蛋白(RFP)的植物表达载体转入原生质体中,用激光扫描共聚焦显微镜检测原生质体中RFP的表达情况。初步建立了橡胶原生质体瞬时表达系统。