基于HMGB1/NF-κB/NLRP3轴探讨褪黑素对氧诱导视网膜病变的保护作用

目的观察褪黑素(melatonin,Mel)对新生小鼠氧诱导视网膜病变(oxygen-induced retinopathy,OIR)的保护作用,并探讨HMGB1/NF-κB/NLRP3轴在其中的作用。方法7日龄C57BL/6J新生小鼠随机分为对照组、模型组(OIR组)及Mel处理组(OIR+Mel组),各组n=9。采用高氧诱导法制备OIR模型。苏木精-伊红染色和视网膜铺片法检测视网膜结构和新生血管;免疫荧光染色法检测HMGB1/NF-κB/NLRP3轴相关蛋白和炎性因子及淋巴细胞抗原6G表达;比色法检测髓过氧化物酶活性。结果OIR组视网膜结构被破坏,出现大片无灌注区和新生血管,OIR+Mel组可见破坏的视网膜结构改善,新生血管和无灌注区减少。与对照组相比,OIR组HMGB1/NF-κB/NLRP3轴相关蛋白和炎性因子表达升高(均P<0.05),淋巴细胞抗原6G表达和髓过氧化物酶活性升高(均P<0.05);Mel处理后,上述各指标降低(均P<0.05)。与对照组相比,OIR组视网膜中褪黑素受体表达降低;Mel处理后,褪黑素受体表达较OIR组升高(均P<0.05)。结论Mel可能通过抑制HMGB1/NF-κB/NLRP3轴减轻OIR新生小鼠视网膜损伤,且可能通过褪黑素受体途径发挥作用。

LRP、GST-π在肝细胞癌中的表达及意义

目的:探讨LRP、GST-π在肝细胞癌中的表达及其与临床病理特征的关系。方法:应用RT-PCR和免疫组织化学方法检测LRP和GST-πmRNA及蛋白在34例的肝细胞癌、19例正常肝组织中的表达。结果:LRP和GST-πmRNA的表达在肝癌组为0.53±0.28、0.75±0.19,正常肝组织组为0.22±0.10、0.26±0.12,差异有统计学意义(P<0.05)。免疫组化结果显示,LRP和GST-π的阳性表达率在肝癌组为55.88%、67.65%,在正常肝组织组为21.05%、31.58%,差异有统计学意义(P<0.05)。LRP、GST-πmRNA和蛋白在肝癌组的表达高于正常肝组织组,且低分化(Ⅲ、Ⅳ级)肝癌组织的表达高于高分化者(Ⅰ、Ⅱ级)(P<0.05),LRP与GST-π之间的表达无线性相关。结论:在肝细胞癌中存在原发性多药耐药现象,且多种耐药机制并存。LRP、GST-π在肝细胞癌中高表达,且随着肿瘤分化程度的增高而降低。

ABC转运蛋白在肝细胞癌中的表达及意义

目的:探讨P-gp、MRP1、BCRP等ABC转运蛋白在肝细胞癌中的表达及其与临床病理特征的关系。方法:应用RT-PCR和免疫组织化学方法检测P-gp/MDR1、MRP1、BCRP等mRNA及蛋白在34例的肝细胞癌、19例癌旁肝组织中的表达。结果:MDR1、MRP1、BCRP等mRNA在肝癌组的相对表达水平分别为1.15±0.24、0.64±0.33、1.07±0.32,在癌旁肝组织组的相对表达水平分别为0.36±0.14、0.19±0.06、0.31±0.09。MDR1、MRP1、BCRP在肝细胞癌中低分化组(Ⅲ、Ⅳ级)为1.38±0.26、0.73±0.35、1.34±0.21,在高分化组(Ⅰ、Ⅱ级)分别为0.74±0.32、0.30±0.11、0.45±0.13。P-gp、MRP1、BCRP等的阳性反应产物主要分布于细胞膜和胞浆内;在肝癌组和癌旁肝组织组的阳性表达率分别为82.35%、58.82%、79.4l%和42.11%、26.32%、36.84%。P-gp、MRP1、BCRP在肝细胞癌中低分化组(Ⅲ、Ⅳ级)的阳性表达率分别为100%、81.25%、100%,在高分化组(Ⅰ、Ⅱ级)的阳性表达率分别为66.67%、38.89%、61.11%。RT-PCR及免疫组织化学均显示,P-gp、MDR1、MRP1、BCRP mRNA和蛋白在肝癌组的表达均高于癌旁肝组织组,且在低分化(Ⅲ、Ⅳ级)肝癌组织的表达高于高分化者(Ⅰ、Ⅱ级),差异有统计学意义(P<0.05)。MDR1、MRP1、BCRP之间的表达无线性相关。结论:在肝细胞癌中存在原发性多药耐药现象,且多种耐药机制并存。P-gp、MDR1、MRP1、BCRP等与肝细胞癌的耐药有关,在肝癌组的表达高于癌旁肝组织组,且在肝细胞癌中的表达随着肿瘤分化程度的增高而降低,可作为肝细胞癌多药耐药性作用的靶点。

N-乙酰-L-色氨酸减轻H_2O_2诱导小鼠海马神经元细胞凋亡

目的探讨N-乙酰-L-色氨酸(L-NAT)对海马神经元(PHN)缺血低氧损伤的影响。方法用600μmol/L H2O2诱导PHN制备海马神经元细胞凋亡模型,采用免疫荧光染色检测caspase-3的表达,Rhodamine 123染色检测线粒体膜势能(ΔΨm)的改变,锥虫蓝染色检测细胞存活率,比色法检测caspase-3、乳酸脱氢酶(LDH)的活性,Westernblot检测caspase-3及凋亡诱导因子(AIF)和细胞色素C(CytC)等线粒体促凋亡因子在胞质蛋白和线粒体蛋白中的表达。结果 L-NAT可减轻H2O2所引起的细胞形态的死亡、存活率的降低、LDH的释放、caspase-3的激活、线粒体膜势能的丧失及AIF和CytC等线粒体促凋亡因子的释放。结论 L-NAT能通过抑制caspase依赖性和非依赖性的细胞凋亡途径,减轻H2O2诱导的小鼠海马神经元的细胞损伤。

Cx26和Cx43在大鼠胚胎肝发育过程中的时空表达

目的:观察Cx26和Cx43在大鼠胚胎肝发育过程中的时空表达,以了解其在肝脏发育过程中的作用。方法:用E8d～E20d及P1d的SD大鼠,石蜡切片,免疫组化染色,光镜下观察Cx26和Cx43在大鼠发育E1d～P1d过程中的表达。结果:①Cx26在E15d开始表达,此时只有少数体积大、核大的肝细胞呈Cx26阳性反应,阳性反应产物见于肝细胞浆及细胞核。②E16d开始出现少量Cx26呈弱阳性的造血细胞,E17d和E18d反应阳性强度增加,至E20d时反应消失。③E14d开始出现Cx43呈弱阳性的肝实质细胞,E15d～P1d多数肝细胞浆呈Cx43强阳性,P1d少数肝细胞核呈Cx43阳性反应。④E18d～P1d肝内可见呈Cx43阳性的造血细胞。结论:①Cx26与肝细胞的生长分化关系不大,而与肝细胞的技能分化密切相关;Cx43与肝的结构发育和成熟分化相关;Cx26和Cx43均可能与肝内造血细胞与肝实质细胞之间的信息传递有关。②胚胎肝组织中Cx26和Cx43呈不同表达状态,推测可能是由于胚胎肝细胞间、间质细胞间、肝细胞和间质细胞间以及胚胎肝细胞与造血细胞间装配的缝隙连接通讯通道结构有所不同所致。

HepG2及其克隆形成细胞端粒酶活性的异质性研究

目的研究端粒酶在肝癌细胞株HepG2及其克隆形成细胞中的表达,探讨不同增殖能力的肝癌细胞中端粒酶活性的异质性,为肝癌的诊断以及治疗提供新的思路。方法利用软琼脂克隆形成实验富集分离人肝癌HepG2细胞的克隆形成细胞;常规培养HepG2及其克隆形成细胞,利用免疫细胞化学、Western blotting和RT-PCR检测hTERT蛋白和mRNA在HepG2细胞及其克隆形成细胞中表达的异质性。结果①HE染色显示,克隆形成细胞的胞核较HepG2细胞大,核仁明显;细胞伸出较多的细长突起,并连接形成网状。②免疫细胞化学染色显示,hTERT在HepG2细胞的表达以细胞质为主,克隆形成细胞则以细胞核为主。③Western blotting和RT-PCR结果显示,克隆形成细胞中hTERT蛋白质和mRNA的表达均高于HepG2细胞。结论①hTERT在HepG2细胞及其克隆形成细胞中的表达存在异质性,且在克隆形成细胞中表达较高。②hTERT在HepG2细胞及其克隆形成细胞中的表达模式提示克隆形成细胞具有肝癌干细胞的特征。

视神经管减压术的解剖与临床研究进展

视神经损伤是头部外伤的严重并发症，其发生率占头部外伤的0．5％～5％。由于解剖结构的特征，视神经损伤主要发生在视神经管内段。目前，早期应用大剂量皮质激素和视神经管减压术仍是治疗外伤性视神经损伤的主要手段。临床上，视神经管减压术的人路方式较多，本文对视神经管减压术的术式及解剖学基础进行综述。

麻醉解剖学课程思政提升医学本科生岗位胜任力的研究

目的探讨麻醉解剖学课程思政的引入与提升麻醉学本科生岗位胜任力的关系和实现“三全育人”和“铸魂育人”理念的新思路。方法选取2018年9月—2020年5月潍坊医学院2016级麻醉学专业90名本科生分为两组:对照组(45名)和教改组(45名)。对照组的教学内容不包括特别设计的课程思政元素,教学流程与教改组相同。教改组接受同质性专业课教学内容和精心设计的课程思政元素。两组使用统一的教学反馈和评价系统,以评估受试学生的学习态度和岗位胜任力的变化。结果与对照组相比,教改组的学习态度中的自我学习能力信心、从医环境满意度明显改善,差异有统计学意义(P<0.05);岗位胜任力的医学知识、沟通能力、团队意识、科学思维、人文素质以及课程成绩(代表综合能力)明显提升,差异有统计学意义(P<0.05);但操作技能、健康保健以及信息管理差异无统计学意义(P>0.05)。教改组的职业能力相关成绩高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论在麻醉解剖学中合理引入思政元素,可以帮助医学本科生更好地理解医学领域的职业道德和社会责任,可以明显提升麻醉本科生的人文素质和学习态度。同时,还可以帮助医学本科生更好地认识和理解患者的诉求,提高医患沟通和协作能力。进一步推广这种麻醉解剖学课程思政的教学模式可以提高医学本科生的岗位胜任力。

肝癌多药耐药中药逆转剂的研究进展

多药耐药(MDR)是肿瘤化疗失败的主要原因,寻找高效、低毒的肝癌逆转剂已成为肝癌治疗领域的研究热点,现就中医药在逆转肝癌MDR方面的研究进展作一综述。

N-乙酰-L-色氨酸具有对新生鼠脑缺血/缺氧损伤的保护作用

目的探讨N-乙酰-L-色氨酸(L-NAT)对新生鼠脑缺血/缺氧损伤的保护作用。方法出生第7天的沙土鼠90只,随机分为正常对照组、缺血/缺氧组和L-NAT组。制备脑缺血/缺氧损伤模型,L-NAT组在造模前30min腹腔注射L-NAT(5mg/kg)。用Fluoro-Jade B(FJB)染色法观察细胞的死亡情况;用免疫荧光染色、Westernblotting观察活化的Caspase-3和Caspase-9在各组的表达。结果 L-NAT可使缺血/缺氧损伤后FJB阳性细胞数量减少,并抑制缺血/缺氧后Caspase-3和Caspase-9的活化。结论 L-NAT对新生鼠脑缺血/缺氧损伤动物模型具有保护作用。

人胚胎肝干细胞的形态特点

目的:观察胚胎发育早期肝干细胞的形态特征、时空分布及分化,以探讨肝干细胞的生物学特征．方法:运用发育第3-12 wk人胚标本47例(其中 3．5 wk各8例;6-8 wk各5例,9-12 wk各2例),石蜡切片,连续切片,免疫组化染色,光镜下观察人胚肝及肝干细胞的发育及其AFP、c-Met和 CK19的时空表达．结果:发育第3 wk,肝芽形成,第4 wk形成肝索,第5 wk出现原始肝血窦．第3-5 wk人胚肝芽和肝索细胞排列紧密,较小,形态不规则,核圆形或卵圆形,核质比例大,核深染,胞质颜色较淡,偏蓝色,显示出幼稚细胞的形态学特征,并呈甲胎蛋白(α-Fetoprotein,AFP)、c-Met 阳性反应．第6 wk,肝索内出现了体积大、核大、淡染的细胞,呈AFP、c-Met阴性反应．随胚龄增加,这类细胞数量增加．10-12 wk． AFP、c-Met阳性细胞主要分布于汇管区周围． CK19阳性反应在7 wk时开始出现于一些与 AFP、c-Met阳性反应的细胞形态类似的肝索细胞中．10-11 wk时,CK19阳性反应主要位于汇管区附近的肝索细胞、胆管板细胞及胆管上皮细胞,12 wk时,CK19阳性信号仅见于胆管板和胆管上皮细胞．此时所有的胆管板细胞及胆管上皮细胞均呈AFP、c-Met和CK19阳性．结论:人胚发育3-5 wk肝实质由肝干细胞组成,其表型为AFP+/c-Met+．6 wk,肝干细胞开始向肝细胞系分化,7 wk向胆管系分化,10-12 wk,肝干细胞主要局限于汇管区周围的肝索, 与成年肝中卵圆细胞(成年肝干细胞)的分布一致．AFP+／c-Met／+CK19+细胞可能为胆管祖细胞．

胸导管的引流途径与左锁骨上淋巴结肿瘤转移机制探讨

目的:探讨胸导管的淋巴回流和左锁骨上淋巴结肿瘤转移的机制。方法:⑴在50具成人标本上对左锁骨上淋巴结进行解剖和观察。⑵在49具胎儿尸体和5只犬,用淋巴管间接注射法,解剖胸导管和显色淋巴结。结果:左锁骨上淋巴结以椭圆形为多,占67%,圆形淋巴结占33%。淋巴结数目为(3.88±1.36)个(1￣8个)。左锁骨上淋巴结分为内外侧两部分,内侧部分位于锁骨上三角内,占58.20%;外侧部分位于肩胛舌骨肌下腹与斜方肌前缘之间,占41.80%。胸导管借侧支与周围淋巴结相连。结论:左锁骨上淋巴结主要位于锁骨上三角内,胸导管侧支、淋巴结及其输出淋巴管构成胸导管的侧副淋巴回流经路。

胎肝滤液诱导骨髓间充质干细胞向肝细胞分化

目的探讨胚胎肝组织滤液定向诱导大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)分化为肝细胞的诱导条件,为肝组织工程提供新的种子细胞来源。方法在体外培养体系中加入胎肝滤液,模拟体内肝脏微环境,诱导BMSCs向肝细胞定向分化,以免疫细胞化学检测肝细胞标志物;PAS检测糖原表达;靛青绿染色检测转化细胞的分化程度;测定细胞培养上清液中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)的含量以检测其功能状态。结果BMSCs经胎肝滤液诱导14d时细胞呈现多角形、卵圆形或圆形细胞的特征性改变;甲胎蛋白(AFP)和白蛋白(ALB)免疫反应、PAS反应和吲哚靛青绿(ICG)摄入实验及上清液中ALT、AST、ALP等酶均在诱导的第7天开始出现,AFP和ALB免疫反应在21d时达高峰;PAS反应和ICG摄入实验随着时间的延长而增强;上清液中的各个酶在14d达高峰,之后呈下降趋势。结论胎肝滤液可诱导BMSCs形成具有肝细胞形态和功能特点的细胞。

HepG2细胞在不同琼脂糖浓度下克隆形成能力的比较

目的:探讨分离细胞克隆的最佳细胞密度和最适琼脂浓度,为肿瘤干细胞的筛选提供更广阔的思路.方法:将HepG2单细胞悬液与10g/L的琼脂糖相混合,在2g/L(A组)和3g/L(B组)琼脂中接种不同密度的HepG2细胞,14d后观察克隆形成.结果:100-1000个/孔的各个实验组中,A组细胞的克隆数高于B组,差异有统计学意义(t=4.36,P<0.05);在细胞密度为100-500个/孔时,A、B组细胞克隆形成率随着细胞密度的增加逐渐增加;600-1000个/孔,A、B组均随着细胞密度的逐渐加大,克隆形成率呈现下降趋势.结论:在进行软琼脂克隆形成实验时,可以采用2g/L的上层琼脂浓度,并采用10g/L的琼脂糖凝胶作为储备胶,HepG2细胞在500个/孔时的克隆形成率最高.

肝细胞核因子的研究进展

肝细胞核因子是调节肝脏内基因特异性表达的一类转录因子,这些转录因子及其相互作用构成的复杂调控网络,精确地控制着肝脏的发育和肝细胞的功能。深入研究肝细胞核因子在胚胎发育和肝癌发生中的作用,可以为胚胎发育的基因调控和寻找更有效的肝癌诊断标志物、治疗靶点提供新思路。

场域视角下的局部解剖学翻转课堂教学改革初探

以提升医学生的岗位胜任力为导向,强调发挥学生自主学习能力和教师对学生学习的帮助及促进作用,从场域视角出发构建一个科学合理的形成性评价体系,为进行医学专业课程教学改革提供方向和指导,进而全面提高基础医学教育教学的质量。

视神经损伤后视网膜中GAP-43的表达及MDA、NO和ATPase的测定

目的通过对视神经损伤后,视网膜中生长相关蛋白-43(GAP-43)的表达及丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)、三磷酸腺苷酶(ATPase)含量变化的分析,探讨上述物质在视神经损伤中的变化及作用。方法建立家兔视神经损伤的动物模型,利用免疫组织化学方法观察管内段视神经损伤后GAP-43的表达。利用生化分析方法测定视网膜中MDA、NO、ATPase的含量。结果视神经损伤后3d,可在视网膜的切片中看到GAP-43表达阳性的细胞,位于RGCs层,其胞体染成棕黄色,胞核无色;伤后5d阳性细胞增多,颜色加深;伤后7d阳性细胞数和积分光密度值达最高峰;伤后14d阳性反应下降,阳性细胞数下降,染色变浅。视神经损伤后1d视网膜MDA含量较对照组显著升高(P<0.01),第5天达到高峰,此后逐渐下降,至伤后14d仍高于对照组(P<0.05)。NO含量在伤后3d亦较对照组显著升高(P<0.05),于伤后5d达到高峰,伤后14d仍高于对照组(P<0.01)。ATP酶活性于伤后第1天d开始显著降低(P<0.01),5d后逐渐升高,伤后14d仍低于对照组(P<0.05)。MDA的含量与NO呈正相关(r=0.8644,P<0.01);ATP酶的活性变化与NO呈负相关(r=-0.9639,P<0.01),ATP酶的活性变化与MDA亦呈负相关(r=-0.9018,P<0.01)。结论脂质过氧化作用、NO毒性作用可能参与了视网膜的损伤过程。

肝总动脉起点伴腹腔干分支异常1例

作者在局部解剖学教学过程中，在一例老年男性尸体标本上发现其肝总动脉起始部位及腹腔干分支变异，现报道如下：

Wnt信号通路在HepG2细胞株及其克隆形成细胞中表达的异质性

目的:研究Wnt信号传导通路的关键因子β-catenin和COX-2在肝癌细胞株HepG2及其克隆形成细胞中的表达,探讨Wnt信号传导通路在不同增殖能力细胞中表达的异质性.方法:以HepG2细胞为研究对象,采用软琼脂克隆形成实验筛选克隆形成细胞,应用RT-PCR、免疫化学和Westernblot等技术,检测Wnt信号传导通路的关键因子β-catenin和COX-2在肝癌细胞株HepG2及其克隆形成细胞中的表达.结果:β-cateninmRNA和蛋白质在克隆形成细胞中的表达水平高于HepG2细胞(0.905vs0.549;1.021vs0.700;均P<0.05).β-catenin的阳性信号在HepG2细胞中主要分布于细胞质,克隆形成细胞中主要分布于细胞核.COX-2mRNA和蛋白质在HepG2细胞中的表达高于克隆形成细胞(0.857vs0.527;0.731vs0.434;均P<0.05).大多数HepG2细胞中表达COX-2蛋白,阳性反应沉淀物主要位于细胞质,少数克隆形成细胞中有COX-2蛋白弱表达.结论:Wnt信号传导途径的关键因子β-catenin和COX-2与肝癌分化程度相关.β-catenin和COX-2等Wnt信号传导通路的关键因子在肝癌细胞HepG2及其克隆形成细胞的分布模式支持克隆形成细胞具有肝癌干细胞的特征.