基于牛支原体P48蛋白间接ELISA检测方法的建立

为了建立一种准确快速的牛支原体(Mycoplasma bovis)抗体检测方法,对牛支原体P48蛋白进行原核可溶性表达,采用SDS-PAGE、Western blot对蛋白进行鉴定,将鉴定正确的P48重组蛋白作为抗原,对影响ELISA的各个因素进行方阵优化,建立间接ELISA检测方法,对其特异性、敏感性、重复性进行测试,并进行临床样品检测。结果显示:抗原包被浓度为5μg/mL,4℃包被过夜;10%马血清为最佳封闭液,封闭时间为2 h;一抗最佳稀释度为1∶160,孵育时间为1 h;酶标二抗最佳稀释度为1∶12 000,孵育时间为30 min;最佳显色时间为20 min。表达纯化的P48蛋白可以与牛支原体血清、乳样发生特异反应,建立的间接ELISA方法具有良好的敏感性、特异性和重复性,与商品化牛支原体ELISA抗体检测试剂盒总体符合率为91.11%。结果表明,本研究建立了一种特异性、敏感性、重复性良好的牛支原体抗体间接ELISA检测方法,为牛支原体病防控及抗体水平检测提供了一种有效方法。

禽腺病毒血清4型和8b型串联截短Fiber2-Fiber蛋白在毕赤酵母中的优化表达

【目的】在毕赤酵母中构建禽腺病毒(FAdV)血清4型和8b型串联截短Fiber2-Fiber蛋白表达系统,并探索适宜的表达条件。【方法】以前期构建的重组质粒pCold-Fiber2-Fiber为模板,用PCR法扩增Fiber2-Fiber片段,连接pPICZαA载体。经双酶切和测序鉴定后的阳性重组质粒pPICZαA-Fiber2-Fiber电转化毕赤酵母GS115。经MD平板和不同浓度Zeocin抗性筛选后进行PCR扩增和测序鉴定得到阳性菌株;用甲醇诱导表达阳性菌株,72 h后收集蛋白上清进行SDS-PAGE和液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)鉴定。采用单因素变量法对不同pH(5.0、6.0、7.0和8.0)、甲醇浓度(0.5%、1.0%、1.5%和2.0%)、时间(24、48、72和96 h)进行表达条件优化,用SDS-PAGE鉴定,并用间接ELISA和Western blotting验证重组蛋白的反应原性。【结果】成功构建了重组质粒pPICZαA-Fiber2-Fiber,对表达72 h后的上清进行SDS-PAGE发现1条约70 ku的特异条带,经LC-MS/MS鉴定为目的蛋白。串联截短Fiber2-Fiber蛋白的最优诱导条件为pH 6.0、1%甲醇、诱导时间72 h。间接ELISA和Western blotting结果显示该重组蛋白能与FAdV-4和FAdV-8b阳性血清特异性结合。【结论】Fiber2-Fiber串联截短蛋白可在毕赤酵母中稳定表达并具有良好的反应原性,为禽腺病毒双价亚单位疫苗的研发奠定基础。

水管体制改革的经验总结与建议

水管体制改革后使得水管单位和维修养护单位事企分开,产权清晰,责权明确,职工的工作积极性得到提高,工程管理向明确化、规范化、社会化、正规化转变,充分显示出改革的良好效果。总结了水管体制改革运行以来的状况,并提出了几点建议。

乡镇畜牧兽医站改革与发展初探

乡镇畜牧兽医站，是国家设在基层的全民所有制事业单位，是县畜牧兽医行政主管部门的派驻机构，是县动物卫生监督所驻地方的执法机关，接受县畜牧兽医主管部门和当地乡镇人民政府双重领导。正所谓“上面千条线，下面一根针”，作为直接面对农村养殖户服务的基层非营利性事业单位，乡镇畜牧兽医站就是穿插、编织现代畜牧业发展蓝图的“针头”。

牛病毒性腹泻病毒E_(60~145aa)^(rns)片段可溶表达及抗体间接ELISA检测方法的建立

为建立牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)抗体间接ELISA检测方法,本研究对山东地区规模化奶牛场BVDV主要流行亚型的E^(rns)蛋白进行表位分析,原核可溶表达优势抗原表位片段E_(60~145aa)^(rns),经Western blot及LC-MS/MS鉴定后作为ELISA包被抗原,对影响ELISA试验的各个因素进行优化,并进行特异性、敏感性、重复性试验等。结果显示,间接ELISA方法优化后的条件为:0.25μg/mL抗原包被37℃2 h后4℃过夜,10%马血清封闭时间1.5 h,1∶5稀释一抗孵育1.5 h,1∶8000稀释二抗孵育60 min,显色25 min。该方法特异性、灵敏性及重复性良好,与商品化BVDV抗体检测试剂盒总体符合率为88.04%,符合率良好。本研究建立了一种特异性、灵敏性及重复性良好的BVDV抗体间接ELISA检测方法,为山东地区BVDV防控及临床检测提供了一种有效工具。

鱼类非特异性免疫与免疫刺激剂研究新进展

随着集约化养殖技术的应用，养殖业规模突飞猛进。使养殖鱼类的感染儿率大大提高，造成养殖病害发生，严重困扰着养殖业的前进步伐。近年来，随着研究的深入，一类新型的绿色鱼药-免疫增强剂被广大学者关注。其主要作用于鱼类的非持异性免疫因子，达到防病、抗病的目的。

猪口蹄疫的鉴别诊断与防控措施

猪口蹄疫病毒分为A型、O型、c型、南非1（SAT1）、南非2（SAT2）、南非3型（SAT3）和亚洲1型（Asia1）等7个主型，

小反刍兽疫的诊断与防控

小反刍兽疫（PPR）是由小反刍兽疫病毒引起的一种以发热、眼、鼻分泌物、口炎、肺炎和腹泻（偶尔出现便血）为特征的高度接触性传染病,专门感染山羊、绵羊、野羊、驴等小体型的反刍兽,牛等大型反刍动物虽也可感染病毒,但一般不出现临床症状。OIE将其列为A类疫病,该病一年四季均可发生,多发于多雨和干燥寒冷季节。

鱼类非特异性免疫与免疫刺激剂研究新进展

随着集约化养殖技术的应用，养殖业规模突飞猛进。使养殖鱼类的感染几率大大提高，造成养殖病害发生，严重困扰着养殖业的前进步伐。近年来，随着研究的深入，一类新型的绿色鱼药——免疫增强剂被广大学者关注。其主要作用于鱼类的非特异性免疫因子，达到防病、抗病的目的。

牛病毒性腹泻病毒可视化一步RT-LAMP检测方法的建立

为建立可视化一步RT-LAMP检测牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的方法,根据GenBank中的BVDV的5′UTR序列,设计2组RT-LAMP引物,经过反应温度、反应时间、Mg^(2+)和甜菜碱的终浓度的优化,特异性及灵敏性试验,对3种常用显色指示剂钙黄绿素-MnCl_(2)、羟基萘酚蓝和中性红的显色效果进行评估,并使用商品化ELISA试剂盒与本方法进行对照试验。结果显示,经优化本方法在66℃30 min即可完成反应,采用中性红作为显色指示剂,检测BVDV可产生特异阳性反应;对BVDV RNA检测下限最低达0.021 pg/μL;对13份临床样品检测结果与商品化ELISA检测试剂盒相符率100%。结果表明,所建立的BVDV可视化一步RT-LAMP检测方法的特异性、灵敏性较好,可为BVDV临床快速检测提供帮助。

班主任工作经验谈

班主任是班集体的领导者、管理者、组织者和教育者,是学校领导者实施教育教学工作计划的得力助手,是学生健康成长的引路人,是沟通学校和家庭、社会的桥梁.,班主任的责任不但重大,而且更辛苦。他对于培养优秀的班集体,树立良好的校风,都是很重要的。因此,对班主任的工作绝不能轻视。班级的好坏,很大程度上取决于班主任工作能力的高低和工作方法是否科学。一、掌握学生的基本情况是班主任工作的基础班主任从接手一个班级。