大豆核因子GmNF-YA13基因的克隆及功能分析

【目的】探究大豆核因子GmNF-YA13基因在大豆应对非生物胁迫中的生物学功能,为GmNF-YA13基因在抗逆育种中的应用奠定基础。【方法】以大豆北豆9号和烟草NC89的种子为供试材料,将大豆培养至第一片三出复叶展开后,分别进行干旱、高盐、低温和脱落酸(ABA)处理,通过实时荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)对GmNF-YA13在以上4种非生物胁迫下的相对表达量进行检测,并对GmNF-YA13进行克隆及生物信息学分析,将GmNF-YA13转化烟草,并对转基因烟草中抗逆相关基因(NtABA2、NtOsmotin、NtAPX2、NtSOD、NtCAT1和NtCaMK3)的表达量进行qRT-PCR检测。【结果】干旱、高盐、低温和ABA处理均能不同程度诱导GmNF-YA13的表达,其中干旱胁迫和ABA处理对GmNF-YA13的诱导效果尤为显著。GmNF-YA13位于大豆基因组13号染色体,开放阅读框915 bp,编码含有304个氨基酸的蛋白质,该蛋白质分子量75.14 ku,等电点5.10。GmNF-YA13蛋白序列包含一个保守的DNA结合结构域。蛋白系统进化分析结果表明,GmNF-YA13与GmNF-YA7和拟南芥AtNF-YA1亲缘关系较近。启动子顺式作用元件预测分析结果表明,GmNF-YA13启动子区含有3个ABA响应元件ABRE、1个厌氧诱导元件ARE、1个防御和胁迫反应元件TC-rich repeats及1个干旱诱导的MYB转录因子结合位点MBS。GmNF-YA13在大豆叶片中的相对表达量最高。同时构建GmNF-YA13植物表达载体,并将GmNF-YA13转化烟草,获得3株转基因烟草植株。转基因烟草中抗逆相关基因表达量检测结果显示,转基因烟草中的NtABA2、NtOsmotin和NtAPX2相对表达量均显著高于野生型烟草,转基因烟草中NtSOD、NtCAT1和NtCaMK3的相对表达量与野生型烟草差异不显著。【结论】GmNF-YA13与大豆干旱、高盐、低温等非生物胁迫之间关系密切,GmNF-YA13可能通过促进抗逆相关基因表达量的升高以提高转基因烟草的抗逆性。

异源表达大豆转录因子GmNF-YA19提高转基因烟草抗旱性

核因子(NF-Y)广泛存在于真核生物中,是一类能够在植物非生物胁迫反应中发挥重要调控作用的转录因子。探究大豆GmNF-YA19的抗旱性及作用机制,为GmNF-YA19在抗旱植物育种中的应用奠定基础。运用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)对GmNF-YA19在非生物胁迫下的表达量进行检测,克隆GmNF-YA19,构建GmNF-YA19植物表达载体并转化烟草,对转基因烟草的抗旱性进行鉴定。RT-qPCR结果显示GmNF-YA19在大豆中能够响应干旱、高盐、低温及外源ABA,且干旱胁迫下GmNF-YA19的表达量升高最显著。以大豆叶片cDNA为模板,通过PCR克隆GmNF-YA19。序列分析结果显示,GmNF-YA19编码一个含有213个氨基酸的蛋白质,预测分子量22.99 kD,预测等电点9.40。GmNF-YA19蛋白序列包含一个保守的CBF结构域。蛋白系统进化分析表明,GmNF-YA19蛋白与OsNF-YA7蛋白、AtNF-YA4蛋白和AtNF-YA7蛋白亲缘关系较近。共获得4棵转基因烟草植株。在干旱胁迫下,GmNF-YA19的异源表达增强了转基因烟草的抗旱性。与野生型烟草相比,GmNF-YA19转基因烟草中3个抗逆相关基因(NtABA2、NtNCED3-2和NtP5CS)的表达量显著升高。GmNF-YA19的异源表达增强了转基因烟草的抗旱性。

大豆GmNCED1-2的非生物胁迫诱导表达及其转基因烟草鉴定

9-顺式-环氧类胡萝卜素双加氧酶(NCED)是脱落酸(ABA)合成途径中的关键酶。本研究从大豆中克隆GmNCED1-2,其开放阅读框全长1818 bp,编码605个氨基酸,预测蛋白质相对分子质量6.693×104,等电点8.00。GmNCED1-2蛋白含有1个RPE65超家族结构域、2个保守序列MIAHPKxDP和HDFAITE以及4个保守的组氨酸残基。GmNCED1-2蛋白的亚细胞定位预测结果显示其位于叶绿体中。蛋白质系统进化分析结果表明GmNCED1-2蛋白与CrNCED1蛋白和MhNCED3蛋白的亲缘关系较近。实时荧光定量PCR结果表明GmNCED1-2在叶中的表达量最高。脱落酸、干旱、高盐、高温和低温胁迫下GmNCED1-2的表达量均升高。顺式作用元件预测分析结果表明GmNCED1-2启动子含有2个ABRE,3个ARE,1个TC-rich repeats和1个TGACG-motif顺式作用元件。将GmNCED1-2构建植物表达载体并转化烟草,获得3棵转基因烟草植株。烟草根长和生物量测定结果显示,GmNCED1-2的过表达抑制了转基因烟草根的伸长及植株的生长。

课堂上教师使用模糊限制语分析

Lakoff于1972年明确提出"模糊限制语"这一概念,他认为模糊限制语的功能是使事情变得更模糊或者不那么模糊。最初对于模糊语的研究,主要集中于语义学和逻辑学,然后迅速扩展到了语用学、语篇分析、社会语言学等领域。然而目前国内学者对于模糊限制语在课堂上的研究还有待入深究。本文笔者主要通过分析自己授课中所用模糊语概括了其语用学功能,以期对英语教师在课堂中的模糊语言的使用有所启发。

大豆GmGolS2-2启动子的克隆及活性分析

从大豆基因组DNA中,通过PCR扩增获得Gm Gol S2-2启动子序列(Gm Gol S2-2P),长1 740 bp。预测分析结果显示,Gm Gol S2-2P中共含5种逆境相关顺式作用元件,包括2个水杨酸响应元件、1个茉莉酸甲酯响应元件、6个厌氧诱导元件、2个防御和胁迫响应元件和1个MYB转录因子结合位点。构建植物表达载体p CAMBIA1301-GmGolS2-2P,通过叶盘法转化烟草。通过烟草基因组DNA PCR鉴定获得2棵T0代Gm Gol S2-2P转基因烟草植株。GUS组织化学染色和实时荧光定量RT-PCR结果表明,Gm Gol S2-2P在转基因烟草中能够激活GUS报告基因的表达,并且在干旱胁迫下Gm Gol S2-2P的启动活性增强。

红松人工林主要病虫害种类及营林治理措施

从红松人工林主要的病虫害入手,对红松苞锈病、红松烂皮病、红松球蚜、松梢螟具有代表性的发生特点和表现形式进行概述,提出红松人工林主要病虫害的营林治理措施,包括:科学地营造及培育混交林,对病虫害进行抑制;注重抚育间伐及科学采伐,改善林木生长条件;做好采摘红松球果的工作,合理处理加工剩余物;针对病虫特点,确定综合治理对策等。

大豆GmNCED5基因非生物胁迫响应及生物信息学分析

为探究大豆9-顺式-环氧类胡萝卜素双加氧酶(NCED)基因GmNCED5对非生物胁迫的响应及原理,为植物基因工程及大豆抗逆育种提供理论基础,本研究检测GmNCED5在非生物胁迫下的表达量,并对该基因及其启动子序列进行生物信息学分析。实时荧光定量PCR结果显示,干旱、高盐、高温、低温及外源脱落酸(ABA)处理均可以不同程度地诱导GmNCED5在大豆幼苗中表达。GmNCED5基因开放阅读框(ORF)全长1 686 bp,编码561个氨基酸。亚细胞定位预测结果显示,GmNCED5蛋白主要定位于细胞质中。系统进化分析表明GmNCED5蛋白与豇豆VuNCED蛋白的亲缘关系最近。启动子预测分析结果显示,GmNCED5启动子区域含有5种激素响应相关顺式作用元件和3种胁迫响应相关顺式作用元件。由此推测GmNCED5可能通过启动子区域的顺式作用元件响应非生物胁迫。

传统提升机电控TKD系统的升级与实践

传统提升机电机TKD系统,需要在转子回路中串联大量电阻来降低启动电流和调速,进行卷扬机的操作控制,其中工作中的制动过程需要消耗近百分之四十以上的电量能耗,工作制动或者是低频制动均属于高能耗制动。随着电器自动化的飞速发展和进步,采用绕线式电机双馈转子变频调速系统,让设备能够充分利用电网容量资源,最大限度减少无功电流造成的线路损害,也实现了设备使用效率的提升。

HPLC法测定盐酸乐卡地平的有关物质

目的建立高效液相色谱法测定盐酸乐卡地平原料药的有关物质。方法用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,流动相为0.15 mol·L^-1的高氯酸钠(用1%高氯酸调解pH值3.6)-乙腈(V∶V=49∶51),流速为1.5 mL·min-1,检测波长为220 nm,进样量为20μL,柱温为25℃。结果杂质1、杂质2、杂质3、杂质4、杂质5、杂质6、杂质7、杂质8、杂质9的检测限分别为2.0×10^-3、4.0×10^-2、3.0×10^-3、3.0×10^-3、5.0×10^-3、3.0×10^-3、4.0×10^-3、8.6×10^-2、2.2×10^-2mg·L^-1;定量限分别为6.0×10^-3、1.5×10^-3、9.0×10^-3、9.0×10^-3、1.4×10^-2、2.3×10^-2、1.5×10^-2、2.9×10^-2、4.0×10^-3 mg·L^-1。杂质1-杂质9均在质量浓度0.05~1.0 mg·L^-1内线性关系良好,相关系数r≥0.998(n=5);杂质1-杂质9的平均回收率分别为96.1%、101.1%、101.1%、103.0%、100.9%、99.6%、96.0%、97.3%和104.9%(n=9)。结论该方法可用于盐酸乐卡地平原料药有关物质的测定。

大豆GmDof2.2提高转基因烟草对盐胁迫的敏感性

Dof转录因子参与植物对非生物胁迫应答。本研究对大豆GmDof2.2进行克隆及耐盐性功能鉴定。实时荧光定量PCR结果显示GmDof2.2在大豆幼苗中可以响应非生物胁迫,GmDof2.2基因开放阅读框全长867 bp,编码288个氨基酸的蛋白,其分子量31.4 kDa,等电点10.23,蛋白质序列中含有一个保守的Dof结构域。GmDof2.2启动子区含有3种胁迫响应相关的顺式作用元件(ARE、MBS和WUN-motif)和3种激素响应相关顺式作用元件(ABRE、P-box和TCA-element)。将GmDof2.2构建植物表达载体并转化烟草,共获得4株GmDof2.2异源表达的转基因烟草株系(OE1-OE4),OE1中GmDof2.2的表达量最高,其次为OE2。盐胁迫处理后,转基因烟草萎蔫程度高于野生型烟草,转基因烟草叶片的叶绿素、可溶性糖及脯氨酸含量均显著低于野生型烟草,而丙二醛含量则高于野生型烟草。表明GmDof2.2的异源表达提高了转基因烟草株系对盐胁迫的敏感性。本研究为大豆Dof转录因子抗逆机制研究及应用提供理论依据。

某SUV车型车内噪声源识别试验研究

采集某SUV车型怠速工况下的悬置点被动侧振动加速度和车内噪声声压信号,对车内噪声频谱分析,得到主要噪声频率,建立一个三输入单输出系统模型,以相干理论为基础计算出相干系数,试验与理论结合的分析结果表明,后悬置振动是主要噪声源,左悬置振动次之。

伊春林区铁伊西重点火险区森林防火现状及综合治理措施

针对伊春林区铁伊西重点火险区森林防火现状及存在问题,提出切实可行的综合治理措施,为伊春市乃至黑龙江省相似地区的森林防火工作提供建议和参考。

铝模板施工技术在高层建筑工程中的应用探讨

我国城市建设水平的不断提高,高层建筑的数量和规模不断发展,在建筑工程中广泛应用铝模板施工技术,可以使建筑工程现代化施工程度得到很大的提高。本文首先对铝模板施工技术进行了概述,探讨铝模板施工技术应用的先进性,研究高层建筑工程中铝模板施工技术应用的可行经验。强化对铝模板施工技术的系统性研究,优化高层建筑施工中的铝模板施工技术应用,希望为同类项目提供参考。

红松仁营养成分分析及松仁油制取方法的探讨

分析了松仁的营养成分,并详细阐述了各种营养成分的功能机理,对红松仁系列产品的加工工艺进行了系统的研究。运用CO2超临界萃取技术,对红松松仁油提取条件进行了初步探讨,找出了最佳提取温度、压力指标。

影响桑树离体微枝培养的因素分析

以黑龙江省西部地区的4个桑树品系的离体微枝为外植体,建立了再生体系,从外植体的选择、培养基的选择、褐变的控制等方面分析了影响微体培养中生长状况的因子,认为采用嫩茎、选用1/2MS基本培养基,在培养中多次转接控制褐变等综合措施可实现桑微体繁殖培养。

白桦果胶甲酯酶抑制剂(PMEI)基因克隆及序列分析

从白桦(Betula platyphylla Suk.)cDNA文库中获得1个果胶甲酯酶抑制剂(PMEI)基因全长cDNA序列,该序列去除polyA后长946 bp,其ORF全长624 bp,编码208个氨基酸,编码蛋白的分子量22 486.4D,理论等电点为10.09,保守区分析确定其含有PMEI蛋白保守序列,属于植物PMEI超家族。该结果为研究白桦细胞壁代谢的分子调控奠定了基础。

大豆GmGolS1的克隆及转基因烟草耐高温性鉴定

棉子糖系列寡糖(RFOs,raffinose family oligosaccharides)是植物体内一种重要的渗透调节物质,肌醇半乳糖苷合成酶(GolS,galactinol synthase)是RFOs合成过程中的关键酶。本研究从大豆中克隆了GmGolS1基因。序列分析结果显示,GmGolS1基因位于大豆3号染色体,基因序列内部有3个内含子,开放阅读框(ORF,open reading frame)全长1020 bp,编码的多肽含有339个氨基酸,分子量38.82 kDa,等电点5.47。GmGolS1氨基酸序列具有植物GolS蛋白的共同特征:一个保守的丝氨酸磷酸化位点、一个锰离子结合相关的DXD元件和一个羧基末端疏水性五肽。蛋白系统进化分析结果显示,GmGolS1与沙东青AmGolS和蒺藜苜蓿MtGolS的亲缘关系较近。实时荧光定量PCR结果显示GmGolS1在大豆幼苗中可以不同程度的应答高温、低温、干旱及高盐胁迫,且高温胁迫下GmGolS1的表达量升高最明显。构建GmGolS1植物表达载体并转化烟草,获得4个转基因烟草株系。GolS酶活性检测结果显示,转基因烟草中GmGolS1转录后的产物发挥了GolS的催化活性。高温胁迫下GmGolS1转基因烟草的植株表型及电解质渗透率、可溶性糖含量和丙二醛含量的检测结果表明,GmGolS1提高了转基因烟草的耐高温性。

创诚信品牌 铸事业辉煌——山东洁能集团有限公司发展纪实

山东洁能集团有限公司位于风景秀丽的“金丝小枣之乡”—山东省乐陵市。乐陵市居鲁、冀两省交界处，地处北京、天津、济南、泰安等城市构成的南北走向经济龙脉的中心位置，是山东的北大门和主要进京门户，素有“齐燕要塞“、“鲁冀枢纽”之称。

针梁式衬砌台车在马蹄形隧洞施工中的应用

通过宁夏中南部水源工程2号胭脂川隧洞二衬施工实例,在阐述针梁式衬砌台车工艺原理的基础上,介绍了针梁式台车在马蹄形隧洞中的工艺流程及操作要点,为类似隧洞施工提供借鉴和参考。

碾子山区沙地治理方案及效果分析

齐齐哈尔市碾子山区地处科尔沁沙地,区内土地沙化比较严重,生态环境脆弱。通过采用封沙与人工造林相结合的方式,建设乔灌草,造封管结合的生态经济型防护林体系,大力保护、培育和合理利用森林资源,提高其抗御自然灾害的能力,遏制沙化扩展。碾子山区沙地治理在一定程度上改善了当地的生态条件,缓解了该区域的风沙危害,对促进区域社会经济、资源环境的协调发展和维护当地生态平衡起到了一定作用。