乏情期新疆哈萨克绵羊血清中P_4、E_2、FSH和LH生殖激素变化规律分析

采用酶联免疫法(ELISA)测定孕酮(P4)、雌激素(E2)、促卵泡素(LH)和促黄体素(FSH)浓度,研究新疆哈萨克绵羊乏情期发情及不发情绵羊体内激素变化。结果表明:乏情期发情绵羊P4的含量显著低于不发情绵羊(P<0.05),发情绵羊E2、LH和FSH的含量显著高于不发情绵羊(P<0.05),且P4浓度变化趋势可以作为乏情期绵羊发情鉴定的手段。结果表明:乏情期发情绵羊P4的含量显著低于不发情绵羊(P<0.05),发情绵羊E2、LH和FSH的含量显著高于不发情绵羊(P<0.05),且P4浓度变化趋势可以作为乏情期绵羊发情鉴定的手段。

绵羊oar-miR-200b对GNAQ基因的表达调控

为了探讨mi R-200b是否通过靶向作用GNAQ基因并以此调控发情过程,本研究通过双荧光素酶报告基因系统,验证mi R-200b对靶基因GNAQ的真实干扰作用,并在下丘脑神经细胞和卵巢颗粒的细胞中过表达mi R-200b,用荧光定量PCR检测了GNAQ下游基因的表达变化。结果显示:共转染GNAQ-3'UTR-psi-CHECKTM-2和pri-mi R-200b-pc DNA3.1(+)组的hela细胞荧光素酶值是只转染psi-CHECKTM-2组的77.5%,其余两组与只转染psi CHECKTM-2组之间的差异无统计学意义。通过mi R-200b干扰载体转染下丘脑神经细胞,选择GNAQ下游基因ITPR、PRKCB、GNA1、CREB、MAP3K1、GPR54、KISS1及Gn RH进行实时荧光定量检测,结果发现:mi R-200b干扰组和对照组相比,GNAQ基因显著下调,下游ITPR、PRKCB、GNA1和MAP3K1、发情关键基因GPR54、KISS1和Gn RH显著上调。通过mi R-200b干扰载体转染卵巢颗粒细胞,选择GNAQ下游基因COMT、HSD3B1、CYP1A1和PKA基因进行表达量验证,结果表明:mi R-200b干扰后,GNAQ基因表达量升高,下游基因COMT、HSD3B1、CYP1A1和PKA表达量下降。由此推测,mi R-200b真实靶向调控GNAQ基因,进而调控发情过程。

新疆哈萨克绵羊在乏情期和发情期生殖激素的变化规律

旨在通过检测乏情期和发情期的发情绵羊外周血液中4种重要生殖激素孕酮(P4)、雌激素(E2)、促卵泡素(LH)和促黄体素(FSH)浓度,解析绵羊乏情期和发情期哈萨克绵羊发情时生殖激素的变化规律,以期阐明哈萨克绵羊发情时生殖激素变化规律,为调控绵羊的季节性发情提高激素方面的理论。采用ELISA方法测定4种生殖激素浓度,结果表明:哈萨克绵羊P4和E2在发情周期内呈现波动式变化,LH和FSH在发情周期内呈现脉冲式变化,且乏情期和发情期4种激素浓度变化显著(P<0.05)。

营养诱导舍饲哈萨克羊非繁殖季节卵巢组织中miRNAs差异表达分析

旨在利用Solexa测序技术分析、挖掘营养诱导非繁殖季节绵羊发情期和乏情期卵巢组织micro RNAs(miRNA),为进一步研究特定miRNA参与非繁殖季节绵羊发情的分子调控机制提供理论基础。以不同营养水平饲喂的哈萨克绵羊作为研究对象,在非繁殖季节前后分别屠宰已鉴定的3只发情(EN)和乏情(AN)母羊,分别采集卵巢(O)组织,构建两个小片段RNA文库(OEN和OAN),进行高通量测序和生物信息学分析,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)验证差异表达的miRNAs在哈萨克羊卵巢中表达水平。结果显示,两文库分别获得8 665 978(发情期)和9 071 102条(乏情期)clean reads,且绝大多数小RNA序列长度为21~23nt。两文库相比较,发现有9个已知和104个未知miRNAs表达差异显著(P<0.01)。利用qRT-PCR随机选择的6个显著差异表达的miRNAs进行验证,其表达水平和测序分析结果一致。KEGG通路分析表明,这些差异miRNAs的靶基因主要参与了甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸代谢,氨基糖和核苷酸糖代谢,精氨酸和鸟氨酸代谢及甘油磷脂代谢等营养调控通路。结合靶基因预测及通路富集分析,推测差异表达的miRNAs是通过营养代谢通路对绵羊的非季节性发情起重要作用。

左旋肉碱对哈萨克绵羊激素的影响

本试验通过对哈萨克绵羊外源性添加L-肉碱(左旋肉碱),观察哈萨克绵羊发情行为变化,分析添加L-肉碱对哈萨克绵羊激素的影响,试验选用16只1周岁哈萨克绵羊,将试验羊群随机分成2组:实验组与对照组,每组8只哈萨克绵羊(1岁)。实验组在精料(200 g)中添加肉碱(每只羊75 mg/kg),对照组只饲喂精料(200 g),每天采集血样并分离血清保存,测定激素变化。结果表明:饲料中添加的L-肉碱间接地影响了绵羊体内MLT (褪黑素);E2 (雌二醇);FSH (促卵泡素);LH (促黄体生成素);P4 (孕激素)的分泌量并在绵羊繁殖方面产生了重要影响。

绵羊甘露糖结合凝集素基因启动子区甲基化与绵羊支原体肺炎相关性研究

甘露糖结合凝集素(MBL)是一种由肝脏合成和分泌的急性期蛋白,属于胶原凝集素家族,通过激活补体和调理吞噬作用在抗感染的起始阶段起主导作用。为研究绵羊MBL基因启动子区甲基化与绵羊支原体肺炎感染的相关性,本研究利用绵羊肺炎支原体(M.ovipneumonia)标准株Y-98气管内接种3月龄绵羊,对照组接种相同体积的灭菌生理盐水,利用BSP甲基化检测技术对感染组及对照组绵羊中MBL基因启动子区甲基化及血清中MBL浓度水平进行检测。结果显示,MBL基因启动子区甲基化CpG数量和甲基化发生的位点均与血清中MBL水平有关,而且MBL基因启动子区每个CpG的甲基化对于MBL水平的影响均存在差异。本研究为进一步诊断与治疗绵羊支原体性肺炎提供重要的实验依据。

MBL对绵羊肺炎支原体抗性的影响

甘露糖结合凝集素（MBL）属于凝集素家族,是机体先天性免疫的重要成分,有激活补体系统、调理吞噬等作用,并与许多免疫相关性疾病有关。为了揭示湖羊不同MBL基因型与绵羊肺炎支原体抗性的相关性,本研究在对中国美利奴羊MBL基因多态性分析的基础上,利用ELISA方法检测湖羊的绵羊支原体肺炎抗体水平,

L-肉碱对周岁哈萨克羊血液生化指标的影响

L-肉碱是动物体内调节能量代谢的重要调控剂，本试验通过在周岁哈萨克羊饲料中添加L-肉碱，观察由此引起的体重变化和对血液生化指标的影响，进而分析其对这些哈萨克周岁母羊发情行为的影响。试验选取32只体况良好、体重相近的周岁哈萨克羊，按性别随机分成四组（公羊实验组、公羊对照组、母羊实验组、母羊对照组），实验组在精料（200g／只）中添加L-肉碱（75mg／kg／只），对照组精料（200g／只）不作处理，同时自由采食苜蓿、自由饮水，试验期为2周。结果表明：在饲料中添加L-肉碱饲喂后显著提高了周岁哈萨克母羊血清中葡萄糖和总蛋白的含量（P〈0．05）；在饲料中添加L-肉碱饲喂后显著提高了周岁哈萨克公羊血清中总蛋白的含量，降低了尿素氮的含量（P〈0．05）；同时发现对照组公、母羊体增重高于试验组，且试验组母羊表现出发情行为。由此可知，在饲料中添加L-肉碱能够调节周岁哈萨克羊能量代谢，降低体增重幅度，促进周岁哈萨克母羊发情。

不同MBL基因型绵羊感染绵羊肺炎支原体后的免疫相关因子表达规律分析

将32只2月龄中国美利奴羊人工感染绵羊肺炎支原体(MP),分别在攻毒前1 d(-1 d)、攻毒后1 d、7 d、14 d和21 d收集新鲜抗凝血,提取总RNA后应用Real-time PCR的方法定量检测细胞因子IL-2、IL-4、IFN-γ、TNF-α,补体C1、C3和甘露糖结合凝集素(MBL)。结果表明,不同MBL基因型绵羊攻毒感染后血清MBL浓度呈下降趋势,其中MBL浓度较高的C型和D型绵羊,其促炎因子IL-2、IFN-γ浓度较高,抗炎因子IL-4在攻毒后1d呈升高趋势,此后开始下降;MBL浓度较低的A型和B型绵羊,攻毒后其TNF-α浓度升高显著,随炎症的舒缓,逐渐降低;补体C1和C3在攻毒后表现出不同的变化,证实MP感染后,激活补体途径,可能与MBL的浓度变化有关。