18p缺失综合征伴肌张力障碍患儿的遗传学分析及文献回顾

目的分析18p缺失综合征伴肌张力障碍的临床特点和遗传学特征,以及18p缺失综合征的基因型与表型的相关性。方法回顾性分析1例18p缺失综合征伴肌张力障碍患儿的临床表现、细胞遗传及分子遗传结果,并检索国内外数据库中18p缺失综合征的病例,分析其临床特点、遗传学特征,以及基因型与表型之间的相关性。结果本例患儿主要表现为特殊面容(小头畸形、发际线低、短颈、眼距过宽、耳位偏低)、颈斜、口齿不清、智力障碍,染色体核型为46,XX,del(18)(p11.2),阵列比较基因组杂交技术分析结果显示患儿18号染色体p11.32p11.21区域存在14.97 Mb的缺失,荧光原位杂交技术分析结果证实患儿18号染色体的短臂末端存在部分缺失。该病不同基因型可表现为不同表型,本例患儿的表型与TWSG1基因、LAMA1基因、GNAL基因的缺失有关。结论18p缺失综合征是一种罕见的染色体疾病,临床表型多样,涉及GNAL基因缺失时会出现原发性扭转型肌张力障碍相关症状(痉挛性斜颈、构音困难等),在临床中遇到肌张力障碍患者特别是伴有智力障碍、面部畸形等症状时,应考虑18p缺失综合征,并应用染色体核型分析、荧光原位杂交技术分析及阵列比较基因组杂交技术分析等进行确诊。

宁夏地区28株遗传性眼病永生淋巴细胞系的建立

目的建立宁夏地区多种遗传病性眼病的永生淋巴细胞系,从而为进一步深入研究这些遗传病的发病机理提供研究材料。方法采用EB病毒转化B淋巴细胞的方法,建立永生淋巴细胞系。结果成功建立先天性高度近视、先天性白内障、先天性上睑下垂等遗传病,8个家系的28个永生淋巴细胞株。结论遗传性眼病家系永生细胞株的建立,为从分子水平研究它们的发病机理提供了可用的资源。

200例无精症患者染色体核型分析及Y染色体AZF基因微缺失情况观察

目的观察无精症患者染色体核型及Y染色体长臂上的无精子因子(azoospermia factor,AZF)基因微缺失情况。方法对200例无精症患者进行外周血染色体核型分析,采用多重PCR电泳技术和荧光定量PCR技术对Y染色体AZF的6个标签序列位点进行检测。结果 200例受检无精症患者中,染色体核型异常9例(其中性染色体异常8例、常染色体易位1例);Y染色体AZF基因微缺失18例(其中AZFb+c区缺失11例、AZFc区缺失5例、AZFb区缺失1例、AZFa区缺失1例),多重PCR电泳技术和荧光定量PCR技术对Y染色体AZF的6个标签序列位点的检测结果一致。结论无精症患者染色体核型异常及Y染色体AZF基因微缺失多见,可能是男性不育的重要原因;多重PCR电泳技术与荧光定量PCR技术检测对Y染色体AZF基因的检测结果一致,后者因省时省力,可作为Y染色体AZF基因微缺失的筛查方法。

细粒棘球蚴(中国大陆株)抗原zw-5基因的表达、纯化及免疫学特性初步分析

目的对细粒棘球蚴(Echinococcus granulosus,Eg)抗原zw-5重组质粒进行原核表达、纯化,并初步分析重组蛋白的免疫学特性。方法从重组质粒Eg.zw-5/pGEM-T中获取抗原zw-5基因,亚克隆于表达载体pET-28a构建基因工程菌株,并表达、纯化重组蛋白;用Eg.zw-5免疫ICR小鼠,通过Western-blot、ELISA对Eg.zw-5的免疫学特性进行初步研究。结果构建原核重组表达基因工程菌株Eg.zw-5/pET-28a/BL21(DE3)plysS,并纯化出分子量为28kD的重组蛋白。West-ern-blot显示,Eg.zw-5免疫的小鼠血清能识别重组蛋白和天然抗原原头蚴中约28KD处的条带。ELISA检测显示,用Eg.zw-5免疫小鼠,可诱导产生特异性抗体IgG。结论成功表达细粒棘球蚴重组抗原Eg.zw-5,该重组蛋白有较好的免疫原性及抗原性。

宁夏地区老年女性原发性骨质疏松症维生素D受体基因多态性研究

目的探讨宁夏地区老年女性原发性骨质疏松症与维生素D受体基因(VDR)基因多态性的相关性。方法应用聚合酶链反应限制性片段长度多态性技术(PCR-RFLP)分析230例原发性骨质疏松症患者血液样本VDR基因型,探讨宁夏地区老年女性与VDR基因多态性的相关性。结果230例患者的VDR受体基因型频率分布均符合Hardy-Weinberg定律,宁夏老年女性骨质疏松症的VDR受体基因型频率bb型、Bb型、BB型分别占78.69%、19.72%、1.59%。结论宁夏地区老年女性原发性骨质疏松症患者与VDR基因多态性具有相关性。

1例杜氏肌营养不良症家系的基因检测及产前诊断

目的分析杜氏肌营养不良症的遗传学诊断及致病基因的突变位点。方法回顾1例杜氏肌营养不良症患儿的临床资料及家族史,进行DMD基因检测及产前诊断。结果 DMD基因存在错义变异位点c.2270C>G,母亲携带该位点变异,其腹中胎儿未发现该位点存在上述变异。结论通过对先证者基因诊断可对该家庭进行再生育指导及产前诊断。

细粒棘球蚴中国大陆株诊断抗原P-29基因的克隆和序列分析

目的获得细粒棘球蚴(E.granulosus)诊断抗原(diagnostic antigen)P-29基因并进行序列分析。方法从包虫病患者体内获取细粒棘球蚴原头蚴提取总RNA,根据GenBank公共数据库检索出细粒棘球蚴诊断抗原P-29基因的已知序列设计一对引物,通过RT-PCR技术扩增出细粒棘球蚴中国大陆株诊断抗原P-29基因,将其重组到pGEM-T载体后进行序列测定和分析。结果成功扩增出细粒棘球蚴中国大陆株诊断抗原P-29基因,测序表明该片段由717bp组成,与已发表基因核苷酸序列相比,同源性为100%,推导编码氨基酸序列同源性为100%。结论成功克隆细粒棘球蚴中国大陆株诊断抗原P-29基因序列,可做为包虫病重组抗原的候选基因。

脊柱结核患者外周血液循环gammadelta T细胞及其表达microRNA的初步研究

目的探讨脊柱结核患者外周循环gammadelta(γδ)T细胞及产生的microRNA变化。方法分别收集脊柱结核组与健康对照组各25例外周血标本,采用流式细胞术检测外周血γδT细胞比例变化。采用磁珠分选技术分选获得纯化的γδT细胞,提取microRNA并采用实时荧光定量PCR验证。结果与健康对照组相比,脊柱结核组患者外周血γδT细胞占CD45+白细胞的比例显著下降(P<0.05),占CD3+T淋巴细胞的比例显著降低(P<0.05)。磁珠分选获得γδT细胞纯度为90%以上。与健康对照组相比,脊柱结核组外周血纯化的γδT细胞中miR-144-3p和miR-29a表达显著上调(P<0.05),miR-155-5p表达显著下调(P<0.05)。结论脊柱结核患者外周循环中显著减少的γδT细胞及其产生的差异microRNA分子有助于理解疾病发生机制,其亦可能成为新的、潜在的临床防治靶点。

细粒棘球蚴重组HSP70基因的表达、纯化及免疫学鉴定

目的构建细粒棘球蚴(Echinococcus granulosus,Eg)热休克蛋白70(Heat shock protein,HSP70)基因的重组质粒并原核表达、纯化及对其免疫特性进行鉴定。方法从重组质粒HSP70/pGEM-T中酶切HSP70目的片段,亚克隆入表达载体pET-28a,转化入大肠杆菌E.coli BL21(DE3)plysS进行融合表达,经His-band树脂纯化试剂盒小量纯化,SDS-PAGE和Western blot方法鉴定表达产物。结果成功构建Eg.HSP70/pET-28a/E.coli BL21基因工程菌株,诱导表达重组蛋白和纯化分离得到14kDaEg.HSP70均能被细粒棘球蚴天然抗原免疫的兔多克隆抗血清识别。结论初步证实该重组蛋白具有较好的抗原性。

XE-2100血细胞分析仪对血小板分布宽度未检出原因分析

目的分析XE-2100血细胞分析仪血常规检验中血小板分布宽度(PDW)未检出原因。方法对XE-2100血细胞分析仪血常规检验中PDW未检出的标本,采用涂片观察血小板的数量、形态大小、是否聚集、红细胞形态以及是否有细胞碎片等,对该类标本进行手工血小板计数,并比较其与血细胞分析仪计数血小板结果的一致性。结果在300例PDW未检出的标本中有156例(52%)可见大血小板,54例(18%)可见血小板聚集,42例(14%)可见小红细胞或红细胞碎片,48例(16%)无明显形态异常;大血小板、血小板聚集或细胞碎片标本血小板手工计数结果与XE-2100血细胞分析仪血小板计数结果比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 XE-2100血细胞分析仪未检出PDW的原因主要有大血小板、血小板聚集、小红细胞或细胞碎片等,该类标本XE-2100血细胞分析仪血小板计数异常,应行血小板手工计数给予纠正。

遗传性耳聋基因研究进展

遗传性耳聋是由于基因突变和染色体异常所导致的,是人类最常见的出生缺陷之一。在我国新生儿中,重度以上的先天性聋儿所占比例为0.1%~0.3%,其中90%以上的耳聋患儿出生于听力正常的家庭,因此对有耳聋家族史或已生育过耳聋患儿的家庭开展产前诊断是必不可少的,对于正常听力人群耳聋基因的筛查同样具有重要意义。目前,人类发现的遗传性耳聋基因多种多样,其又具有人种及地区的特异性,本文将几种在我国常见的和最新出现的耳聋基因及突变位点在遗传性耳聋发病中的作用分别进行阐述。

无创产前检测技术在胎儿性染色体非整倍体检测中的应用

目的探讨无创产前检测(noninvasive prenatal testing,NIPT)技术在胎儿性染色体非整倍体检测中的应用价值。方法收集2012年至2017年在宁夏医科大总医院及银川市妇幼保健院产前诊断中心行NIPT的单活胎孕妇7619例,孕12～26周,提取妊娠妇女血浆中的胎儿游离DNA,进行高通量测序。对NIPT结果提示性染色体异常的孕妇行羊膜腔穿刺胎儿染色体核型分析,获取胎儿染色体核型,评价NIPT技术对性染色体非整倍体产前筛查阳性预测准确率。结果在7619例妊娠妇女中NIPT结果显示性染色体异常者32例,检出率为0.42%;32例妊娠妇女全部行羊膜腔穿刺术,经羊水细胞培养G显带染色体的核型分析,18例羊膜腔穿刺胎儿染色体核型结果与NIPT结果相同,14例不同;其中包括4例47,XXX(1例嵌合型)、7例45,X(3例嵌合型)、5例47,XXY、2例47,XYY,余下14例为46,XN。结论 NIPT技术可以用于胎儿性染色体非整倍体的检测,但其假阳性率较高;对性染色体非整倍体异常者,NIPT技术对性染色体数目少者的阳性预测值低。

淡色库蚊溴氰菊酯抗性与敏感品系单蚊杂交群体的构建

目的建立淡色库蚊溴氰菊酯抗性与敏感品系单蚊杂交群体,并对比观察杂交系与自交系的生物学特性,为鉴定抗性基因遗传多态性和遗传作图奠定基础。方法正交组以抗性品系为母本交配敏感品系雄蚊,即R-S组;反交组以抗性品系雄蚊交配敏感品系雌蚊,即S-R组;对照为抗性品系和敏感品系自交,即R-R组和S-S组。观察比较4组产卵率、孵化率及各发育阶段成活率。WHO蚊幼虫浸渍法检测各组幼虫对溴氰菊酯的抗性水平。结果产卵率:S-S组为94.44%,R-R组为100%,R-S组和S-R组分别为61.11%和72.22%;孵化率:S-S组和R-R组分别为94.12%和100%,R-S组和S-R组分别为36.36%和69.23%;各组幼虫成活率,成蛹率及羽化率均达到90%以上,无显著性差异;抗性水平:R-R组、R-S组和S-R组F2代的抗溴氰菊酯水平分别是敏感品系的53倍、29倍和10倍。结论杂交群体F2代的抗性水平位于两亲本之间,符合遗传学规律。

两性畸形1例报道

正常男女性别可根据性染色体核型、生殖腺结构、外生殖器形态及第二性征加以区别,在胚胎发育过程中,任何干扰因素均可导致内外生殖器发育畸形,使个体同时具有男女两性特征,称之为两性畸形.两性畸形的发病率为1/10万～1/30万,其发病原因复杂,临床表现多种多样.临床上根据病因将两性畸形大致分为三类:1)染色体性别异常:先天性睾丸发育不全症、46,XX男性、先天性卵巢发育不全症、混合性腺发育不全、真两性畸形;2)性腺性别异常:纯性腺发育不良无睾丸综合症;3)表型异常:女性假两性畸形、男性假两性畸形[1].本文报道1例两性畸形,根据其临床特征、细胞及分子遗传学特点探讨其类型.

宁夏汉族女大学生指长比与月经初潮年龄的关系

目的:探讨宁夏汉族女大学生指长比与月经初潮年龄(AAM)的关系。方法:选取宁夏地区汉族在校女大学生389例,采用体质测量及问卷调查方法,比较各指指长比(2D∶3D、2D∶4D、2D∶5D、3D∶4D、3D∶5D、4D∶5D)均值在左、右手间的差异性,并分析指长比与AAM的相关性。结果:宁夏汉族女大学生左、右手间各指指长比均值差异无统计学意义,均表现为3D∶5D> 4D∶5D> 2D∶5D> 3D∶4D> 2D∶4D> 2D∶3D的递减趋势;总人群中,右手2D∶3D、左手2D∶4D、右手2D∶4D及右手3D∶4D与AAM间存在负相关,其余指长比与AAM无相关性;亚组人群中,右手高2D∶4D与AAM间存在负相关。结论:宁夏汉族女大学生指长比与AAM有关,右手2D∶4D高的女性AAM可能会相对较早。

细粒棘球蚴重组延伸因子-1基因的表达、纯化及免疫学鉴定

目的对构建细粒棘球蚴(Echinococcus granulosus,Eg)延伸因子-1(Elongation factor1,EF-1)基因的重组质粒,并原核表达、纯化及对其免疫特性进行鉴定。方法从重组质粒EF-1/pGEM-T中酶切出EF-1目的片段,亚克隆入表达载体pET28a,转化入大肠杆菌E.coli BL21(DE3)plysS进行融合表达,经His-band树脂纯化试剂盒小量纯化,SDS-PAGE和Westernblot方法鉴定表达产物。结果成功构建Eg.EF-1/pET28a/E.coliBL21基因工程菌株,诱导表达重组蛋白和纯化分离得到31KDaEg.EF-1均能被细粒棘球蚴天然抗原免疫的兔多克隆抗血清识别。结论初步证实该重组蛋白具有较好的抗原性。

屈侧网状色素沉着症一家系POFUT1基因突变分析

目的检测一屈侧网状色素沉着症家系的突变位点是否位于POFUT1基因中已报道确认的突变位点上。方法整理国内外患有屈侧网状色素沉着症家系POFUT1基因突变的位点并为其设计引物,提取该家系成员外周血DNA,采用聚合酶链反应(PCR)扩增POFUT1基因的引物设计区域并测序。结果该家系的所有患者均未在POFUT1基因扩增的区域发现之前报道的突变和新发的突变,其致病突变可能存在于POFUT1基因的其余外显子区域,也可能存在于其他基因。结论该家系的致病突变不在POFUT1基因所报道确认的突变位点上,其遗传异质性较大,致病突变有待进一步研究。

常见染色体多态性与生殖异常关系研究

染色体多态性主要包括9号染色体臂间倒位,1号、9号、16号染色体次缢痕增加或缺失,D组和G组染色体随体区变异,大Y、小Y和Y染色体臂间倒位等。染色体多态性与反复性自然流产、胚胎停育、胎儿畸形、不孕不育等存在一定相关性。本文对近年来染色体多态与临床不孕不育等生殖异常关系的研究成果进行系统总结,分析染色体多态性的临床效应,为染色体多态性携带者夫妇,特别是有不良妊娠史的夫妇进行产前诊断提供指导。

PRMT6、PEX10、SOX5和CYP19基因多态性与生精障碍相关性研究

目的通过探讨蛋白质精氨酸甲基转移酶(PRMT6)、过氧化体生物合成因子10(PEX10)、转录因子SOX5(SOX5)和芳香化酶19(CYP19)基因位点多态性与精子生成障碍的相关性,进一步为男性不育提供理论基础。方法选择87例严重少弱精子症患者、96例非梗阻无精症患者,将健康查体者51例作为对照组。采集患者和健康对照者的外周血,提取全基因组DNA,采用Snapshot PCR技术对PRMT6(rs12097821)、PEX10(rs2477686)、SOX5(rs10842262)和CYP19(rs700518)基因位点多态性进行分析。结果严重少弱精子症、无精症患者PRMT6(rs12097821)、PEX10(rs2477686)和SOX5(rs10842262)的各个基因型频率和等位基因分布频率与健康对照组相比较差异无统计学意义(P>0.05);而严重少弱精子症、无精症患者CYP19(rs700518)的基因型频率和等位基因分布频率与健康对照组相比差异有统计学意义(P<0.05),且携带G等位基因的基因型(AG+GG)可使严重少弱精子症、非梗阻无精症的发病风险增加1.646倍。结论宁夏地区男性CYP19(rs700518)基因位点多态性与严重少弱精子症、非梗阻无精症具有一定的相关性,并且携带G等位基因的基因型(AG+GG)增加了严重少弱精子症、非梗阻无精症1.646(1.022~2.652)倍的发病风险。

D-二聚体检测性能评价及其对急性脑梗死患者病情评估的价值

目的对免疫比浊法检测D-二聚体的检测性能进行评价,并探讨其对急性脑梗死患者病情评估的价值。方法对263例急性脑梗死患者按美国卫生研究院脑卒中量表评分进行分组,比较不同程度病情急性脑梗死患者组血清D-二聚体含量及与健康对照组的差异。结果 D-二聚体的批内精密度N值和P值的CV分别为4.84%、4.04%,批间精密度N值和P值的CV分别为6.0%、4.74%;线性回归方程Y=1.044 1 X-0.217,R2=0.991;携带污染率0.26%,该检测系统性能良好。脑梗死组患者的血清D-二聚体含量显著高于对照组(P<0.05),其中重度、中度脑梗死组患者血清D-二聚体的含量显著高于轻度脑梗死组(P<0.05)。结论免疫比浊法D-二聚体检测性能符合要求,能够为临床提供可靠的结果;D-二聚体对急性脑梗死患者临床诊断有重要意义。