鲈鱼胚胎程序化冷冻保存的研究

对鲈鱼(Lateolabraxjaponicus)胚胎的程序降温冷冻保存进行了研究。通过稀释液的筛选实验 ,选择了一种培养效果好的稀释液DS1液。研究了不同发育阶段胚胎对抗冻液的毒性耐受力 ,表明肌肉效应期胚胎的耐受力最强。测定了心跳期胚胎在抗冻液A1 、A2 、B1 、B2 中的平衡处理时间 ,为进行鲈鱼胚胎冻前平衡提供了参考时间。比较了植冰和不植冰对鲈鱼胚胎冷冻保存结果的影响及不同洗脱方法洗脱胚胎的效果。结果表明 ,在冷冻过程中诱导植冰的胚胎成活率高于未植冰组 ,两步法洗脱效果优于一步法和三步法。用不同降温速率进行了鲈鱼胚胎的超低温冷冻保存实验 ,结果表明 ,采用 1 .5℃ /min的降温速率降温 ,在液氮中冷冻保存 30min的 72粒心跳期胚胎中有 3粒成活 ,成活率为 4.2 %。

牙鲆抗病群体和家系的建立及其生长和抗病性能初步测定

通过自然选择和人工感染途径筛选出抗鳗弧菌病牙鲆鱼种，将其培育成亲鱼94尾，建立了牙鲆抗病群体；从日本引进了牙鲆日本群体；以上述2个群体以及黄海中捕捞的黄海群体为基础群体，通过不同组合的交配，建立了63个牙鲆家系，其中半同胞家系54个，全同胞家系9个。生长比较实验表明这63个家系的生长速度存在着明显差异，从中筛选出生长快速的家系4个（家系36，42，43和57），生长较快的家系9个（家系27、28、35、39、41、51、60、65和76），生长慢的家系1个（75号家系）。通过对59个家系的抗病能力测定表明，不同家系在抗鳗弧菌感染的能力上存在着明显差别，从中鉴定出抗病力强的家系3个（家系50，61和68号），其在鳗弧菌感染后的成活率高达60％以上；抗病力比较强的家系17个，其成活率为39％～60％；抗病力一般的家系33个，其成活率为17％～39％之间；抗病力差的家系6个，其成活率在17％以下。这些牙鲆家系的建立为牙鲆抗病、高产新品种的培育奠定了重要基础。

鲈鱼胚胎的玻璃化冷冻保存

本文对鲈鱼 (Lateolabraxjaponicus)胚胎进行了玻璃化冷冻保存研究 ,筛选出了浓度较低、玻璃化程度较稳定的 5种玻璃化液 ,冷冻时形成玻璃化的概率在 4 8 1%～ 10 0 % ,在 35～ 4 3℃的水浴中解冻时保持玻璃化的概率在 4 4 4 %～ 6 3 0 % ;玻璃化液VSD2在解冻时保持玻璃化的概率最高。对鲈鱼神经胚、 2 0对肌节胚、尾芽胚、心跳胚、出膜前胚在玻璃化液VSD2中的适应能力及适合于玻璃化冷冻的胚胎时期进行了比较 ,结果显示 :不同时期胚胎对玻璃化液的耐受能力不同 ,鲈鱼神经胚耐受能力最低 ,心跳胚耐受能力最强 ,出膜前期胚次之 ,心跳胚和出膜前胚适合于进行玻璃化冷冻。对 0 5mol/L蔗糖的洗脱时间进行了选择 ,结果显示 ,洗脱10～ 2 0min效果较好。利用玻璃化程度较好的VSD2对鲈鱼不同时期胚胎进行超低温 ( - 196℃ )冷冻 ,获得了2 1%～ 2 7 9%的透明胚。将鲈鱼心跳胚冷冻解冻后获 2粒复活胚 ,培养至出膜期 ,成活 4 2～ 5 0h ;出膜前期胚在冷冻解冻后有 1粒胚复活 。

大菱鲆胚胎的玻璃化冷冻保存

大菱鲆隶属于鲆科(Bothidae)、菱鲆属(Scophthalmus),自然分布于大西洋东侧欧洲沿岸以及黑海和地中海沿岸,是欧洲的重要养殖鱼类之一,1992年黄海水产研究所自英国引进这一鱼种[1],目前已在我国山东、辽宁、福建等沿海地区推广养殖,成为我国工厂化海水养殖的名贵鱼种之一.对于这一引进的新鱼种,在其胚胎和仔稚幼鱼的发育[1],体表色素细胞形态[2],卵膜对DMSO的渗透性[3]等生物学方面进行了一定的研究,而做为一个新的鱼种资源,对其种质资源的保存研究,目前国内还未有报道.冷冻保存是长期保存鱼类种质资源和遗传多样性的有效手段[4],但鱼类胚胎由于体积大(直径为1～6 mm),膜通透性低及含有卵黄结构等,其冷冻保存较哺乳动物胚胎困难得多,迄今鱼类胚胎冷冻保存尚未完全成功[4].