转录因子NbMYB1R1通过促进活性氧积累抑制病毒侵染

[背景]黄瓜绿斑驳花叶病毒(cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV)是我国重要的检疫性植物病毒,严重降低了世界范围内蔬菜以及瓜类的产量。MYB蛋白家族庞大,功能多样,存在于所有真核生物中。大多数MYB作为转录因子控制植物的发育和代谢,并对植物应对生物和非生物胁迫反应起重要的调控作用。前期研究显示CGMMV侵染后可以显著上调寄主转录因子基因NbMYB1R1的表达。[目的]明确NbMYB1R1参与CGMMV侵染的机制,为CGMMV病害防控提供理论依据。[方法]运用MEGA 7.0构建系统进化树,对NbMYB1R1的氨基酸序列进行系统进化分析;通过构建NbMYB1R1的荧光表达载体,转化GV3101农杆菌后浸润本氏烟叶片,激光共聚焦显微镜观察其亚细胞定位;利用qRT-PCR技术分析NbMYB1R1在CGMMV侵染不同时期的转录水平及NbMYB1R1沉默烟草植株中活性氧(reactive oxygen species,ROS)相关基因的转录变化;通过沉默NbMYB1R1及下游调控基因NbAOX1a和NbAOX1b,分析NbMYB1R1及下游调控基因NbAOX1a和NbAOX1b在CGMMV侵染过程中的作用;瞬时过表达NbMYB1R1和NbMYB1R1关键氨基酸突变体,分析NbMYB1R1对CGMMV侵染的影响;使用台盼蓝染色以及DAB染色观察瞬时过表达NbMYB1R1造成的细胞死亡是否与程序性细胞死亡(programmed cell death,PCD)以及ROS的积累有关;运用酵母双杂交技术验证NbMYB1R1是否与CGMMV相关蛋白互作。[结果]系统进化树分析表明,NbMYB1R1属于1R MYB大类并与多种烟草的MYB转录因子同源性极高;亚细胞定位结果显示NbMYB1R1定位于细胞核;在CGMMV侵染的烟草植株中,NbMYB1R1的转录水平对比健康植株有明显变化,在CGMMV侵染8、12 d时NbMYB1R1的转录水平显著上调;在沉默内源基因NbMYB1R1的植株上接种CGMMV,3 d后NbMYB1R1沉默植株系统叶出现斑驳、卷曲症状,而对照植株在3.5 d时才出现症状;同时CGMMV CP mRNA水平和蛋白水平检测结果也表明沉默NbMYB1R1可以有效促进CGMMV的积累;在本氏烟叶片瞬时过表达NbMYB1R1及其突变体3 d时检测CGMMV蛋白水平表达量,结果显示过表达NbMYB1R1可以有效抑制CGMMV的侵染,DNA结合结构域缺失后会减轻NbMYB1R1对CGMMV的抑制;台盼蓝和DAB染色结果表明,在瞬时过表达NbMYB1R1蛋白后导致ROS积累并引起细胞死亡;在沉默内源基因NbMYB1R1的植株叶片上检测ROS相关基因的转录水平,发现交替氧化酶基因AOX1a、AOX1b转录水平显著上调;在沉默内源基因NbAOX1a和NbAOX1b的植株上接种CGMMV,4 d后NbAOX1a和NbAOX1b沉默植株系统叶出现斑驳、卷曲症状,而对照植株在3.5 d时就出现症状;同时CGMMV CP mRNA水平和蛋白水平检测结果也表明沉默NbAOX1a和NbAOX1b可以有效抑制CGMMV的积累;酵母双杂交结果显示NbMYB1R1不与CGMMV编码蛋白直接相互作用。[结论]随着CGMMV侵染,防御相关基因NbMYB1R1表达上调,从而抑制下游基因AOX1a、AOX1b的表达并激活细胞内产生ROS抑制病毒侵染,但NbMYB1R1不是通过与CGMMV病毒蛋白直接互作而产生此作用。由此可见,NbMYB1R1在CGMMV侵染过程中发挥了重要作用。

转录因子NbERF RAP2-1在黄瓜绿斑驳花叶病毒侵染中的功能

【背景】黄瓜绿斑驳花叶病毒(cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV)是我国重要的检疫性植物病毒,对蔬菜和瓜类产业造成严重的经济损失。ERF转录因子可以调控植物生物和非生物胁迫,参与植物对多种病害的防御作用。前期研究显示CGMMV侵染后可以显著下调寄主转录因子Nb ERF RAP2-1的表达。【目的】明确ERF转录因子家族成员在CGMMV侵染过程中的作用,为CGMMV病害防治提供理论依据。【方法】运用MEGA7.0构建系统进化树,对基于Nb ERF RAP2-1蛋白的氨基酸序列进行系统进化分析;构建Nb ERF RAP2-1的荧光表达载体,并观察其亚细胞定位;利用q RT-PCR技术分析Nb ERF RAP2-1在CGMMV侵染不同时期的表达量;通过烟草脆裂病毒(tobacco rattle virus,TRV)介导的基因沉默(VIGS)和瞬时过表达Nb ERF RAP2-1分析其在CGMMV侵染过程中的作用。【结果】系统进化树分析表明,Nb ERF RAP2-1与多种烟草的ERF转录因子同源性极高,与拟南芥的ERF转录因子亲缘关系较远;亚细胞定位结果显示Nb ERF RAP2-1定位于细胞核,作为转录因子行驶功能;CGMMV侵染对本氏烟内源基因Nb ERF RAP2-1的转录水平影响结果显示,在CGMMV侵染6、9、12 d时Nb ERF RAP2-1的表达量无明显变化,在CGMMV侵染15和18 d时Nb ERF RAP2-1表达量显著下调;TRV介导的VIGS可以将植物内源基因Nb ERF RAP2-1有效沉默,在沉默的植株系统叶上接种CGMMV,8 d对照植株系统叶出现斑驳、卷曲症状而Nb ERF RAP2-1沉默植株无症状,同时CGMMV RNA水平和蛋白水平检测结果也表明TRV:Nb ERF RAP2-1可以有效抑制CGMMV的积累;同样,分别在本氏烟叶片瞬时过表达Nb ERF RAP2-124、48和72 h时检测CGMMV RNA水平和蛋白水平表达量,结果显示在病毒侵染早期,即复制阶段就抑制CGMMV的表达。【结论】Nb ERF RAP2-1可以有效抑制CGMMV侵染初期病毒复制,即病毒RNA复制阶段;随着CGMMV不断侵染,在CGMMV细胞间运动和系统运动时期,CGMMV识别防御相关基因Nb ERF RAP2-1并抑制该基因的转录;当Nb ERF RAP2-1缺失后可能抑制了下游蛋白的转录或表达,从而抑制病毒侵染后期的积累。由此可见,Nb ERF RAP2-1在CGMMV侵染过程中发挥了重要作用。

浅析反恐基础防范中如何加强暴恐分子可能利用物品的管控

通过对当前反恐基础防范工作中可能被暴恐分子利用物品管控的现状和难点进行梳理和分析,发现公安反恐基础防范工作还存在体制建设不完善、管控思路和重点有失偏颇、专业部门指导不力和全民反恐意识淡薄等亟待解决的问题,应当有针对性地通过进一步健全反恐防恐体制机制、及时调整工作思路、增强全民反恐意识和识别能力、提升专业反恐水平、积极探索防恐物联网建设等途径,力求进一步有效提升反恐基础防范工作水平。

海淀区盗窃自行车违法犯罪调查及对策

自行车丢失被盗是关系百姓切身利益的大问题。海淀公安分局组织专人对本区的盗窃自行车违法犯罪情况进行了深入调查、分析,并提出了针对性工作对策。

谈合理造林密度的重要意义

造林密度和树木生长有着十分密切的关系，并不是密度越大树木生长得越快、产量越高。一般应遵循能适时郁闭、幼树生长良好为标准。其合理的密度应根据立地条件、树种生物学、生态学特性、造林目的、作业方式和中间利用的经济价值等要求的不同，因地制宜地确定，过稀过密都不妥当。合理的林分结构是森林获得高产的基础，在生产实践中常通过调整树种组成和密度来调节林分的结构。

试述贡王对喀喇沁旗教育的贡献

贡桑诺尔布(1872——1931),字乐亭,号夔盦,系成吉思汗勋臣乌梁海济拉玛的后裔,卓索图盟喀喇沁右旗第十二代世袭札萨克多罗都棱郡王,兼卓索图盟盟长,性极平静,平易近人。有《竹友斋诗集》流传于世,好属文,工书法,并擅长绘画,求知欲强。可以说贡王一生手不释卷。贡王青年时代在地方上办了许多为旗民所称道的事情,特别是在兴办新式教育方面,堪称蒙旗王公中的翘楚。贡桑诺尔布在承袭王位以前,常随父留驻北京。洋务运动、百日维新使他了解到西方先进的教育。光绪二十六年(1900)年,义和团运动失败,"帝后蒙尘"。八国联军侵入后,年轻有为的贡王遂有了兴学练兵、发奋图强、振兴蒙旗、光复成吉思汗祖业的决心。而留日的民主革命家吴绶卿先生对贡王的新政改革则起到促动作用。

滑子蘑高产栽培技术

滑子蘑近年来在国际上的需求量不断增加,市场前景广阔。本文详细介绍了滑子蘑的高产栽培技术,并在结尾进行了效益分析,为滑子蘑种植技术在农村的推广应用起到了推动作用,对其它食用菌类的栽培也有一定的参考价值。

玉米黄花叶病毒在河南省小麦玉米上的分布及其CP序列分析

0 引言.河南省是我国玉米小麦的种植大省,玉米和小麦的种植面积常年保持在3 800千公顷和5 670千公顷以上。玉米黄花叶病毒(maize yellow mosaic virus, MaYMV)是2016年在我国云南省玉米上首次发现的一种新病毒[1],属于马铃薯卷叶病毒属(polerovirus),能够引起玉米植株叶片黄化、花叶、红叶等症状[6],之后该病毒在亚洲[1-2]、非洲[3-4]、南美洲[5]等地区禾本科作物上均有发现.

浅谈中学英语词汇教学的方略

英语教学中词汇教学是一个难点,教师应该想方设法从学生的角度出发,强化英语词汇教学,提升词汇教学的效果,让学生顺利掌握大量的英语词汇。英语教师首先要重视词汇教学,从思想上提高对词汇教学的认识,思想决定行动,思想上的认识决定了行动上的主动性。其次,教师要创新教学方法,提升词汇教学的效率,有了好的方法的才能实现好的结果,好方法是好结果的基础。第三,教师要努力提升学生的自主学习能力,让学生充分利用好课外时间,强化对英语词汇的自学。最后,教师要对学生进行思想教育,提升学生对英语词汇的重视。只有学生真正重视起来,才能从根本上解决英语词汇的问题。

略谈英语教学中的误区和解决办法

新课改背景下,在教学实践中,强调学习方法的承接,强调学生学习能力的提升和思想意识的培养,促进学生养成在生活中学习英语的习惯,在学习中逐步形成自己的思维特点。现阶段初中英语教学中存在的主要问题:英语教学目标偏移;教师和学生缺少沟通;学生缺少学习兴趣。在中学英语教学过程中,教师应该主动规避传统的教学误区,打破自己在中学时代遗留下来的错误学习理念,用更新的教学理念去指导教学实践,注重学习方法和学习兴趣的培养。

略谈在课堂上培养学生问题意识的方法

学问学问,顾名思义,就是在'问'中学习。实践证明,有问题意识的学生往往是学习成绩比较好的人。如果教师能有意识的在课堂上培养问题意识,对学生未来的发展有极大的作用。那么,如何在课堂上培养学生的问题意识呢?笔者在长期实践中总结几点经验,具有比较好的操作性。一、培养学生在课堂上提出问题的勇气。提问在学生学习过程中起着举足轻重的作用。而在实际的课堂学习中能提出问题的学生少之又少。原因何在?