乙型脑炎病毒XJ/08/01株的分离鉴定及PrM/E基因的遗传进化分析

从新疆维吾尔自治区石河子地区某猪场采集了150份猪脑组织样品,利用RT-PCR方法进行流行性乙型脑炎病毒(JEV)NS1基因扩增,结果有32份组织样品扩增出了430 bp的特异性目的条带。用检测的阳性样品研磨液接种乳鼠进行JEV的分离,经3次乳鼠传代后获得了1株JEV,命名为XJ/08/01。在此基础上,设计引物从接毒乳鼠脑组织样品中扩增JEV的主要抗原基因PrM/E并进行序列分析,结果表明,该分离毒株与JEV疫苗株SA14-14-2的同源性为99.6%,根据基因分型法确定该分离株属于基因Ⅲ型JEV。

口蹄疫病毒多价DNA疫苗的构建及其免疫原性

目的构建口蹄疫病毒(FMDV)多价DNA疫苗,并检测其免疫原性。方法以复合多表位表达盒OAAT及AsiaⅠ型FMDV的P1-2A-3C基因为基础,构建FMDV多价DNA疫苗pIRES-OAAT-P1-2A-3C,并用间接免疫荧光(IFA)方法检测目的蛋白在HeLa细胞中的表达。进一步进行小鼠免疫试验,并应用ELISA法检测小鼠血清抗体,ELISPOT检测小鼠脾淋巴单细胞IFN-γ的分泌水平,流式细胞术检测脾T淋巴细胞亚群数量,淋巴细胞转化试验检测特异性淋巴细胞增殖水平。结果所构建的FMDV多价DNA疫苗在HeLa细胞中获得了正确表达。免疫小鼠后,血清特异性抗体水平、脾淋巴单细胞IFN-γ的分泌、脾T淋巴细胞亚群CD4+和CD8+的数量及特异性淋巴细胞增殖水平均显著提高。结论已成功构建了FMDV多价DNA疫苗,并诱导小鼠产生了特异性的细胞免疫和体液免疫应答。

治疗用质粒DNA的纯化工艺

目的探索适合大规模生产治疗用质粒DNA的纯化工艺。方法采用中空纤维柱收菌、碱裂解,再应用中空纤维柱浓缩质粒,经分子筛、亲和、离子交换等层析分离纯化质粒DNA,并应用凝胶电泳、PCR、核酸蛋白检测仪、BCA蛋白检测试剂盒和内毒素检测试剂盒对所纯化的质粒DNA进行全面检定。结果所获得的超螺旋质粒DNA达到样品总质粒的91.2%;质粒DNA总纯度为1.8;内毒素含量小于10EU/mg;几乎检测不到蛋白质残留,未检出基因组DNA残留。各项指标均符合有关质量标准。结论所采用的纯化工艺省时省力,制备的质粒DNA纯度高,适用于大规模生产治疗用质粒DNA。

共表达口蹄疫病毒O型P1-2A-IL-18基因和Asia I型P1-2A-3C基因重组鸡痘病毒的构建

目的构建共表达口蹄疫病毒(FWDV)O型P1-2A-IL-18基因和AsiaI型P1-2A-3C基因的重组鸡痘病毒。方法将酶切得到的FWDVO型P1-2A-IL-18基因和AsiaI型P1-2A-3C基因克隆至鸡痘病毒表达载体pUTAL上,构建重组鸡痘病毒转移质粒pUTAL-P1-2A-3C-P1-2A-IL-18,与鸡痘病毒(FPV)282E4株共转染鸡胚成纤维细胞(CEF),通过BrdU3次加压筛选,挑选出单克隆重组病毒株,进行RT-PCR及间接免疫荧光(IFA)鉴定。结果重组鸡痘病毒转移质粒pUTAL-P1-2A-3C-P1-2A-IL-18经双酶切鉴定证明构建正确。经RT-PCR和IFA鉴定,证明所筛选的重组鸡痘病毒在CEF中能正确表达P1-2A-3C-P1-2A-IL-18基因盒。结论已成功构建了共表达FMDVO型P1-2A-IL-18基因和AsiaI型P1-2A-3C基因的重组鸡痘病毒。

Asia-I口蹄疫病毒P1-2A基因真核表达质粒的构建及小鼠免疫试验

目的:构建含有Asia-Ⅰ型口蹄疫病毒(FMDV)衣壳蛋白前体P1-2A基因的真核表达质粒pVAXⅠ-P1-2A,并用pVAXⅠ-P1-2A免疫小鼠,评价其体液免疫和细胞免疫水平。方法:通过RT-PCR方法扩增得到含有FMDVP1-2A编码区的目的基因,并将其克隆到pMD18-T载体上。将pMD18-T-P1-2A和pVAXⅠ分别经EcoRⅤ和XbaⅠ双酶切后连接构建真核表达质粒pVAXⅠ-P1-2A。将酶切鉴定正确后的重组质粒转染HeLa细胞进行IFA检测。再进行小鼠血清特异性抗体试验、小鼠T淋巴细胞增殖试验和IFN-γ ELISPOT试验。结果:酶切结果与预期目的条带大小相符;荧光结果表明经pVAXⅠ-P1-2A转染的细胞有明显的黄绿色荧光,说明P1-2A基因在HeLa细胞中得到了表达;小鼠免疫结果表明,免疫的小鼠都产生了较强的体液免疫和细胞免疫,并且T淋巴细胞增殖数和产生IFN-γ的细胞数和对照组相比显著提高(P<0.05)。间接ELISA试验表明,在免疫第14天抗体水平比对照组明显增高(P<0.05)。结论:成功构建了真核表达质粒pVAXⅠ-P1-2A,并通过小鼠免疫试验发现重组质粒试验组能够诱导产生特异性的体液免疫和细胞免疫应答。

如何提高小学语文课堂的趣味性

在语文教学中,教师要全面认识课本的独特魅力,并了解学生的个性心理特征,把握学生的学习动机,根据实际的教材知识,对学生积极引导,不断培养他们的学习兴趣。努力提高小学语文教学的趣味性成为广大教师追求的目标,也是提升课堂教学质量的重要途径。通过编排课本剧、创设情境、做游戏、讲典故来提高小学语文课堂的趣味性,让学生对语文课堂充满兴趣,充满期待。学生在学习的过程中不仅仅学习语文知识,更重要的是认识生活中的真善美,让学生学会感悟生活,提高精神境界和人生品味。

把道德寓于儿童生活中

著名教育家陶行知说＂要把教育从鸟笼里解放出来……鸟的世界是树林,教育的世界是整个社会生活。＂新课程理念也倡导品德教学回归生活,强调以儿童现实生活为课程基础。道德寓于儿童生活的方方面面。

提升学习能力是育人之源头活水

目前，小学生之间成绩差距大，为了缩小这种差距，我们组织相关人员对学生和教师进行了问卷调查，调查结果真实地反映了现在学生学习能力的现状：注意力不足、视觉分辨能力不强、视觉追踪力不强、听觉追踪与分辨能力不强、记忆能力不足、思维能力不强等。以上现象都会直接影响到学习成绩，我们清醒地认识到发展学生学习能力的重要性，力求在提升学生学习能力方面有所突破。经过研究实践，我们总结了一些训练基本学习能力的办法。

如何提高语文课堂的趣味性

兴趣是学生学习的动力源泉,是学生进步的阶梯。众所周知,语文是百科之母,与社会生活息息相关。在小学阶段激发起学生学习语文、运用语文的兴趣会让学生受益一生。所以,提高小学语文课堂的趣味性是我们每个语文教师,特别是小学语文教师的重要责任。如何提高小学语文课堂的趣味性呢?可以从以下几个方面入手。

“找规律”教学纪实与评析

教学内容：人教版2年级下册第九单元“找规律”。 教材分新：学生在1年级学习了找规律，本课教材是在学生已有知识和经验的基础上，对图形、数字、汉字的排列规律继续进行探究，让学生通过操作、观察、实验、猜测等活动认识循环排列的规律。让学生在具体的探索活动中发现和欣赏数学美，进而去创造美。

国内不同基因型Asia1型口蹄疫病毒RT-PCR检测方法的建立

目的建立口蹄疫病毒(FMDV)Asia1型江苏/05谱系及新疆/03谱系毒株的二联RT-PCR检测方法。方法在比较大量国内外FMDV流行毒株序列的基础上,设计检测不同基因型Asia1型FMDV江苏/05谱系及新疆/03谱系毒株的二联PCR引物,优化单项和二联RT-PCR反应条件,并进行特异性及相关病毒检测。结果优化的单项和二联RT-PCR特异性均良好,检测9份FMDV,病料的结果与其基因序列测定结果完全一致。结论已建立了FMDVAsia1型江苏/05谱系和新疆/03谱系毒株的二联RT-PCR检测方法,为FMDV的诊断、流行病学调查及疫苗应用奠定了基础。

二价重组鸡痘病毒口蹄疫疫苗的豚鼠免疫试验

目的检测携带口蹄疫病毒(FMDV)Asia-1型P1-2A-IL18基因和O型P1-2A-3C基因的重组鸡痘病毒疫苗诱导豚鼠产生特异性体液免疫和细胞免疫的能力。方法将重组鸡痘病毒vUTAL-P1-2A-IL18-P1-2A-3C、w-FPV和PBS分别经肌肉注射免疫豚鼠,检测豚鼠脾T淋巴细胞亚群数量、特异性CTL细胞杀伤活性和血清中抗FMDV特异性抗体水平。结果重组鸡痘病毒免疫豚鼠脾细胞中T淋巴细胞亚群数量和特异性CTL细胞杀伤活性均显著高于w-FPV和PBS对照组,且能产生抗O型和Asia-I型FMDV特异性抗体。结论二价重组鸡痘病毒口蹄疫疫苗能诱导豚鼠产生特异性体液免疫和细胞免疫。

体育强国视域下体育训练的改革与发展研究

伴随着北京奥运会的成功举办,我国体育事业的发展实现了进一步飞跃。在此背景下,我国提出了体育强国战略,旨在将我国从体育大国建设成为体育强国,实现体育现代化建设。但是就目前发展水平而言,虽然我国体育事业已经取得了很大的进步,具有一定的成绩,但是与发达体育强国相比,依然有很大的发展差距。基于此,该文首先介绍了体育强国战略发展的背景;接着分析了体育强国视域下我国体育的发展现状;进而分析了在体育强国视域下我国体育训练的发展方向,最后剖析与研讨我国体育强国建设的发展路径,进而,对体育强国视域下我国体育训练的现状和发展对策进行探究。

机库大门吊装技术

机库大门吊装技术于长勇，张伯岳中建一局四公司北京１工程概况喷漆机库是北京飞机维修工程有限公司的扩建工程，建筑面积４０１８ｍ’，建成后能满足波音７４７大型民航飞机的退漆、清漆、喷漆和维修工作。机库大门总宽度８２．ｓｉｎ，高２１．８４ｍ，由８扇大门组成（...

异步电动机的瞬态发热分析

异步电动机瞬态发热分析已成为电机设计者改进电机的可靠性和优化转子设计的一个感兴趣的课题，瞬态热特性的研究对发现异步电机故障的原因是十分有用的。本文应用文献提供的热传导系数，提出一种异步电动机的二维瞬态分析方法。分析利用基于Ｇａｌｅｒｋｉｎ加权余量技术改进的一般有限元格式，采用一台３．７ｋＷ的鼠笼型ＴＥＦＣ电机和一台５．７ｋＷ表面冷却电机作为模型，预测的温度与试验结果作了比较。

旋转电机轴电流测量技术的比较

不规划的电动机磁路可能引起寄生电压这些寄生电压导致轴承电流通轴，轴承，轴承座，并经过机座闭合，用于多相异步电动机和发电机的ＩＥＥＥ标准测规程论述了轴电流并给出了一种记录轴端电压或电流的测量方法，本文论述了另一测量方法，及其在测定大型异步电机的轴电流方面的应用。