人乳腺癌HPV感染的超微结构和DNA分子原位杂交研究

目的 :对乳腺癌的HPV感染进行形态学定位研究。方法 :对 4 6例乳腺癌切除标本及 7例良性病变标本进行透射电子显微镜以及HPVDNA分子原位杂交检测。结果 :透射电镜下 ,14例 (30 4 0 % )乳腺癌细胞核内有HPV样病毒颗粒 ,颗粒直径 30～ 5 0nm ,或弥漫散布 ,或聚集成团呈假结晶状排列。颗粒圆形或略不规则 ,含有HPV样颗粒的癌细胞核异型性较明显。7例良性病变细胞核内未见到HPV样颗粒。HPVDNA分子原位杂交显示 ,2 1例 (45 6 5 % )乳腺癌细胞核内HPV31/ 33DNA阳性 ,1例软骨肉瘤样化生性癌细胞核同时有HPV31/ 33及HPV16 / 18阳性 ;1例纤维腺瘤 (14 2 9% )也显示HPV31/ 33DNA阳性 (χ2 =2 74 31,P <0 0 5 )。电镜下 85 %病毒样颗粒阳性病例中可检测到HPVDNA存在 ,两种检测结果符合率达73 91%。结论 :乳腺肿瘤内存在未组装的、裸型病毒样颗粒。

肝移植后肝脏组织活检的动态病理学分析

目的:分析肝脏组织活检在肝移植后常见并发症鉴别诊断中的作用。方法:在52例原位肝移植中,27例因肝功能障碍在术后0～330d不等接受肝脏活检。其中经皮肝穿刺44次,肝脏楔形活检6次,总计活检50次。标本经常规行HE染色,并根据需要加染组织化学或免疫组织化学染色后作显微镜观察。结果:急性排斥反应分别占受检病例及总移植病例数的48.15%和25.00%;慢性排斥反应分别占两者之14.81%和7.69%;保存/再灌注损伤分别占25.93%和13.46%;肝动脉栓塞分别占11.11%和5.77%;肝内胆道损伤占7.41%和3.85%;CMV感染占3.70%和1.92%;肝炎复发占3.70%和1.92%;可疑药物性肝损伤占11.11%和5.77%。结论:急性排斥反应和保存/再灌注损伤是移植后早期肝功能障碍的主要因素;肝动脉栓塞和供肝冷缺血可导致肝内胆道损伤;急性排斥反应及病毒感染与慢性排斥反应的发生有关;而药物诱发的肝损伤因缺乏特异性改变则应密切结合临床并采取排除诊断法。

细胞增殖标记物MIB1(Ki-67)在乳腺癌中的表达及核分级的研究

目的 研究细胞增殖标记物ＭＩＢ１（Ｋｉ６７） 在乳腺癌中的表达以及肿瘤细胞核分级（Ｎｕｃｌｅａｒ Ｇｒａｄｉｎｇ，ＮＧ）在浸润性导管癌中的应用价值，探讨ＭＩＢ１ 和ＮＧ二指标的内在联系。 方法 将石蜡切片置于０－０１ ｍｏｌＬ枸橼酸缓冲液内进行微波修复抗原处理，然后行ＭＩＢ１ 单克隆抗体ＬＳＡＢ免疫组织化学染色。镜下观察结果并计算每张切片内的ＭＩＢ１ 标记指数（ＭＩＢ１ Ｌａｂｅｌｌｉｎｇｉｎｄｅｘ，ＭＩＢ１ ＬＩ） 。对浸润性导管癌根据癌细胞核大小、异型性及核分裂相多少进行核分级。对乳腺癌病例进行随访，随访期为１３ ～２４ 个月。 结果 乳腺癌的ＭＩＢ１ 表达明显高于乳腺良性病变；ＭＩＢ１ ＬＩ随着肿瘤由导管原位癌（８－２７±４－６６） 向浸润性导管癌（１６－１０±１１－６２）进展而明显增高（Ｐ＜ ０－０５）；伴随着浸润性导管癌细胞核分级的增加，ＭＩＢ１ ＬＩ也呈增高趋势。随访结果显示，一例ＮＧ３ 的浸润性导管癌（ＭＩＢ１ ＩＬ１４－１３） 于术后１１ 个月死于广泛转移（ 经尸体解剖证实），该患者术后对放射治疗不敏感。 结论 ＭＩＢ１ ＬＩ在乳腺良恶性病变鉴别诊断中有辅助作用；在浸润性导管癌的预后判断中，ＭＩＢ１

胃癌中IRX1基因的表达及生物信息学功能预测

目的:研究胃癌中同源盒基因IRX1的表达并分析该基因的结构与功能特征。方法:从NCBI基因数据库中提取IRX1基因(NM-024337)编码序列及5'端转录起始点上、下游各3,000bp,利用生物信息学程序进行基因结构与蛋白同源性分析;对7株人胃癌体外培养细胞株及57例胃癌采用半定量RT-PCR方法检测IRX1基因mRNA表达。结果:IRX1基因转录起始点上游富含CpG岛;基因编码蛋白质含有HOX与IRO两个模序,3'端第400～450氨基酸为富含脯氨酸区域;IRX1～IRX6为高度同源性蛋白。7株胃癌细胞株中4株IRX1表达消失,3株表达降低。57例正常胃粘膜有IRX1mRNA表达,但对应的胃癌组织中20例(35.09%)mRNA表达下降,其中肠型胃癌占65%。结论:IRX1基因在胃癌中呈不同程度的表达下调,并与胃癌的形态学表型,尤其是肠型胃癌明显相关。IRX1基因转录起始点上游存在高甲基化结构基础。

2010版WHO胃肿瘤临床病理学分类及分期解读

胃癌临床诊治中广泛采用世界卫生组织（WHO）分类与分期系统,以规范使用病理诊断与临床病理分期的标准化术语,便于国内、外不同医学中心间的数据对接及比较。

肝功能衰竭肝移植受体的病因及病理学特征

目的研究因肝功能衰竭而接受肝移植治疗患者的病因及病理学特征。方法收集肝功能衰竭肝移植受体41例,分析临床病史、血清病毒学指标、病肝质量以及病理组织学改变。结果41例中男33例,女8例,中位年龄44.1岁。其中急性肝功能衰竭5例;亚急性肝功能衰竭5例,移植后纤维化淤胆性肝功能衰竭1例,其余30例既往均有慢性肝病、肝硬化史,近期病情加重出现肝功能衰竭。以上各类患者手术摘除肝脏的平均质量比较无显著性差别(P<0.05)。组织病理学改变包括:①肝脏呈新鲜大块、亚大块坏死,仅见少量再生肝细胞;②新旧不等的亚大块坏死,肝细胞再生较为明显;③在肝硬化背景上出现广泛性大块、亚大块坏死,同时可见明显的肝细胞再生;④在肝硬化背景上出现活动性炎症伴明显淤胆,有些假小叶呈现片状坏死或自溶;⑤少见类型肝功能衰竭如急性妊娠脂肪肝和移植后纤维化淤胆性肝炎。结论目前慢性肝病基础上发生的肝功能衰竭,临床与病理均缺乏统一规范的诊断标准,是肝功能衰竭临床病理诊断中的难点,需不断积累病例深入研究。

肿瘤组织库建立的进展及意义

收集高质量的人类肿瘤组织及以血液为主的体液样本是发现新型肿瘤生物标志物及药物作用新靶点的物质基础。高质量的生物样本也是决定转化医学研究的重要限速性因素。美国、加拿大、英国、法国等均已建立完备的肿瘤样本库。

显微数字成像组合组织芯片技术平台的建立及其在肿瘤标志物研究中的应用

目的:利用我室新建立的显微数字成像组合组织芯片技术平台探讨新型肿瘤标志物MDA-7/IL-24在胃癌中的表达及意义。方法:取胃癌标本50例及对应正常胃黏膜10例,从预先作好标记的供体石蜡块中取出目标组织,应用组织芯片点样仪制成一定阵列的受体石蜡块,将石蜡切片贴附于硅胶包被的玻片上,采用高敏感EnVision两步法进行MDA-7/IL-24单克隆抗体免疫组织化学染色。将染好的切片置于显微数字成像分析仪中读取图像信息并进行分析。结果:计算机软件将读取的组织芯片全貌显示在屏幕上,研究者在计算机定位下对每一标本点逐一放大分析。50例胃癌组织标本中,剔除组织脱落或取材部位欠佳的无效点,42例纳入统计分析。42例胃癌中27例MDA-7/IL-24表达消失(64.29%)。10例正常胃黏膜腺体细胞质MDA-7/IL-24染色全部阳性。MDA-7/IL-24表达消失组癌周淋巴结转移率明显增高(P=0.01),且在TNMⅢ、Ⅳ期患者明显多于TNMⅠ、Ⅱ期(P=0.003)。MDA-7/IL-24表达与否与年龄、性别、肿瘤发生部位及组织分型无明显关系。结论:显微数字成像组合组织芯片技术在筛查肿瘤标志物表达时显示出高通量、可比性强、计算机定位精确及图像清晰直观等优点,是后基因组时代大规模肿瘤标志物筛选定位分析中可以选择的一种新型技术平台。MDA-7/IL-24表达消失与胃癌的浸润生长及淋巴结转移增加有明显关系,故可将MDA-7/IL-24表达消失作为判断胃癌浸润、转移能力的一种新型肿瘤标志物。

乳腺癌HPV感染与临床病理学探讨

目的探讨乳腺癌及乳腺良性病变中人乳头状瘤病毒(HPV)感染的差异;HPV感染与乳腺癌病理类型的关系及对乳腺癌细胞形态产生的影响。方法在116例乳腺标本中,计进展期乳腺癌73例,乳腺良性病变43例。用显微镜观察浸润性导管癌细胞核异形性分级(nucleargrading,NG)、病毒感染相关的细胞内包涵体(inclusionbody)和“凹空细胞”(koilocytosis)样改变;以原位杂交法检测病变组织的HPVDNA。结果在73例乳腺癌中,29例(39.73%)HPV原位杂交检测呈阳性,43例乳腺良性病变中仅1例(2.33%)纤维腺瘤的部分上皮细胞呈HPV阳性。乳腺癌组HPV感染率明显高于乳腺良性病变组(P<0.001);HPV阳性病例集中在恶性程度较高的化生性癌和NG3、NG2组中(P<0.001)。73例乳腺癌中有21例(28.77%)可见癌细胞核内或核旁胞浆内包涵体,13例(17.81%)癌灶内见“凹空细胞”样改变。于有包涵体或“凹空细胞”样改变的乳腺癌病例,HPV阳性率分别超过70%和80%。结论部分乳腺癌及少数乳腺良性病变组织内存在HPV病毒感染。HPV阳性的乳腺癌恶性程度较高,临床上应密切随访。包涵体和“凹空细胞”样改变可在部分乳腺癌中出现,但出现率不高,然而原位杂交显示上述改变与HPV感染密切相关。

应用冷Schiff组织化学法检测人体组织脂质过氧化反应的研究

自由基引发的生物膜不饱和脂肪酸脂质过氧化反应涉及多种疾病过程。多年来检测脂质过氧化反应一直沿用生物化学 (如硫代巴比妥酸法测定丙二醛 )或生物物理技术 (如分光光度法测定共轭双烯 )。自从冷 Schiff组织化学染色技术用于自由基研究以来 ,使形态学方法研究脂质过氧化反应成为可能。当前 ,应用冷 Schiff组织化学法进行组织细胞的脂质过氧化反应检测大多限于动物实验研究。本研究对多种人体离体新鲜组织的冰冻切片应用冷 Schiff组织化学法进行检测 ,未发现被测组织存在组织化学水平上的脂质过氧化反应 ;但对被测组织人为施加氧化攻击 (用 Fe- NADPH促氧化剂孵育 )后 ,肝、肾及胃的泌酸细胞与其它组织相比呈现较明显的脂质过氧化反应 ;皮肤、脂肪组织几乎不出现脂质过氧化反应 ;甲状腺 C细胞、肌肉、骨骼等与钙代谢、贮存及利用相关的组织也出现较明显的脂质过氧化反应。结论 :冷 Schiff组织化学方法检测人体组织脂质过氧化反应具有简便易行、同时可以形态学定位的优点 ,在医学生物学、肿瘤学及老年医学研究中具有应用前景。

第5版WHO消化道肿瘤分类与分期解读:胃肿瘤

世界卫生组织(WHO)的肿瘤分类与分期是世界范围内被广泛采用的指南。WHO的分类系统一般是按人体不同系统分门别类介绍。该分类系统随着医学科学领域新技术、新进展、新病例的出现而更新改版。以消化系统肿瘤分类为例,前一版本(第4版)于2010年出版,本刊曾在2011年就WHO的胃肿瘤分类进行详细解读[1-2]。

我国胃肠道肿瘤生物样本库建设与发展15年回顾

肿瘤生物样本库是转化医学研究与精准医学研究的重要基础设施,在欧美等国家倍受重视。纵观我国胃肠道肿瘤生物样本库建设与发展走过的15年历程,在样本库建设形式上经历了最早的项目驱动性科室建设模式,发展到区域生物样本库网络融合模式,再到即将纳入国家重大基础研究设施建设规划模式。在样本库建设内容上,从最初仅收集患者外周血与肿瘤组织模式,至患者体液(血液与尿液)、组织及临床病理学信息同步收集与信息化管理模式。高质量的肿瘤生物样本是支撑我国胃肠道肿瘤研究领域开展国内或者国际重大合作研究项目的材料与信息资源保障。本文详尽介绍了我国胃肠道肿瘤生物样本库建设15年来的经验与存在问题,尤其对研究人员关心的长期低温冻存肿瘤组织生物样本的质量控制问题进行了介绍。

MUC1与β-catenin协同异常表达对胃癌细胞增殖的影响

目的探讨胃癌中MUC1与β-catenin异常表达的意义及其与胃癌临床分期、组织学类型、肿瘤发生部位、肿瘤大小和核分裂指数等临床病理学关系。方法收集外科胃癌手术切除标本61例,应用HE染色切片进行组织病理学分类与核分裂指数评价,EnVision两步法行MUC1与β-catenin单克隆抗体免疫组织化学染色,10%以上肿瘤细胞出现胞浆聚集及细胞核着色被视为异常表达。结果本组胃癌中32例(52.46%)有MUC1异常表达,29例(47.54%)有β-catenin异常表达,MUC1与β-catenin异常表达一致率为73.77%。MUC1异常表达组核分裂指数增加(P=0.027),肿瘤在胃底贲门部相对好发(P=0.068)。MUC1或β-catenin单项异常表达与其它临床病理学指标无明显关系。MUC1与β-catenin共同异常表达时核分裂指数增高较MUC1单项异常表达以及MUC1与β-catenin无异常表达组更加明显(P=0.004)。结论β-catenin的异常表达表明部分胃癌出现Wnt/β-catenin信号通道异常活化。MUC1通过Wnt信号通道辅助活化因子作用促进β-catenin对胃癌细胞增殖的调控,两者共同异常表达明显促进胃癌细胞增殖;MUC1与β-catenin可作为反映胃癌生物学行为的有用标记。

环孢素A及FK506对人肝癌细胞株增殖的影响

目的:探讨免疫抑制剂环孢素(CsA)及他克莫司(FK506)对肝癌细胞增殖的影响及可能机制。方法:采用噻唑蓝(MTT)比色法观察CsA及FK506对QGY鄄7701、QGY鄄7703、SMMC鄄7721和BEL鄄7402等4株肝癌细胞增殖的影响。还应用Hoechst33258荧光染料涂片,在荧光显微镜下观察用药组细胞的形态学改变。结果:随着作用时间延长,10μM的CsA对4株肝癌细胞均呈现明显的生长抑制效应(P<0.01),而0.5μM的FK506与对照组相比,其生长抑制作用不明显(P>0.05)。荧光显微镜下CsA用药组肝癌细胞呈现凋亡改变;而FK506用药组与对照组无显著差异。结论:免疫抑制剂CsA非但未促进体外肝癌细胞生长,相反呈明显的抑制效应。FK506尽管未呈现对肝癌细胞增殖的抑制效应,也未显示有生长促进作用。CsA对肝癌细胞的增殖抑制作用与诱导癌细胞发生凋亡有关。

生物芯片在胃癌药物病理学研究中的先导作用

生物芯片是后基因组时代医学研究中的重要手段,其在转录组、蛋白质组与肿瘤功能基因组研究中的作用日益突出。基因芯片、蛋白芯片与组织芯片构成了生物芯片的主体,该技术有望在胃癌特异性标志物发现上发挥作用。药物病理学是临床病理学领域的新兴分支学科,其主要工作是利用病理学手段识别肿瘤组织存在的分子靶点,为临床针对性靶向治疗提供用药依据。

胃癌的病理分型与预后

胃癌是消化系统的常见恶性肿瘤,因其对人类危害极大,发病率与死亡率多年来居高不下,故引起广大科研人员以及各级政府的重视。在胃癌的多学科攻关团队中,病理学工作者担负着对胃癌组织进行准确的病理分型、对候选肿瘤标志物或药物治疗靶点进行组织表达的验证等职责。胃癌的组织构造与细胞形态的异形性是对胃癌进行精细分型与分化程度判断的主要依据。习惯上将与胃组织相似程度高的肿瘤定义为＂高分化＂;

肝移植受体病肝组织中丙型肝炎病毒的检出及其临床意义

目的:检测成人肝移植受体丙型肝炎病毒(HCV)感染状态,探讨监测肝移植受体术后丙型肝炎复发的意义。方法:收集本移植中心器官移植受体摘除肝脏标本52例,采用Tordji鄄22和NS32种单克隆抗体进行免疫组织化学检测。结果:所有病例术前血清抗HCV检测均阴性。52例肝移植受体肝脏组织中20例(38.46%)肝细胞内有不同程度的HCV抗原存在。上述2种单克隆抗体的灵敏度及阳性表达方式略有不同,Tordji鄄22以肝细胞核表达为主,NS3以肝细胞胞质细颗粒状阳性为主。原发性肝癌肝移植组中HCV阳性细胞主要为癌旁肝细胞,少数癌细胞胞质也呈弱阳性。结论:在接受肝移植的慢性终末期肝病或原发性肝癌患者中,有相当病例受体肝脏有HCV感染。由于肝移植后应用大剂量皮质激素及免疫抑制药物可促进HCV病毒在移植肝的肝细胞内复制,导致丙型肝炎复发,明确肝移植受体肝脏HCV感染状态,对肝移植后病情监测、制定治疗方案具有指导意义。

生物信息学解读丙型肝炎病毒结构与免疫病理学改变的关联性

目的:分析丙型肝炎病毒(HCV)基因组编码序列结构特征及蛋白同源性,预测HCV非结构蛋白(NS)3序列的抗原表位。方法:以Envision免疫组织化学两步法检测肝移植受体肝组织内HCV抗原。从美国国立生物技术信息中心(NCBI)数据库中获取HCV编码序列,利用RPS-BLAST蛋白同源性比对软件进行序列分析;ProPred-Ⅰ软件预测NS3编码区段的T细胞抗原表位。结果:37%的受检病例肝细胞核对Tordji-22单克隆抗体起反应,33.3%的受检病例肝细胞核或细胞质对NS3抗体起反应。HCV编码产物HCV糖蛋白(gp)1的NS3区为保守区,与多种人类解旋酶具有同源性;其余各编码区未检测到与人类同源性。NS3区显示有CD4+和CD8+T细胞表位。结论:HCV NS3区含有与人类解旋酶同源的保守序列。解旋酶在细胞核参与核酸复制与DNA修复,故针对HCV NS3的抗原检测有可能与人类解旋酶起交叉反应。NS3的抗原表位特征可能是机体抗病毒同时破坏自身肝脏结构的分子基础。

APAAP高敏感信号放大技术在乳腺癌HPV DNA原位杂交检测中的应用

目的 探讨原位杂交 APAAP信号放大技术检测福尔马林固定 石蜡包埋乳腺癌组织HPV感染的实用性。方法 利用HPV通用型及亚型特异性探针 ,设定 4种杂交检测程序对 73例进展期乳腺癌和 34例乳腺良性病变进行HPVDNA原位杂交 APAAP信号放大检测。结果 在适宜的杂交程序下 ,39 19%的乳腺癌病例检测到HPVDNA ;良性病变中仅 1例 (2 94 % )纤维腺瘤检测到HPVDNA ,明显低于乳腺癌组 (P <0 0 1)。乳腺的大汗腺样化生区有细胞核阴性 细胞浆着色的假阳性反应 ,假阳性反应不足以被 1mmol L左旋咪唑阻断 ,但能被 0 2mol L盐酸前处理所消除。APAAP信号检测各步骤间的不同缓冲液可影响杂交结果。结论 只要杂交条件得当 ,原位杂交 APAAP检测技术在乳腺组织HPV感染研究中可获得满意结果。乳腺大汗腺样化生区内源性碱性磷酸酶含量较高 ,低浓度盐酸前处理有消除内源性碱性磷酸酶作用。

腹部大器官移植及移植后淋巴细胞增生性疾病

腹部大器官移植主要指肝移植、胰腺移植、小肠移植以及多器官联合移植．目前已成为拯救上述器官功能衰竭的有效治疗手段．为了控制受体手术后对异体移植器官产生的排斥反应,患者需要长期服用免疫抑制剂．长期服用免疫抑制剂可产生一系列的并发症,移植后淋巴细胞增生性疾病便是其中一种．现就腹部大器官移植后淋巴细胞增生性疾病的发病情况、临床病理学特点、疾病的临床分期以及治疗措施等进行系统论述．