佐剂对两种旋毛虫丝氨酸蛋白酶抑制剂免疫影响的研究

在寄生虫感染过程中,丝氨酸蛋白酶抑制剂在虫体与宿主相互作用间发挥着重要作用。在免疫过程中,不同佐剂的促免疫应答能力和提高免疫保护能力均不同。为了比较不同佐剂对两种丝氨酸蛋白酶抑制剂(TsAdSPI和TsKaSPI)免疫保护性的影响,通过对免疫剂量进行优化,应用间接ELISA的方法分析两种SPIs抗体应答,分别在肌肉虫攻击感染后第1天、第3天、第7天、第10天剖杀小鼠取成虫并计数,计算成虫减虫率。结果显示,用3种不同剂量(20、50μg和100μg)的重组蛋白免疫小鼠,50μg与100μg蛋白剂量免疫组诱导产生类似的抗体水平,且均高于20μg组;免疫组弗氏佐剂、ISA 206佐剂和铝佐剂分别与重组蛋白乳化后免疫,可诱导相似的免疫应答及成虫减虫率,其中佐剂ISA 206和氢氧化铝的保护效果更好。

应用dsRNA干扰技术对旋毛虫Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂基因功能的初步研究

为研究旋毛虫Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂基因的功能,通过电转法将dsRNA导入旋毛虫体内,应用实时荧光定量PCR和Western-blot检测经dsRNA-TsKaSPI电转法处理后肌幼虫TsKaSPI基因转录和表达水平。体外培养观察TsKaSPI基因沉默对肌幼虫存活的影响。将dsRNA导入后的幼虫经口接种小鼠,观察TsKaSPI基因沉默对幼虫存活、发育及雌虫生殖力的影响。实时荧光定量PCR和Western-blot检测结果显示,旋毛虫肌幼虫经30μg/mL dsRNA电转处理后TsKaSPI基因的转录和表达分别降低63.36%和69.24%(P<0.05)。TsKaSPI基因在dsRNA-TsKaSPI转入肌幼虫后第1天转录水平明显降低,第2和第3天仍处于较低的水平。PBS组、dseGFP对照组和dsRNA-TsKaSPI处理组的肌幼虫死亡率分别为61%、58%、52%(P>0.05)。将dsRNA电转处理的肌幼虫接种小鼠后6 d肠道成虫和35 d肌幼虫的减虫率分别为36.22%和31.87%。PBS组、dseGFP对照组和dsRNA-TsKaSPI处理组的感染小鼠收集到的雌虫新生幼虫量分别为49.20±5.93、49.40±4.62、50.80±4.32(P>0.05)。结果表明,dsRNA可明显抑制Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂基因的转录和表达及幼虫在小鼠体内的存活和发育。

旋毛虫丝氨酸蛋白酶抑制剂对旋毛虫体外入侵肠上皮细胞的影响

为探究2种旋毛虫丝氨酸蛋白酶抑制剂Ts Ad SPI和Ts Ka SPI对旋毛虫体外入侵肠上皮细胞的影响,建立了旋毛虫-Caco-2体外侵染模型,采用IPTG诱导大肠杆菌表达这2种旋毛虫丝氨酸蛋白酶抑制剂蛋白并大量纯化,探究不同剂量、不同作用时间Ts Ad SPI和Ts Ka SPI单独及共同作用于侵染模型对旋毛虫体外入侵肠上皮细胞的影响。结果表明：Ts Ad SPI和Ts Ka SPI对旋毛虫入侵肠上皮细胞均有促进作用：2种蛋白单独作用时,剂量为100 g且作用时间为5 h时,入侵率最高;2种蛋白共同作用时,剂量为100 g且作用时间为3 h时,入侵率最高;并且这2种蛋白的单独作用效果优于共同作用效果,这2种蛋白共同作用产生拮抗效果。为进一步研究旋毛虫丝氨酸蛋白酶抑制剂对旋毛虫入侵宿主的影响奠定了基础。

交通事故死亡伤员损伤特点法医学观察

分析交通事故死亡伤员损伤的法医学特点。方法:针对2020年07月至2021年07月期间司法鉴定所受理的84例交通事故死亡伤员的法医鉴定结果进行回顾,分析此类伤员损伤的法医学特点。结果:84例交通事故死亡伤员中男性占比76.19%高于女性23.81%,差异有统计学意义(P<0.05);交通事故死亡伤员涉及肇事车辆以小型车辆为主,占比52.38%;交通事故死亡伤员死亡原因以严重颅脑损伤为主,占比65.48%;交通事故死亡伤员多当场死亡,占比66.67%;交通事故死亡伤员涉及肇事地点以省道为主,占比33.33%。结论:交通事故致死的情况较多,通过法医鉴定有助于掌握肇事车辆、肇事地点、死亡原因、死亡事件等信息,一方面可以为事故责任划分提供依据,另一方面也可以为交通事故预防工作提供一定理论依据,价值显著值得重视。

300例指骨骨折的法医学鉴定

探讨指骨骨折的法医学鉴定特征与要点。方法:收集一年内进行法医学鉴定的300例指骨骨折患者的临床资料。回顾性分析其一般伤情、骨折分布位置、骨折形态、影像学检查结果、致伤原因、鉴定结果等资料,探讨如何综合运用影像学检查、病历、法医检查等手段对指骨骨折开展法医学鉴定。结果:300例指骨骨折被鉴定人中,年龄17~73岁,平均(38.12±3.25)岁。年龄分布情况:其中≤25岁60例(20.00%),25~45岁131例(43.67%),46~65岁82例(27.33)、>65岁27例(9.00%)。性别构成:男性245例(81.67%),女性55例(18.33%);300例指骨骨折患者中,患者的左右手骨折总数比较,差异无统计学意义(p>0.05),其中食指骨折发生率显著最高,总发生率达为29.67%;指骨骨折中,以远节指骨最多见(53.00%,159/300),中节指骨最少见(22.67%,68/300),左右手各指节分布无显著差异(p>0.05);300例指骨骨折患者中,以横行骨折最为常见(45.00%,135/300),其次为粉碎性骨折(25.67%,77/300);致伤物以刀械类最为常见(37.00%,111/300),其次为棍棒(23.67%,23.67%)。结论:致伤方式和致伤物对于骨折分布位置、类型、损伤程度有较大影响,综合上述指标分析对于指骨骨折的法医学鉴定有重要意义。