利用酵母双杂交技术筛选与新孢子虫NcSRS2蛋白相互作用的宿主蛋白

【目的】筛选与鉴定与新孢子虫NcSRS2蛋白相互作用的Vero细胞蛋白。【方法】从Nc1株犬新孢子虫速殖子中提取DNA作为模板,PCR扩增NcSRS2基因,克隆于pGBKT7表达载体,构建诱饵载体pGBKT7-NcSRS2,转化入Y2H酵母感受态细胞,进行自激活活性验证和细胞毒性检测。利用酵母双杂交技术,以转化诱饵载体pGBKT7-NcSRS2的Y2H酵母菌株与Vero细胞cDNA文库进行酵母双杂交,筛选与NcSRS2蛋白相互作用的宿主蛋白,对阳性克隆进行测序,并用BLAST分析,筛选出与NcSRS2存在相互作用的Vero细胞蛋白质。【结果】诱饵载体pGBKT7-NcSRS2无自激活活性和细胞毒性,可用于文库筛选。运用酵母双杂交系统,筛选出2个与NcSRS2相互作用的Vero细胞成分,分别是NADH dehydrogenase subunit 1和STMN2。【结论】本研究首次运用酵母双杂交技术筛选出与新孢子虫NcSRS2相互作用的Vero细胞蛋白质,为进一步研究犬新孢子虫NcSRS2参与黏附及入侵宿主细胞的机制奠定基础。

右美托咪定神经保护机制的研究进展

长时间接受全身麻醉会损害发育期认知功能的形成,也会加速老年认知功能退化。近年来研究发现,右美托咪定(Dex)作为一种α2肾上腺素能受体激动剂,不仅能与其他麻醉药联合使用,从而减少其他全身麻醉药的用量,还可以减轻麻醉药诱发的神经细胞氧化应激、细胞凋亡和线粒体损伤等,起到一定的神经保护作用。因此,本文从神经炎症和炎性因子释放、氧化应激、基因表达、细胞自噬、细胞凋亡、突触可塑性和神经发生等角度系统阐述Dex在麻醉过程中神经保护的作用机制,为进一步研究Dex的神经保护机理提供理论依据,为其在兽医临床和比较医学领域中的进一步应用提供参考。

犬新孢子虫Nc-1株在MDBK、Vero和MDCK细胞中的培养比较

为了分析新孢子虫在3种不同宿主细胞内的生长情况,该试验采用犬新孢子虫Nc-1株,将其与牛肾细胞(MDBK)、非洲绿猴肾细胞(Vero)和犬肾上皮细胞(MDCK)在37℃条件下培养10 d,每天观察比较3种细胞在虫体入侵前后的形态变化并记录虫体数量,绘制虫体生长曲线。结果表明:犬新孢子虫Nc-1株在MDBK、Vero和MDCK细胞中均能够正常生长。其中,Nc-1株在入侵Vero细胞的第6天可以较快达到生长高峰期,而在MDBK和MDCK细胞中生长较慢,在第7天才能达到虫体数量的最大值,且MDCK细胞中虫体数量最少。因此,除Vero细胞外,MDBK细胞也可作为一种培养新孢子虫良好的细胞系。该试验为深入了解新孢子虫感染机制和选择合适的体外培养模型提供重要参考。

利用SELEX技术筛选针对寄生虫的核酸适配体研究进展

核酸适配体是人工合成的寡核苷酸序列,经指数富集的配体系统进化技术(SELEX)体外筛选获得。近年来,核酸适配体在生物医学领域的研究备受关注,因其能够与寄生虫、细菌、病毒等不同病原体的特定靶标进行高亲和力的特异性结合。该文综述了利用指数富集配体系统进化技术筛选针对寄生虫抗原的核酸适配体研究进展,介绍了指数富集配体系统进化技术的基本原理和流程,并重点探讨了在寄生虫研究领域中应用该技术筛选核酸适配体的最新研究进展。

新农科背景下兽医微生物学课程思政教学改革与实践

本文从兽医微生物学课程思政的教学改革及实践出发,分析兽医微生物学课程思政的必要性和实践过程中遇到的问题,深入挖掘思想政治教育资源,融入到专业课知识的传授中,把自身专业素养有机转化为价值导向,实现为“三农”人才的培养服务,也为其他自然科学类课程的思政教育提供理论支撑和教学经验。

案例导入法在兽医法规教学中的应用研究

为了提高兽医法规教学质量,激发学生学习法规的兴趣,在兽医法规教学过程采用案例导入法,增强学生解决实际问题的能力。本文探讨了案例导入法的作用和特点及案例的选择和呈现。

氯氨酮对小白鼠全身麻醉的试验

为筛选较理想的小白鼠全身麻醉药物,选健康成年小白鼠32只,随机分成4组,用氯氨酮进行全身麻醉,观测麻醉前后小白鼠的呼吸变化及其诱导期、麻醉期和苏醒时间.小白鼠腹腔注射氯氨酮1～1.5 mg/10 g体重,4～8 min可平稳进入麻醉状态,麻醉诱导快,小白鼠无呕吐、躁动等现象,呼吸次数变化不明显,可持续20～40 min.氯氨酮用于小白鼠的麻醉,安全有效.

猪附红细胞体实验动物模型的建立

为建立一种合适的猪附红细胞体病动物模型,利用摘除脾和/或注射地塞米松的昆明小白鼠,以腹腔注射方式人工感染猪附红细胞体,通过血液涂片镜检、PCR检测、临床症状观察及病理剖检对感染情况进行了鉴定。结果显示,猪附红细胞体能够经腹腔注射感染昆明小白鼠,且感染鼠表现出与猪附红细胞体病相似的临床症状。结果表明,猪附红细胞体实验动物模型已成功建立,并证实啮齿类动物在附红细胞体的传播过程中发挥着重要作用。

牛瑟氏泰勒虫P33表面蛋白基因的克隆与序列分析

为分析吉林省流行的牛瑟氏泰勒虫基因序列,根据GenBank上发表的牛瑟氏泰勒虫P33表面蛋白基因序列设计合成一对引物,用PCR方法扩增出牛瑟氏泰勒虫的基因片段,并成功地将该基因纯化后克隆到pGEM-TEasy载体上,将经EcoRⅠ酶切鉴定和PCR鉴定为阳性的重组质粒进行测序。结果表明克隆的基因片段长度为868bp,编码283个氨基酸,有2个潜在的糖基化位点。核苷酸同源性分析表明,该基因片段与韩国株(AF521557)、日本株(AB016280)、俄罗斯株(AB016279)的核苷酸序列同源性分别为99.4%、88.0%、88.1%。

牛瑟氏泰勒虫病PCR诊断方法的建立

为建立特异、敏感、快速的诊断方法,根据本实验室已测得的瑟氏泰勒虫P33表面蛋白基因序列,设计一对特异性引物,扩增出大小为499 bp的基因片断,经克隆、测序分析,与已知基因序列同源性为100%。用该对引物建立的牛瑟氏泰勒虫病PCR诊断方法,通过对75份牛血液样本检测,检出率为72%(54/75)。该方法具有特异性好、敏感性强等优点,可用于牛瑟氏泰勒虫病的诊断和流行病学调查。

吉林省部分地区马梨形虫病的流行病学调查

为了解吉林省部分地区马梨形虫病流行情况,以血液涂片染色镜检虫体的方法对吉林、延边、通化3个地区的130匹马进行了马梨形虫病的流行病学调查。结果表明,以上3个地区马梨形虫感染率分别为12.50%,26.09%,9.09%,其中以延边地区流行较为严重;3个地区流行的马梨形虫均以马巴贝斯虫为主。通过调查,吉林省是马梨形虫病的流行地区。

表达牛源犬新孢子虫NcSRS2基因重组腺病毒的构建及免疫原性分析

为构建牛源犬新孢子虫NcSRS2基因重组腺病毒,并分析其免疫原性,PCR扩增牛源犬新孢子虫Nc-SRS2基因,构建克隆质粒pMD18-T-NcSRS2、重组腺病毒穿梭质粒pCR259-NcSRS2及表达质粒Transpose-Ad-NcSRS2,脂质体介导转染QBI-HEK293细胞,包装重组腺病毒Ad5-NcSRS2,PCR检测重组腺病毒NcSRS2基因,IFAT和Western blotting检测NcSRS2基因在QBI-HEK293细胞中的表达,测定病毒滴度后,收集病毒液免疫BALB/c小鼠,间接ELISA检测小鼠血清IgG抗体水平。结果显示,扩增的牛源犬新孢子虫NcSRS2基因大小为1 227bp,与GenBank中发表的NcSRS2(AF061249)核苷酸序列相似性为99%;重组腺病毒Ad5-NcSRS2在293细胞中包装成功,表达蛋白的相对分子质量为43ku,具有较好的反应原性;测得重组腺病毒Ad5-NcSRS2滴度为109 TCID50.mL-1,间接ELISA检测二免后3周BALB/c小鼠血清中IgG抗体效价达1∶2 048。本研究成功构建了具有良好免疫原性的重组腺病毒Ad5-NcSRS2,为牛源犬新孢子虫NcSRS2基因重组腺病毒载体疫苗的研制奠定了基础。

牛瑟氏泰勒虫P23和P33表面蛋白双基因融合表达载体的构建及原核表达

为探索牛瑟氏泰勒虫的表面蛋白基因融合产物作为双价疫苗的可行性,以牛瑟氏泰勒虫基因组DNA为模板,通过重叠延伸拼接聚合酶链式反应(SOE-PCR)把P23和P33表面蛋白基因连接一起,2个基因之间插入一个linker(Gly4Ser)3,经EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切,获得1151bp的双基因融合片段,克隆于表达质粒pGEX-4T-1中,构建了双基因重组表达载体pGEX-4T-P23-P33,转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导,表达出预期大小70.0ku的融合蛋白。Western blot检测结果显示,该蛋白与牛瑟氏泰勒虫抗血清呈阳性反应,表明融合蛋白具有反应原性,为进一步研究此融合蛋白作为疫苗候选成分提供了理论依据。

吉林省部分地区黄牛新孢子虫病的流行病学调查

为了解吉林省黄牛新孢子虫病的流行情况,用重组蛋白GST-NcSAG1作为ELISA诊断抗原,对吉林省4个地区153份黄牛血清样本进行了新孢子虫病的流行病学调查。结果梅河、舒兰、珲春、双阳地区黄牛的新孢子虫阳性率分别为4.55%,7.14%,10.53%,16.67%。调查结果表明,吉林省部分地区黄牛群中存在犬新孢子虫的感染。

猪弓形虫病的实验室诊断与治疗

[目的]对猪场发生弓形虫的病例进行诊断和治疗,并提出防治措施。[方法]通过猪的临床检查、脏器的剖检变化观察、病料的染色镜检和PCR方法对疑似弓形虫病进行诊断。对病猪采用复方磺胺嘧啶钠治疗,对全群猪口服磺胺脒预防。[结果]通过病猪的临床症状、剖检变化确定为弓形虫病,染色镜检能观察到虫体,通过PCR扩增出病猪脏器中弓形虫的特性条带。[结论]复方磺胺嘧啶钠能控制该猪场弓形虫病的病情。

驽巴贝斯虫PCR检测方法的建立及应用

根据驽巴贝斯虫BC-48基因序列,设计并合成1对特异性引物,建立了驽巴贝斯虫PCR检测方法。试验扩增出610 bp的基因片段,其序列与GenBank上驽巴贝斯虫BC-48基因同源性为96.7%。而对新孢子虫、弓形虫、马巴贝斯虫的基因组DNA没有扩增带出现。对驽巴贝斯虫基因组DNA的最小检测量为2.812 fg/μL。通过对35份临床样品的检测,阳性率为20%。同时与血液涂片染色镜检进行了比较,结果表明,PCR检测方法准确、敏感、特异。

驽巴贝虫BC-48基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

采用PCR方法扩增驽巴贝虫吉林分离株BC-48基因片段,将扩增产物与pGEM-T Easy载体连接,重组质粒经PCR、单酶切鉴定后测序;构建BC-48的重组pGEX-4T-2表达载体,经IPTG诱导表达后,进行SDS-PAGE、Western-blotting分析。结果显示,克隆的BC-48基因片段长610 bp,含有一个570 bp的开放阅读框,编码189个氨基酸,与GenBank中USDA株(U46551)的同源性为96.7%;表达的融合蛋白为45 ku,能被驽巴贝虫阳性血清识别;表明该融合蛋白具有较好的反应原性。