白蜡虫蜡酯合酶在昆虫细胞Sf9中的表达

[目的]本研究欲利用Bac-to-Bac表达系统,在Sf9细胞中表达WS。[方法]将WS编码序列克隆到质粒p FastBac^(TM)HT B后,转化大肠杆菌DH10Bac^(TM),经抗性和蓝白斑筛选,获得重组杆粒r Bacmid/Epel WS。将r Bacmid/EpelWS转染Sf9细胞。[结果]免疫荧光标记检测表明:WS在受感染细胞的细胞质中表达。[结论]本研究成功表达了白蜡虫WS,为白蜡虫WS的生化特性研究奠定了基础。

白蜡虫蜡腺结构特征及其泌蜡的生态适应性

【目的】观察性二型性的白蜡虫Ericerus pela的蜡腺结构特征,探究其泌蜡对雌雄虫生态适应性的意义。【方法】在野外调查各发育阶段白蜡虫在寄主植物上的分布及泌蜡特征;在实验室用电子显微镜观察白蜡虫蜡腺结构及其分泌蜡丝的形态;通过石蜡切片分析雌雄虫表皮厚度;通过转录组数据结合白蜡虫泌蜡及表皮增厚的规律分析雌雄虫泌蜡量和几丁质合成的差异。【结果】在白蜡虫体表共发现6种蜡腺,其中四格腺为1龄雄若虫特有,十格腺为雌成虫特有,2龄雄若虫全身布满管腺这一白蜡虫的主要雄性产蜡器官,表皮五格腺、刺腺和肛门腺是各龄期所共有。雄虫有更多的蜡腺种类和数目,雌若虫的表皮厚度比雄若虫的厚将近35%。蜡酯合成关键酶脂酰辅酶A还原酶(fatty acyl-CoA reductase)基因far在雄成虫中表达量更高,几丁质合成关键酶几丁质合成酶(chitin synthase)基因cs在雌成虫中表达量更高。【结论】白蜡虫雌雄虫泌蜡差异显著,两性蜡腺的种类和数量与其不同的生态适应性对策相关。雄虫具有避光的生态习性,主要通过分泌一层蜡丝覆盖身体,保护雄虫在蜡被下完成变态过程。雌虫喜光,泌蜡少,通过增加表皮厚度的方式来适应环境,雌虫泌蜡是为了保证呼吸通畅,防止排泄的蜜露反流和微生物入侵,保护卵不被捕食,避免卵块粘连和减缓外力对卵的冲击。

页岩气不稳定渗流压力传播规律和数学模型

利用稳定状态依次替换法,研究了页岩基质储集层内压力扰动的传播规律,得到动边界随时间变化的关系,考虑解吸、扩散、滑移作用及动边界的影响,建立了页岩气不稳定渗流数学模型。采用拉普拉斯变换,求解了内边界定产、外边界为动边界条件下的不稳定渗流压力特征方程。结合中国南方某海相页岩气藏储集层参数,应用MATLAB编程,计算分析了页岩气不稳定渗流压力特征及其影响因素。研究表明:页岩气开采过程中,压力传播具有动边界效应,动边界随时间延续向外传播,且传播速度逐渐减慢;动边界使压力传播速度变慢,储集层压力下降减缓;页岩气解吸使压力传播速度减慢,地层压力下降减缓;扩散系数越大,地层压力下降越慢,且扩散系数影响逐渐减小。在气藏开采过程中,扩散、滑移对产气量贡献逐渐增加,占主要地位;渗流及解吸对产气量贡献逐渐减小后趋于平稳。

复杂缝网页岩压裂水平井多区耦合产能分析

针对页岩储层水平井压裂开发中复杂缝网形态、纳微米孔隙—复杂缝网—井筒多尺度渗流规律认识不清等问题,开展了针对性的研究:(1)通过巴西劈裂实验,诱导压裂缝的产生;(2)通过X射线CT扫描,观测岩样内部压裂缝形态,测得压裂缝开度;(3)结合压裂缝形态描述和气体在基质—复杂缝网—井筒中的渗流机理,在多尺度统一渗流模型的基础上,建立考虑扩散、滑移及解吸的水平井单段压裂改造产能方程;(4)考虑多级压裂区干扰及水平井筒压降,建立页岩储层多级压裂水平井产能预测模型。研究结果表明:(1)压裂缝形态为复杂网状缝;(2)测得压裂缝开度为4.25~453.00μm,平均为112.00μm;(3)不同缝网形态下页岩气表现出不同非线性渗流规律;(4)随着重改造区裂缝密度、重/弱改造裂缝分布范围的增大,产气量逐渐增加,压裂段间缝网渗流区域发生干扰,产气量增加幅度减小;(5)模拟水平井筒长1 500 m、重度改造区缝网半长100 m时,压裂10级产能效果最好。结论认为,需要合理地控制压裂程度、优化裂缝参数,才能为页岩气压裂优化设计等提供技术支撑。

白蜡虫热激蛋白序列分析

[目的]了解白蜡虫泌蜡高峰期所表达的热激蛋白及其序列特征。[方法]从白蜡虫转录组数据库筛选获得hsp10、hsp20、hsp40、hsp60、hsp70、hsp90基因序列,进行序列联配和进化树分析,并对hsp40、hsp60、hsp90基因在不同温度下mRNA相对表达量情况进行荧光定量PCR检测。[结果]从白蜡虫转录组数据库中共筛选出32条hsp基因序列,序列分析发现它们与目前已报道的序列具有很高一致性,大部分含有保守区域和特征序列,能够与同目昆虫基因聚为一支。hsp40、hsp60、hsp90基因均能被温度诱导。[结论]在白蜡虫泌蜡高峰期共鉴定到32个热激蛋白非重复序列基因(unigene):hsp10 unigene 3个,hsp20 unigene 1个,hsp40 unigene 11个,hsp60 unigene 1个,hsp70 unigene 13个,hsp90 unigene 3个。

干扰Mig-6基因表达对非小细胞肺癌EGFR信号通路的影响

目的:探讨干扰丝裂原诱导因子-6(Mig-6)基因表达对非小细胞肺癌表皮生长因子受体(EGFR)信号通路的影响。方法:A549、H1650细胞系均分为阴性对照组(si-NC组)和阳性实验组(si-Mig-6组),si-Mig-6组采用特异性小干扰RNA(siRNA)干扰Mig-6表达,si-NC组仅加入不含质粒的空载体,转染后采用MTT法检测细胞增殖能力,检测各组细胞侵袭能力和EGFR、ERK、AKT的蛋白及mRNA表达水平。结果:siRNA转染72 h后,si-Mig-6组Mig-6 mRNA及蛋白表达均显著低于si-NC组(P<0.05),细胞增殖能力显著高于siNC组,细胞侵袭能力亦显著高于si-NC组(P<0.05)。Mig-6对EGFR信号通路具有负向调控作用,干扰Mig-6表达,si-Mig-6组EGFR、细胞外调节蛋白激酶(ERK)、丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(AKT)蛋白及mRNA表达均显著高于si-NC组(P<0.05)。结论:干扰Mig-6表达能够增强非小细胞肺癌增殖、侵袭能力,其可能通过对EGFR通路的负向调控而实现这一生物学功能,Mig-6有望成为治疗非小细胞肺癌一个潜在基因靶点。

白蜡虫雄虫真蛹转录组分析

[目的]蛹期对于白蜡虫雄虫发育和交配具有重要意义,但目前缺乏对于白蜡虫真蛹基因转录情况的分析,本研究旨在获得白蜡虫真蛹转录组数据,了解其转录组特征。[方法]采用Illumina Hi Seq 2000进行高通量测序,并进行生物信息学分析;采用荧光定量PCR(qRT-PCR)检测3个热激蛋白基因(hsp)在不同虫态中的表达动态。[结果]共获得63 957条unigene、63 272个开放阅读框(ORF)、9 561个SSR分子标记,unigene平均长度674 bp,共有14 327条unigene获得了注释,Gene Ontology(GO)注释和Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes(KEGG)注释分析表明,很多基因参与的功能与白蜡虫蛹期的生理特征吻合。[结论]该转录组数据为白蜡虫基因功能鉴定和蛋白组学分析研究奠定了数据基础。

基于对浙江省“造地筑城”现象的解析探讨新城的空间形态设计

浙江省城市化水平较高,其山多平地少的地理现状使土地资源日趋紧张,限制了城市的快速发展。而滩涂资源的丰富和围垦历史的悠久,使造地筑城成为缓解土地资源供需矛盾的有效手段。近几年,沿海7个城市的此类新城在规划设计中都出现了新的特点——用地性质均为城市建设用地,这可能预示着中国新一轮城市规划与城市设计理论与实践的特色。本论文通过对现阶段浙江沿海县市造地筑城运动的实例研究,梳理新城建设之于城市发展的作用,并探讨在城市化进程中造地筑城全面开展但体系化的理论研究仍相对滞后这一背景下,新城建设与实践中城市空间形态将如何营造的问题。

基于16S测序分析白蜡虫二龄雌雄若虫共生菌的多样性分析

[目的]探明白蜡虫二龄雌雄若虫共生菌的种类和结构。[方法]利用高通量测序技术,对白蜡虫二龄雌雄虫16SrRNA的V3-V4区进行高通量测序,使用Uparse软件对有效标签进行聚类,使用Mothur方法与SILVA的SSUrRNA数据库进行物种注释,分析雌雄间共生菌物种丰度及多样性的差异。[结果]共得到了1 798 646条有效标签,以97%相似度为标准进行聚类分析,得到1 334个OTUs,其中,有14个门,29个纲,60个目,109个科,165个属,55个种得到注释。与其他昆虫明显不同,白蜡虫二龄若虫中立克次氏体属为优势菌(雌85.740%,雄95.462%),缺乏布赫纳氏菌和沃尔巴克氏体。[结论]白蜡虫与其它昆虫的共生菌有很大差异,立克次氏体在白蜡虫二龄若虫中占绝对优势,具有固氮作用的根瘤菌目和芽孢杆菌目、能合成类胡萝卜素的鞘脂单胞菌目为次优势菌,在共生菌中占有一定比例。白蜡虫若虫共生菌独特的现象可能与白蜡虫独特的生物习性、生态学特征和营养相关。

白蜡虫蜡酯合酶基因cDNA全长克隆及原核表达

白蜡虫（Ericerus pela）是我国特有的资源昆虫,泌蜡是白蜡虫二龄雄虫最为特化的性状[1]。白蜡虫分泌的白蜡在食品、医药、纺织等行业具有重要的经济价值[2]。白蜡的主要成分是26酸26酯[3],已有研究表明,蜡酯的生物合成在动植物中存在保守途径[4]。蜡酯生物合成的第一步由脂酰辅酶A还原酶催化脂酰辅酶A转化为脂肪醇,第二步由蜡酯合酶（WS）催化脂肪醇和脂肪酸的酯化反应[5]。

两种接种方式下角倍蚜虫瘿对寄主盐肤木枝叶生长的影响

[目的]明确两种接种方式(自然迁飞和人工挂袋)下角倍蚜虫瘿的数量和分布及其对寄主盐肤木枝叶生长的影响。[方法]在自然迁飞和人工挂袋形成虫瘿的盐肤木林内,按随机区组设计设置样地,在样地内随机选取有虫瘿树和无虫瘿树,分别测量和统计盐肤木及虫瘿的生长指标,采用方差分析虫瘿对盐肤木生长的影响。[结果]在自然迁飞和人工挂袋两种接种方式下,盐肤木单株虫瘿数没有显著差异。但人工挂袋时,单片复叶的平均虫瘿总体积为170.92±14.85 cm^3、小叶总面积为616.26±32.73 cm^2,显著高于自然迁飞形成虫瘿的总体积85.82±9.40cm^3和小叶总面积482.81±28.51 cm^2。表明人工挂袋接种可以增加虫瘿的总体积,从而提高角倍产量;同时,较大体积的虫瘿还促进了盐肤木小叶的生长,使小叶面积增大。[结论]角倍蚜虫瘿对寄主盐肤木的枝叶生长具有促进作用,且这种生长促进与虫瘿的体积呈正相关。与自然迁飞接种相比,人工挂袋接种更能发挥盐肤木的生长和结倍潜力,提高角倍产量。

泮托拉唑治疗消化性溃疡合并上消化道出血的临床效果及不良反应率研究

研究泮托拉唑治疗消化性溃疡合并上消化道出血患者的临床效果。方法:选取80例2020年3月至2021年12月于我院治疗的消化性溃疡合并上消化道出血患者;根据本组患者入院日期单双号的原则将其分为对照组和观察组;各40例;分别实施奥美拉唑治疗和泮托拉唑药物治疗;治疗结束后;评价两组治疗效果;详细记录两组各治疗指标;统计两组治疗期间出现的不良反应;检测两组治疗后空腹状态下胃液pH值并比较。结果:观察组治疗效果(97.50%)较对照组(77.50%)高;(P<0.05);在治疗指标方面;与对照组相比较,观察组黑便次数、呕血次数、出血量均更少;止血时间和住院时间更短;(P<0.05);与对照组相比较;观察组PH值<4占比更高;(P<0.05);观察组不良反应(2.50%)较对照组(22.50%)低;(P<0.05)。结论:临床上对消化性溃疡合并上消化道出血患者应用泮托拉唑治疗,效果显著,建议推广。

成人支气管扩张症的临床特点

目的分析成人支气管扩张症的临床特点,并探索不同影像学类型的差异。方法选取从2011年9月至2014年8月,于山东省2家三甲综合性医院收治、经高分辨率CT确诊为支气管扩张症的成人患者313例。分析其病因、临床表现、影像学、肺功能及痰培养等,并比较不同影像学类型的临床表现的差异。结果特发性(217例,69.3%)是支气管扩张症最常见的病因,其次为结核后(57例,18.2%)。最常见的病变部位为左肺下叶(219例,70.0%)。咳嗽(296例,94.6%)、咯痰(285例,91.1%)、咯血(127例,40.6%)及湿罗音(195例,62.3%)是支气管扩张症的特征表现。218例(69.6%)患者的肺功能异常,最常见的是阻塞性通气功能障碍(136例,62.4%)。144例(46.0%)患者的痰培养阳性,最常见的病原菌为铜绿假单胞菌(106例,73.6%)。囊状支气管扩张症患者更易出现咯痰、呼吸困难、发热及乏力症状(P均<0.001)。结论特发性支气管扩张症最常见,咳嗽、咯痰、咯血及固定湿罗音是支气管扩张症的特征表现,囊状支气管扩张症的临床表现较严重。

含微裂缝页岩储层渗流模型及压裂井产能

根据页岩气储层纳微米孔隙和微裂缝结构特征,建立含微裂缝表面层基质-裂缝双重介质球形模型.综合考虑扩散和滑移对页岩气产能的影响,利用Langmuir等温吸附方程描述页岩气的解吸吸附,通过Laplace变换和Stehfest数值反演,得到页岩气藏压裂井定产和定压条件下的井底流压和产量的解析解,并进行页岩气藏压裂井产能预测及影响因素分析.结果表明:微裂缝是页岩气基质微观孔隙和宏观裂缝运移的主要渗流通道;微裂缝的渗透率越大和长度越长,页岩气井产量越大.

1975—2009年台风导致死亡的时间趋势分析

目的分析全国受台风影响省份1975—2009年台风导致死亡的时间趋势,为有效制定台风应对措施提供科学依据。方法台风灾害的数据来自《中国气象灾害大典》和《全国气候影响评价》,将受台风影响省份按台风（首次登陆为12~13级）频次分为高发（〉10次）、中发（6~9次）和低发（〈5次）共三类省份,5年为周期统计死亡率。采用线性趋势卡方检验对全国1975—2009年台风导致平均死亡率随时间变化的趋势进行分析。结果台风高发省份共6个,其中广东、浙江、福建、海南、广西台风导致平均死亡率的时间趋势为降低（P〈0.05）;台风中发和低发省份分别为3和7个,安徽省为上升,山东省下降（P〈0.05）,上海市的时间趋势不能确定。其他受台风影响地区由于死亡数据较少,时间趋势不能确定。全国台风所致死亡率也呈总体下降趋势（P〈0.05）。结论全国1975—2009年台风导致死亡的时间趋势总体上是降低的,因个别年份发生强度相当大的台风故造成部分地区出现时间趋势的波动。

山东地区呼吸科医师对支气管扩张症诊治认知的现状调查

目的 评估呼吸科医师对支气管扩张症诊治的认知现状,为推进支气管扩张症管理策略提供参考依据。方法 2020年10月至2022年6月对山东地区143家医院的呼吸科医师围绕“支气管扩张症的诊治”进行问卷调查,比较各级医院及各级职称的呼吸科医师对支气管扩张症的病因鉴别、疾病严重性评估、诊断和治疗等各个方面的认知现状。结果 共608名呼吸科医师完成问卷调查,其中24.7%的医师从未进行体液免疫检测,仅168名(27.6%)医师了解支气管扩张症严重程度评分。三级医院的医师对支气管扩张症病因鉴别以及铜绿假单胞菌清除治疗的认知水平高于二级医院的医师(OR=1.952,95%CI:1.253~3.041,P=0.003;OR=2.495,95%CI:1.543~4.035,P<0.001)。阅读支气管扩张症指南的医师对支气管扩张症病因鉴别以及疾病严重程度评估的认知水平高于未阅读指南的医师(OR=1.725,95%CI:1.027~2.897,P=0.039;OR=2.067,95%CI:1.361~3.138,P=0.001)。结论 山东地区呼吸科医师(尤其二级医院医师)对支气管扩张症管理策略的认知水平仍需加强,需继续推广病因筛查及精简的疾病严重程度评估方法。

页岩气渗流规律测试条件研究

为了确定适于测试页岩气渗流规律的条件,实验室采用"压差—流量法"并使用真实气体针对中国南方海相页岩气储层岩心,分别按照定围压和定净围压2种方案开展研究,并分析围压施加方式对测试结果的影响。结果表明:无论是采用定围压方式还是定净围压方式实验,渗流曲线分为曲线段和拟线性段,并表现出非线性渗流的特征,其分界点分别为1MPa和1.3MPa,渗透率伤害率平均值分别为52.41%和40.56%,滑脱效应的影响也不相同。定围压方式下,注入压力变化通常会引起应力敏感,这与实际储层的开采过程不符,在较低有效应力下,滑脱效应的影响远远超过有效应力的影响;定净围压方式下,可测得完整的渗流规律曲线,用于模拟实际储层一段时期内的渗流状况,围压效应对气体渗流效果影响较小。综合分析认为定净围压方式测定页岩气渗流规律最好。

抗菌药联合外排泵抑制剂对铜绿假单胞菌耐药突变选择窗的影响

目的：探讨抗菌药联合外排泵抑制剂（ EPI）对铜绿假单胞菌耐药突变选择窗的影响。方法选择铜绿假单胞菌标准株，测定美罗培南、头孢他啶、阿米卡星、环丙沙星4种药物单药最低抑菌浓度（ MIC）；棋盘格法测定联合利血平、奥美拉唑、阿奇霉素、羰基氰化物间氯苯腙（ CCCP ）、苯丙氨酸-精氨酸-β-萘胺（PAβN）5种EPI抗菌药物的MIC。琼脂平板二倍稀释法测定抗菌药物单药以及联合EPI的防耐药突变浓度（MPC），计算相应的选择指数（MPC/MIC）；分别测定美罗培南、头孢他啶、环丙沙星联合阿米卡星，阿米卡星联合环丙沙星后的选择指数。在临床株中检测美罗培南、头孢他啶、阿米卡星、环丙沙星单药及与CCCP联合后的MIC、MPC及选择指数。结果在标准株，美罗培南、头孢他啶、阿米卡星、环丙沙星单药的选择指数分别为＞32，＞32，16，16；与利血平联合后选择指数分别为16、16、16、8；与奥美拉唑联合后分别为16、32、16、8；与阿奇霉素联合后分别为8、16、16、8；与CCCP联合后分别为8、8、16、8；与PAβN联合后分别为8、16、16、8。美罗培南、头孢他啶、环丙沙星分别与阿米卡星联合后的选择指数为4、4、8。阿米卡星与环丙沙星联合后阿米卡星的选择指数为4。在临床株，环丙沙星联合CCCP后选择指数较单药显著降低。结论除阿米卡星外，美罗培南、头孢他啶、环丙沙星联合EPI可明显降低MIC及MPC，环丙沙星联合CCCP可缩小突变选择窗，有利于减少耐药突变体的产生。

页岩气多尺度复杂流动机理与模型研究

页岩气储层纳微米孔隙、裂缝结构复杂,存在多尺度流动,气体的流动规律不同于常规气藏.本文对多孔介质内气体流动进行了研究,利用努森数划分不同尺度下气体流态,阐明了不同区域的流动机理和流动特征;综合考虑达西渗流、滑移扩散效应、井筒附近高速非达西效应等多重非线性效应,建立了页岩气储层多尺度统一流动模型.引入页岩气储层基质-压裂缝耦合两区模型,建立了页岩气储层压裂井定压条件下的两区压力分布和产能预测方程,并结合生产实例进行了参数敏感性分析.结果表明:随着滑移扩散系数、分形系数、压裂半径的增大,页岩气井产能增加,且增加幅度减小;考虑高速非达西效应较不考虑高速非达西效应时,页岩储层产能偏低,且高速非达西效应的影响小于滑移扩散对产能的影响.该模型为体积压裂页岩气产能预测及开发指标优化提供了理论依据.

地塞米松增强烟曲霉孢子侵袭力的研究

目的探讨地塞米松预处理A549细胞后对孢子侵袭力的影响;比较黏附和内化(细胞内)孢子之间的数量关系,为临床资料提供参考依据。方法选自2013年1月-6月由医院微生物室鉴定的19株临床菌株,在不同浓度地塞米松条件下建立烟曲霉菌孢子侵袭上皮细胞的体外模型,应用Graphpad Prsm对内化组与黏附组侵袭率进行χ2分析。结果不同浓度地塞米松预处理A549细胞4h后,各组烟曲霉孢子的侵袭力无明显差异,而预处理24h后,25mg/L地塞米松组孢子侵袭力(26.44±2.45)%高于5mg/L组(23.56±3.16)%、1mg/L组(19.81±3.63)%和0mg/L组(18.17±2.77)%,除0mg/L组和1mg/L组之间侵袭力无差异外,其余任意两组侵袭力差异均有统计学意义(P<0.05);27.2%黏附孔子进入细胞(P<0.05)。结论烟曲霉孢子的侵袭力与地塞米松作用的时间和浓度成正相关,侵袭性曲霉病主要由黏附孢子引起。